■陳 博 簡晨晨 劉振華 郭鈺君 張懷勇 黃艷群 陳 文*

（1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)飼料營養(yǎng)河南省工程實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450002；2.汝州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 平頂山 467500；3.河南金錢果生物科技股份有限公司，河南 鄭州 450000）

在蛋雞的生產(chǎn)過程中，處于產(chǎn)蛋期的蛋雞會隨著日齡的增大或疾病等原因，致使產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)受到影響，最終導(dǎo)致生產(chǎn)性能降低[1]?？咕幵谛竽辽a(chǎn)中具有較好的作用效果，但其過度使用會導(dǎo)致超級細(xì)菌產(chǎn)生、動物產(chǎn)品殘留以及環(huán)境污染等[2]，嚴(yán)重威脅人類健康。益生菌類微生態(tài)制劑可以作為抗生素替代物應(yīng)用于生產(chǎn)中，其安全性高，可以優(yōu)化腸道菌群，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，促進(jìn)機(jī)體營養(yǎng)消化吸收等[3-4]。芽孢桿菌類益生菌能夠在飼料生產(chǎn)條件下保存下來，并且飼喂后對動物機(jī)體健康起促進(jìn)作用[5]。納豆芽孢桿菌是枯草芽孢桿菌屬的一種需氧型革蘭氏陽性菌，具有抗菌、助消化、調(diào)節(jié)機(jī)體代謝等作用，可在腸道上段發(fā)育并分泌各種酶和維生素，促進(jìn)小腸黏膜細(xì)胞增殖并維持正常的腸道功能[6-9]。目前，已有許多研究報(bào)道納豆芽孢桿菌作為益生菌在禽生產(chǎn)中起營養(yǎng)調(diào)控作用（例如，飼糧添加納豆芽孢桿菌可顯著提高蛋雞產(chǎn)蛋率和平均蛋重[10]等）。有關(guān)蛋雞的研究大多集中在產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)上，在孵化方面涉及相對較少。文章旨在探討納豆芽孢桿菌對350 日齡產(chǎn)蛋雞的孵化性能、蛋品質(zhì)以及血清生化指標(biāo)的影響，為納豆芽孢桿菌在蛋雞上的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用試驗(yàn)動物為350 日齡商品代海蘭褐產(chǎn)蛋雞，由河南鹿邑縣滿意禽業(yè)有限公司提供。試驗(yàn)所用納豆芽孢桿菌購于日本明治制果藥業(yè)株式會社，含量≥1×1011個(gè)/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼糧

將進(jìn)行人工授精后的350日齡商品代海蘭褐產(chǎn)蛋雞12棟（每棟約8 500只）隨機(jī)分為3組，每組4棟，每棟為1 個(gè)重復(fù)；分別為對照組（基礎(chǔ)飼糧）、100 g/t 組（基礎(chǔ)飼糧添加100 g/t納豆芽孢桿菌）和200 g/t組（基礎(chǔ)飼糧添加200 g/t 納豆芽孢桿菌），預(yù)試期7 d，正式試驗(yàn)期28 d。試驗(yàn)飼糧為參照NRC（1994）所制的粉狀配合飼料，試驗(yàn)組飼糧制備時(shí)，納豆芽孢桿菌先與載體逐級進(jìn)行充分預(yù)混合生產(chǎn)預(yù)混合飼料中間體，而后投入飼料混合機(jī)中與其余飼料原料進(jìn)行充分?jǐn)嚢杌靹?。各營養(yǎng)指標(biāo)計(jì)算時(shí)依據(jù)《中國飼料成分及營養(yǎng)價(jià)值表（第29 版）》，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平如表1所示。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)管理按照雞場既有程序進(jìn)行，每棟采用四層疊層式籠養(yǎng)方式，每籠3 只；本養(yǎng)雞場小區(qū)建有一個(gè)飼料供料塔和一個(gè)飲水塔，供自動喂料線和自動飲水線使用，每天光照恒定16 h、自然通風(fēng)，試驗(yàn)期間專人負(fù)責(zé)飼養(yǎng)，每天喂料2次（7：00、15：00）、自由飲水，進(jìn)行常規(guī)免疫以及雞舍的衛(wèi)生清理，每天16：00開始收集雞蛋，保持欄舍清潔衛(wèi)生。

1.4 孵化管理

每天收集每棟雞舍種蛋，剔除不合格種蛋，記錄每天入孵蛋數(shù)。使用青島依愛孵化器進(jìn)行孵化，自動控制溫度在38 ℃，自動控制濕度為56%，定時(shí)翻蛋，第8 天進(jìn)行第一次照蛋，挑揀出未受精蛋和血蛋，第18天進(jìn)行第二次照蛋，挑揀出死胚蛋。

1.5 樣品收集

正試期第28 天，空腹12 h 后翅下靜脈采集血液樣品5 mL，每個(gè)重復(fù)2只，3 500 r/min離心10 min，用于后續(xù)血清指標(biāo)的檢測；每個(gè)重復(fù)收集雞蛋5 枚，用于蛋品質(zhì)常規(guī)指標(biāo)的檢測。

1.6 測定指標(biāo)與方法

1.6.1 產(chǎn)蛋與孵化性能

每天準(zhǔn)確記錄每組（4 棟）產(chǎn)蛋舍內(nèi)雞群基數(shù)、產(chǎn)蛋數(shù)量、合格種蛋數(shù)、受精蛋數(shù)、孵化蛋數(shù)等，用于計(jì)算試驗(yàn)期產(chǎn)蛋雞的日產(chǎn)蛋率、受精率、孵化率等。

產(chǎn)蛋率（%）=產(chǎn)蛋總數(shù)/雞群基數(shù)×100受精率（%）=受精蛋數(shù)/入孵蛋數(shù)×100受精蛋孵化率（%）=出殼的全部雛禽數(shù)/受精蛋數(shù)×100

入孵蛋孵化率（%）=出殼的全部雛禽數(shù)/入孵蛋數(shù)×100

1.6.2 血清指標(biāo)檢測

血清樣品用于檢測總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、總膽固醇（CHO）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、鈣（Ca）、磷（P）、免疫球蛋白G（IgG）、脂多糖（LPS）的含量。其中IgG 和LPS 含量采用ELISA 法進(jìn)行測定，試劑盒分別購自江蘇科晶生物科技有限公司和南京建成生物工程研究所有限公司，其余指標(biāo)含量采用BECKMAN COULTER AU5800 全自動生化儀檢測。

1.6.3 蛋品質(zhì)檢測

電子天平測量蛋黃及蛋殼重，計(jì)算蛋黃比和蛋殼比；游標(biāo)卡尺測量長徑和短徑，計(jì)算蛋形指數(shù)；蛋殼厚度測量儀測量蛋殼厚度；多功能蛋品分析儀測定蛋重、蛋白高度、哈夫單位、蛋黃顏色等。

蛋殼比（%）=蛋殼重/蛋重×100

蛋黃比（%）=蛋黃重/蛋重×100

蛋形指數(shù)=長徑/短徑

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

各試驗(yàn)組在不同試驗(yàn)階段生產(chǎn)指標(biāo)數(shù)據(jù)使用平均值表示，其余數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010 軟件初步處理后，采用IBM SPSS Statistics 25對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，多重比較用Duncan’s 法，使用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 納豆芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋及孵化性能的影響（見圖1和表2）

表2 納豆芽孢桿菌對全試驗(yàn)階段蛋雞產(chǎn)蛋及孵化性能的影響（%）

圖1 各試驗(yàn)組在不同試驗(yàn)階段生產(chǎn)指標(biāo)的變化（0～7、7～14、14～21、21～28 d）

由圖1 可知，添加200 g/t 納豆芽孢桿菌的試驗(yàn)組各試驗(yàn)階段的受精率在數(shù)值上均高于另外兩組（見圖1b）；添加200 g/t納豆芽孢桿菌的試驗(yàn)組各試驗(yàn)階段的入孵蛋孵化率在數(shù)值上高于對照組（見圖1c）；在試驗(yàn)期的14～21、21～28 d內(nèi)，添加100 g/t 納豆芽孢桿菌的試驗(yàn)組產(chǎn)蛋率在數(shù)值上高于對照組，在試驗(yàn)期的0～7、7～14、21～28 d 內(nèi)，添加200 g/t 納豆芽孢桿菌的試驗(yàn)組產(chǎn)蛋率在數(shù)值上高于對照組（見圖1a）。

如表2所示，正式試驗(yàn)前（第0天）各組的產(chǎn)蛋率無顯著差異（P>0.05），與對照組相比，飼糧添加100 g/t和200 g/t 的納豆芽孢桿菌28 d 后產(chǎn)蛋率在數(shù)值上有上升趨勢（P>0.05），添加200 g/t 的納豆芽孢桿菌后，受精率和入孵蛋孵化率在數(shù)值上有上升趨勢（P>0.05）。

2.2 納豆芽孢桿菌對產(chǎn)蛋雞蛋品質(zhì)的影響（見表3）

表3 納豆芽孢桿菌對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由表3 可知，與對照組相比，飼糧添加100 g/t 和200 g/t 納豆芽孢桿菌對蛋雞蛋品質(zhì)指標(biāo)中的蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、哈夫單位、蛋黃比等無顯著影響（P>0.05），但兩個(gè)試驗(yàn)組的蛋重和蛋殼厚度在數(shù)值上高于對照組（P>0.05）。

2.3 納豆芽孢桿菌對產(chǎn)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響（見表4）

表4 納豆芽孢桿菌對蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

由表4 可得，與對照組相比，飼糧添加200 g/t 的納豆芽孢桿菌后，可顯著降低蛋雞血清白蛋白、低密度脂蛋白膽固醇和鈣的含量（P<0.05），顯著提高高密度脂蛋白膽固醇含量（P<0.05），血清尿素氮和總膽固醇水平具有降低趨勢，但未達(dá)到顯著水平（P>0.05）。

2.4 納豆芽孢桿菌對產(chǎn)蛋雞血清IgG 和LPS 的影響（見表5）

表5 納豆芽孢桿菌對蛋雞血清IgG和LPS的影響

由表5 可知，與對照組相比，飼糧中添加100 g/t和200 g/t 納豆芽孢桿菌蛋雞血清IgG 水平極顯著升高（P<0.01）；與對照組相比，飼糧中添加100 g/t 納豆芽孢桿菌后血清LPS在數(shù)值上略有下降，但差異不顯著（P>0.05），而添加200 g/t納豆芽孢桿菌可極顯著降低血清LPS含量（P<0.01）。

3 討論

3.1 納豆芽孢桿菌對產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋及孵化性能的影響

禽類的產(chǎn)蛋量及孵化性能是禽類養(yǎng)殖的重要生產(chǎn)指標(biāo)。舒英等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在蛋雞飲水中添加不同濃度的復(fù)合微生物制劑（主要成分為植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌等）可顯著提高受精蛋孵化率。林萌萌等[12]研究結(jié)果表明，在飲水中添加由枯草芽孢桿菌、乳酸菌等組成的微生態(tài)制劑可顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋率。李玉清等[13]研究結(jié)果顯示，在飼糧中添加益生菌制劑可提高蛋種雞的產(chǎn)蛋率，改善種蛋受精率、受精蛋孵化率等。王大一等[14]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加復(fù)合益生菌制劑后可明顯提高種鵝產(chǎn)蛋率。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在350日齡蛋雞飼糧中添加100 g/t和200 g/t的納豆芽孢桿菌對產(chǎn)蛋率及孵化性能有一定改善作用，表明納豆芽孢桿菌對提高蛋雞產(chǎn)蛋性能有一定效果。

3.2 納豆芽孢桿菌對產(chǎn)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

微生物制劑在蛋雞生產(chǎn)中有著廣泛應(yīng)用，最常使用的一類是芽孢桿菌類的微生物制劑。芽孢桿菌在生物體內(nèi)代謝過程中可以產(chǎn)生有機(jī)酸或者通過促進(jìn)乳酸菌增殖間接產(chǎn)生酸性環(huán)境，抑制有害菌生成的同時(shí)促進(jìn)鈣、磷吸收，進(jìn)而改善蛋品質(zhì)。于雷等[10]研究表明，飼糧添加芽孢桿菌制劑可顯著提高蛋雞蛋重。Fathi等[15]發(fā)現(xiàn)，日糧中添加400 g/t的枯草芽孢桿菌可顯著增加雞蛋的蛋殼厚度，并提高高溫環(huán)境下蛋殼質(zhì)量和破碎力。李福彬等[16-17]研究表明，在試驗(yàn)飼糧中添加適量的芽孢桿菌可以改善蛋雞的蛋黃顏色及哈夫單位等。蛋形指數(shù)是雞的種質(zhì)分類指標(biāo)之一，特定的雞種往往具有一定的蛋形指數(shù)，適當(dāng)?shù)牡靶沃笖?shù)可減少儲存、包裝或運(yùn)輸中破蛋和裂紋蛋的比率，且蛋形指數(shù)亦與種蛋的孵化率密切相關(guān)[18]，張春珍等[19]研究結(jié)果證實(shí)了蛋形指數(shù)在1.30～1.35范圍內(nèi)的種蛋孵化率極顯著高于蛋形指數(shù)在1.16～1.29和1.36～1.49范圍內(nèi)的種蛋孵化率。在本試驗(yàn)中，添加不同濃度納豆芽孢桿菌對蛋品質(zhì)指標(biāo)中的蛋殼強(qiáng)度、哈夫單位、蛋黃比等無顯著影響，各組的蛋形指數(shù)在1.30～1.31，均處于較高孵化率范圍內(nèi)。與此同時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果也顯示飼糧添加100 g/t 和200 g/t 納豆芽孢桿菌后雞蛋的蛋重和蛋殼厚度有上升趨勢，這對提高蛋雞生產(chǎn)中的整體效益有一定促進(jìn)作用。

3.3 納豆芽孢桿菌對產(chǎn)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

有研究報(bào)道，在飼糧中單獨(dú)添加枯草芽孢桿菌或與納豆芽孢桿菌復(fù)合添加，可以改善機(jī)體血清生化指標(biāo)[20-21]。血清中總蛋白、白蛋白等指標(biāo)的水平可以反映機(jī)體中蛋白質(zhì)的沉積和利用能力。鈣、磷在雞蛋的形成中起重要作用，是影響蛋殼質(zhì)量的主要因素。李福彬等[17]發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加2×109CFU/kg 的多黏芽孢桿菌后蛋雞血清鈣含量顯著下降。呂尊周等[22]研究發(fā)現(xiàn)，在蛋雞飼糧中添加400 mg/kg 的抗菌肽粗提物后顯著降低血清中白蛋白含量，其推測可能是產(chǎn)蛋率的提高導(dǎo)致機(jī)體蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移為蛋中的蛋白質(zhì)。本試驗(yàn)中得到與前人相似的研究結(jié)果，即在飼糧中添加200 g/t 的納豆芽孢桿菌可顯著降低蛋雞血清鈣和白蛋白含量，血清中大量鈣磷以及白蛋白轉(zhuǎn)移至雞蛋，致使該試驗(yàn)組的產(chǎn)蛋率和蛋殼厚度呈現(xiàn)上升趨勢。血清高密度脂蛋白可以將身體內(nèi)的膽固醇運(yùn)送到各個(gè)器官，以此來提高機(jī)體免疫力，預(yù)防高血脂等，低密度脂蛋白將攜帶的膽固醇堆積在血管和動脈壁上，從而造成血脂動脈粥樣硬化等。Wang 等[23]研究指出，在肥胖小鼠模型上，經(jīng)過納豆芽孢桿菌8 周的治療后，小鼠血清三酰甘油和總膽固醇水平降低。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧添加200 g/t納豆芽孢桿菌顯著提高了蛋雞血清高密度脂蛋白膽固醇水平、降低了低密度脂蛋白膽固醇水平，同時(shí)在該添加濃度下，血清總膽固醇水平也具有下降趨勢，這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了納豆芽孢桿菌的使用可能對產(chǎn)蛋雞機(jī)體健康有益。

3.4 納豆芽孢桿菌對產(chǎn)蛋雞血清IgG及LPS的影響

免疫球蛋白是一種免疫活性分子，共分為5 類，其中免疫球蛋白G的含量最高，具有抗菌、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫等作用。甄玉國等[3]研究結(jié)果表明日糧中添加復(fù)合益生菌培養(yǎng)物后可顯著提高肉仔雞血清IgG 含量。郭軍蕊等[21]指出枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖在飼糧中聯(lián)合使用可顯著提高蛋雞第1、4周血清IgG含量。王星等[6]的研究表明，在飼料中添加納豆芽孢桿菌能顯著增強(qiáng)肉雞免疫反應(yīng)。胥振國等[24]研究發(fā)現(xiàn)，在AA 肉雞飼糧中添加100 mg/kg 或150 mg/kg 的納豆芽孢桿菌提高了肉雞的免疫水平。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在試驗(yàn)第28天時(shí)，飼糧中添加100 g/t和200 g/t的納豆芽孢桿菌均可以極顯著升高蛋雞血清IgG的含量，表明益生菌的使用可以提高產(chǎn)蛋雞的免疫水平。

細(xì)菌LPS存在于革蘭氏陰性細(xì)菌外膜中，它誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，因此機(jī)體中LPS含量突然增加可能會加重機(jī)體的炎癥反應(yīng)。謝亞娜等[25]研究發(fā)現(xiàn)，大鼠血清中TNF-α、LPS 的表達(dá)下降，可以抑制大鼠炎性反應(yīng)的發(fā)生；Wang 等[26]和Tsui 等[27]的研究發(fā)現(xiàn)，益生菌的使用可以降低機(jī)體由LPS 引起的炎癥反應(yīng)。本次試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加200 g/t的納豆芽孢桿菌后極顯著降低蛋雞血清LPS的含量，從而可能減輕蛋雞炎癥反應(yīng)的發(fā)生。

4 結(jié)論

綜上所述：①飼糧中添加200 g/t的納豆芽孢桿菌后，對350日齡蛋雞產(chǎn)蛋性能及孵化性能有一定改善作用。②飼糧中添加200 g/t 的納豆芽孢桿菌可以顯著提高蛋雞血清高密度脂蛋白膽固醇和免疫球蛋白G的含量，降低血清低密度脂蛋白膽固醇、白蛋白、鈣和脂多糖的含量，增加了營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，同時(shí)減輕炎癥反應(yīng)的發(fā)生并提高機(jī)體免疫能力。