江長綠,劉結清,陳飛宇,江文力,黃昊川,杜利軍

廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院檢驗科,廣東廣州 510800

降鈣素原(PCT)為無激素活性的降鈣素前肽物質，在內毒素等細胞因子誘導下，2～3 h開始增加[1-3]，6～8 h體內水平快速升高，12～48 h到達峰值,2～3 d后恢復正常，為感染性疾病診斷及鑒別診斷的有效指標[1-3]。當嚴重細菌、真菌、寄生蟲感染以及膿毒癥和多臟器功能衰竭時，其在血漿中的水平升高，自身免疫性疾病、過敏和病毒感染時PCT水平不會升高。PCT水平升高的幅度與細菌感染的嚴重性有關[4]。PCT>0.5 μg/L時，應考慮患者是否具有發(fā)展為嚴重膿毒癥或敗血癥休克的風險[5-6]。潛在細菌感染的成功治療往往伴隨著PCT水平的降低，恢復正常的半衰期為24 h[7]。常見的檢測方法有時間分辨熒光免疫法[5](TRFIA)、化學發(fā)光法(CIIA)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、免疫層析法(ICT)，而TRFIA又有均相TRFIA與非均相TRFIA之分，均相TRFIA簡化了常規(guī)TRFIA檢測中“沖洗”的步驟，既減少了反應體系誤差，又使得整個反應過程更為快捷。本研究依據美國臨床實驗室標準化協(xié)會(CLSI)EP系列文件及原中華人民共和國衛(wèi)生部相關文件要求，全面評價賽默飛KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析儀的檢測性能，從而為臨床感染性病例的診治提供更為有效的數據支持。

1 材料與方法

1.1材料來源 參考區(qū)間驗證標本:選取2021年3-10月本院體檢中心體檢血常規(guī)標本80份(其中男性40份、女性40份，年齡1～69歲，白細胞與C反應蛋白均正常，排除感染性疾病和其他急慢性疾病)，經2 500×g離心力離心10 min后用于參考區(qū)間的驗證。其余實驗標本均為本實驗室完成常規(guī)檢測后的剩余標本，對患者無任何損害，且試驗結果只用于比對研究，不作為輔助診斷依據，不會給受試者帶來任何風險[5]。

1.2儀器與試劑 評價儀器為賽默飛KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析儀,檢測系統(tǒng)已獲得國家市場監(jiān)督管理總局認可，校準品批號LOT:25044/6A，質控品批號LOT:25038B,試劑批號LOT：25204C；比對儀器為雷度AQT90FLEX 免疫分析儀，校準品批號LOT:19605，質控品批號LOT:18426/17816,試劑批號LOT：19605。用于正確度驗證的參考物質水平為28.7 μg/L。本評價所有試驗均嚴格按照儀器標準化操作程序文件操作，試驗前所有質控均參照《臨床實驗室定量測定室內質量控制指南：GB/T20468-2006》文件執(zhí)行[8],且均在控。

1.3方法

1.3.1精密度驗證 按照CLSI EP15-A2文件[9]要求，使用2個水平(低水平1和高水平2均接近醫(yī)學決定水平)的患者血漿標本制備的質控血漿，每個水平各分裝5管，凍存于-20 ℃以下，每天各解凍1管，上機重復測定3次，每次間隔2 h，共測5 d。分別計算批內和批間精密度的變異系數(CV)，根據國家臨床檢驗中心室間質評標準，檢測系統(tǒng)不精密度CV<1/4系統(tǒng)總誤差(TEa)(±7.5%)。

1.3.2準確度驗證 按照《能力驗證規(guī)則：CNAS-RL02:2018》[10]要求,本實驗室參加國家臨床檢驗中心2021年4月組織的第一次PCT室間質評，將其發(fā)放的5份室間質評物質在評價儀器上進行檢測，以室間質評回報結果的靶值作為標準，驗證該實驗室檢測結果是否在允許范圍內。

1.3.3正確度驗證 根據《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證：WS/T492-2016》[11]使用廠家提供的具有溯源性及互換性的正確度驗證物質(參考物質水平為28.7 μg/L，不確定度為1.6)，在3～5 d內每批進行2次重復測定，然后計算均值、標準差、合成標準不確定度,以及95%CI等驗證指定值。

1.3.4稀釋度驗證 選取40份接近檢測線性上限的患者標本，水平介于40.83～48.15 μg/L，在評價儀器上分別進行50倍和100倍稀釋檢測，檢測的結果與原始結果進行比較，計算相應偏倚，要求小于1/3TEa(10%)。

1.3.5線性范圍驗證 依據CLSI EP6-A文件[12]，準備水平為0.02～50.00 μg/L的兩個低水平標本(L)和高水平標本(H)為母液(5 mL)，按(1∶L,2∶0.80 L+0.20 H,3∶0.60 L+0.40 H,4∶0.40 L+0.40 H,5∶0.20 L+0.80 H,6∶H)配成6個梯度的線性測量標本，每份為500 mL,每個水平標本分別上機檢測2次，計算均值，繪制線性擬合曲線，要求R2≥0.95。

1.3.6干擾物驗證 依據CLSI EP7-A2文件[13]，在血漿PCT低水平(接近臨界值下限0.5 μg/L)和高水平(接近醫(yī)學決定點2.0 μg/L)標本中加入臨床常見干擾物質(清蛋白1 g/dL、未結合膽紅素 20 mg/dL、三酰甘油22 mg/mL、洗滌紅細胞配制血紅蛋白500 mg/dL)，并檢測干擾(為不影響臨床誤診誤治，以干擾<±10%為驗收標準)。

1.3.7攜帶污染率驗證 依據《臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質量要求：WS/T406-2012》[14]要求,取高水平血漿標本,重復測定3次,分別獲得結果H1、H2、H3，再取低水平血漿標本，重復測定3次，分別獲得結果L1、L2、L3，代入公式(L1-L3)/(H3-L3)×100%,計算其攜帶污染率。

1.3.8參考區(qū)間驗證 參照《醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則在臨床化學檢驗領域的應用說明：CNAS-CL02-A003:2018》[15]要求,因PCT水平在人群中呈偏態(tài)分布，故參考區(qū)間采用P95表示更符合臨床，檢測健康人群血漿PCT水平，計算其P95。

1.3.9不同儀器間比較 依據《醫(yī)療機構內定量檢驗結果的可比性驗證指南：WS/T 407-2012》[16]要求，采用本實驗室在用的雷度AQT90FLEX 免疫分析儀作為對照機型，將其與賽默飛KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析儀同時檢測80例血漿標本，按試劑說明書對PCT不同水平(<0.5、0.5～<2、2～10 μg/L和>10 μg/L)進行臨床意義的劃分，4個水平的血漿標本數均為20例，對賽默飛KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT試劑盒和對照試劑檢測的2組數據結果進行相關性統(tǒng)計評價。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件進行數據分析。計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；線性及比對數據進行線性回歸分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1精密度驗證結果 按照CLSI EP15-A2文件要求，2個接近醫(yī)學決定水平的自制質控血漿的批內精密度的CV分別為0.51%、3.47%，批間精密度的CV分別為1.66%、5.14%，均小于國家臨床檢驗中心室間質評標準±7.5%(1/4TEa)，見表1。

表1 PCT精密度驗證結果(血漿)

2.2準確度驗證結果 2021年4月上報的5份標本室間質評結果均通過國家臨床檢驗中心室間質評標準，檢測結果均在允許范圍內,成績?yōu)?00%，見表2。

表2 PCT準確度驗證結果(血漿)

2.3正確度驗證結果 均值為28.11 μg/L，標準差為0.61 μg/L，臨界值為3.25 μg/L，95%CI為27.48～28.74 μg/L，指定標準差為1.6 μg/L，合成標準不確定度為1.612，測量不確定度驗證限為22.87～33.35 μg/L，驗證物質的水平均落在以上驗證區(qū)間內，儀器正確度通過驗證。

2.4稀釋度驗證結果 40份接近檢測線性上限的患者標本，稀釋50倍偏倚為±7.2%,稀釋100倍偏倚為±7.4%，結果偏倚均<±10%(1/3TEa)。

2.5線性范圍 通過具有梯度水平的血漿標本進行驗證，得出回歸方程Y=1.000X-0.708，R2=0.998，表明檢測范圍在0.02～50 μg/L 內呈線性。

2.6干擾物驗證結果 常見潛在的內源性干擾物對檢測結果的影響均<±10%，見表3。

表3 常見潛在的內源性干擾

2.7攜帶污染率 賽默飛KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析儀的攜帶污染率為0.03%，見表4。

表4 賽默飛KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析儀攜帶污染率測定結果

2.8參考區(qū)間驗證 檢測80份健康人群的PCTP95為0.064 μg/L，且與性別無關，男性與女性的結果差異無統(tǒng)計學意義(P<0.05)，95%CI相近重疊，見表5。

表5 健康人群的PCT P95與95%CI

2.9實驗室不同儀器結果比較 賽默飛KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析儀與雷度AQT90FLEX免疫分析儀檢測結果具有良好的相關性(R2=0.995)，線性回歸方程Y=0.896X+0.055，在醫(yī)學決定水平0.5 μg/L和2.0 μg/L時相對偏差分別為8.83%和7.95%,均<±10%(CLIA88/2)。

3 討 論

PCT自上世紀90年代問世以來一直備受臨床關注，不僅在細菌(特別是革蘭陰性菌)感染、膿毒血癥等方面為臨床提供有效、高特異度的參考依據，同時，在上、下呼吸道感染，主要在社區(qū)獲得性肺炎(CAP)、急性支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)等疾病中，為鑒別是否存在細菌感染和可疑感染提供有力參考，有效防止抗菌藥物濫用。PCT水平下降也是臨床治療有效的可靠反饋。正因為PCT在臨床上具有如此舉足輕重的地位，更加要求實驗室檢測方便快速，而對檢測儀器進行全面系統(tǒng)的性能驗證，才能為臨床提供準確可靠的檢測結果[17-19]。

為充分了解賽默飛KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析儀的性能，本實驗室參照一系列文件要求，對其進行全面系統(tǒng)的性能評估。本研究表明，其批內精密度CV分別為0.51%、3.47%，批間精密度CV分別為1.66%、5.14%，均小于國家臨床檢驗中心室間質評標準±7.5%(1/4TEa)，優(yōu)于ELISA(CV為7%～10%)，這與文獻[20]報道的結果一致。準確度與正確度均通過驗證，表明其能為臨床提供更加安全、準確、可靠的實驗結果。稀釋度在1∶50倍時偏倚<7.2%,1∶100倍偏倚<7.4%，可為臨床重度感染患者提供更寬的檢測范圍，充分滿足臨床需求，優(yōu)于同類型儀器(100 μg/L)。臨床常見干擾物質(清蛋白1 g/dL、血紅蛋白500 mg/dL、未結合膽紅素20 mg/dL、三酰甘油22 mg/mL)的干擾度均<±10%，表明檢測不受明顯干擾，與廠家的宣傳相符，已達到常規(guī)方法的抗干擾能力。攜帶污染率僅為0.03%，遠低于文獻[6]報道的同類型檢測儀器的0.11%，表明其特異度良好，不會產生假陽性結果而誤導臨床診療。參考區(qū)間驗證結果顯示，PCTP95水平為0.064 μg/L，因PCT水平在人群中呈偏態(tài)分布，故參考區(qū)間采用P95表示更符合臨床需求，且研究表明其無性別差異。本研究結果還表明，賽默飛KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析儀檢測結果與本科室在用的雷度AQT90FLEX 免疫分析儀具有良好的相關性(R2=0.995)，且在醫(yī)學決定水平0.5 μg/L和2.0 μg/L時相對偏差分別為8.83%和7.95%,均<±10%(CLIA88/2)。

綜上所述，結合本實驗室對賽默飛KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析儀3個月以來的使用經驗，其特別適用于大量標本的檢測，為一款自動化程度高、使用便捷、檢測快速、結果準確可靠且故障率低的PCT檢測分析儀。