黃靖 韓櫂濂 湯昊 李源恒 孫宏震 張晶晶 程志強(qiáng) 趙春莉

(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，長(zhǎng)春,134000)

黑果腺肋花楸(Aroniamelanocarpa)為薔薇科植物、多年生落葉灌木，又被稱作野櫻莓、不老梅，原產(chǎn)于美國(guó)東部和加拿大東部[1]。成熟的黑果腺肋花楸果實(shí)呈藍(lán)紫色，含量豐富的花青素；花青素是一種水溶性色素，常與糖苷鍵形成花色苷的形式存在[2-3]。大量研究表明，花色苷具有抗氧化性[4-5]、抗炎[6-7]等多種生物活性，可用于預(yù)防和治療糖尿病和心血管疾病[8-9]、調(diào)節(jié)血膽固醇和血壓水平[10-11]、保護(hù)視力[12-13]等功能。目前，黑果腺肋花楸作為花色苷含量極為豐富的植物，并未得到廣泛關(guān)注和開(kāi)發(fā)利用，對(duì)其含有的花色苷的提取、分離純化方法多為傳統(tǒng)方法。對(duì)黑果腺肋花楸含有的花色苷單體的種類及結(jié)構(gòu)沒(méi)有充分了解，造成花色苷的提取量少，分離得到的花色苷單體單一等問(wèn)題。

本研究以超聲輔助提取的方式，并結(jié)合響應(yīng)面分析法對(duì)黑果腺肋花楸中花色苷的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，并用高速逆流色譜對(duì)其中的花色苷進(jìn)行分離制備，結(jié)合紫外可見(jiàn)光譜和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)黑果腺肋花楸中花色苷物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析，以明確得到何種花色苷單體，為黑果腺肋花楸的資源開(kāi)發(fā)利用提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黑果腺肋花楸富康源品種，采自吉林省長(zhǎng)白山地區(qū)，采摘時(shí)間為9月中旬(果實(shí)成熟期)，挑選新鮮果實(shí)，冷凍保存?zhèn)溆?。試劑采用上海阿拉丁生化科技公司生產(chǎn)的乙腈、正丁醇、甲基叔丁基醚(色譜純)、檸檬酸、三氟乙酸；分離用有機(jī)溶劑均為北京化工試劑廠分析純；試驗(yàn)用水為去離子水。

1.2 儀器與設(shè)備

儀器與設(shè)備主要有食物破壁料理機(jī)(中國(guó)九陽(yáng))、電子天平(日本島津)、超聲細(xì)胞破碎機(jī)(上海凈信)、離心機(jī)(上海安亭)、紫外分光光度計(jì)(北京普析)、TBE-300B高速逆流色譜儀(上海同田)、賽默飛世爾Vanquish 3000液相色譜儀和質(zhì)譜儀FSN10450(美國(guó)賽默飛世爾)。

1.3 黑果腺肋花楸果花色苷的提取方法

1.3.1 超聲波輔助法

單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)：取新鮮的黑果腺肋花楸果實(shí)，用去離子水清洗，在陰涼處晾干附著于果皮表面的水珠，立即放入食物破壁料理機(jī)中充分勻漿，精確稱量1 g果漿。篩選含1%檸檬酸的乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲功率、超聲時(shí)間、V(液)∶m(料)作為單因素試驗(yàn)的獨(dú)立變量；為了確定4個(gè)變量的合適范圍，將4個(gè)自變量設(shè)置為6個(gè)水平(見(jiàn)表1)，試驗(yàn)均重復(fù)3次。

表1 各因素水平的選擇

中心組合(Box-Benhnken)響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)：根據(jù)中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理[14]，以單因素試驗(yàn)最佳結(jié)果為基礎(chǔ)，每個(gè)因素選取3個(gè)水平，建立4因素3水平的響應(yīng)面分析，優(yōu)化黑果腺肋花楸中花色苷最佳提取工藝。

黑果腺肋花楸花色苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定：分別準(zhǔn)確移取0.5 mL提取液于2支10 mL試管中，再分別用pH為1.0、4.5的緩沖溶液定容至5 mL，避光平衡60 min后，以去離子水作為空白對(duì)照，用紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)分別測(cè)定待測(cè)液在510、700 nm處的吸光度，利用公式對(duì)待測(cè)液中花色苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算公式如下[15]：總花色苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)=(A×M×DF×V)/(ε×m)。式中：M為矢車菊-3-葡糖糖苷分子量(449.2)；A為花色苷總吸光度(A=(A510-A700)pH1.0-(A510-A700)pH4.5)，A510為花色苷在510 nm處的吸光度；A700為花色苷在700 nm處的吸光度；DF為稀釋因子；V為提取液總體積；ε為矢車菊-3-葡糖糖苷的消光系數(shù)(26 900)；m為原料質(zhì)量。

1.3.2 高速逆流色譜分離純化方法

粗提物的制備：在響應(yīng)面試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用最佳工藝條件：含1%檸檬酸的體積分?jǐn)?shù)為56%乙醇溶液作為提取劑，稱取10 g的果漿，按照V(液)∶m(料)=20 mL∶1 g加入提取溶劑，設(shè)定超聲功率為125 W、超聲提取4 min后，過(guò)濾；將濾渣在相同條件下提取2次，合并3次所得的濾液，40 ℃下減壓濃縮，回收乙醇，得到濃縮液以1∶1的體積比加入乙酸乙酯萃取3次，收集水相，40 ℃下再次減壓濃縮，得到花色苷粗提液，將粗提液減壓濃縮，冷凍干燥后備用。

高速逆流色譜的分離條件：根據(jù)參考文獻(xiàn)[16-17]確定高速逆流色譜分離黑果腺肋花楸花色苷的適宜溶劑體系為V(正丁醇)∶V(甲基叔丁基醚)∶V(乙腈)V∶(水)∶V(三氟乙酸)=2.00∶2.00∶1.00∶5.00∶0.01。取溶劑體系中的上下兩相各5 mL溶解花色苷粗提物粉末100 mg，搖勻靜置后，分別取上下相各1 mL，通過(guò)0.45 μm濾膜過(guò)濾，采用高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)，并得到樣品在兩相中的分配系數(shù)K值[18-19]，實(shí)驗(yàn)樣品A上相與A下相的比值(K值)等于1.34，在0.5～2.0范圍符合K值選擇要求，測(cè)得固定相保存率為58%。

將按比例配置的溶劑系統(tǒng)充分混合，待溶液平衡后，將兩相分離靜置12 h或超聲脫氣20 min，選擇下相作為流動(dòng)相，設(shè)定流速為2 mL·min-1；取200 mg粗提物樣品溶于上下兩相各10 mL用于進(jìn)樣，主機(jī)轉(zhuǎn)速設(shè)定為900 r·min-1，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為510 nm的條件下進(jìn)行分離純化，根據(jù)圖譜進(jìn)行收集，將收集到的組分(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)避光冷凍干燥并置于-80 ℃中保存。

1.3.3高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析(HPLC-MS)方法

將所得到的組分，分別溶解并稀釋至適當(dāng)濃度，用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行200～700 nm全波長(zhǎng)掃描，分析其波長(zhǎng)特征。

色譜條件：Hypersil GLOD VANQUISH AQ柱(100 mm×2.1 mm)色譜柱。流動(dòng)相為0.1%甲酸水(A相)-乙腈(B相)。梯度洗脫為0～1 min，2% B；1～25 min，2%～98% B；25～27 min，98% B；27.1 min，98%～2% B；27.1～30 min，2% B。柱溫箱溫度35 ℃；流速0.3 mL·min-1；進(jìn)樣量1 mL。

質(zhì)譜條件：鞘氣40 Arb；輔助氣5 Arb；離子傳輸管溫度320 ℃；霧化器溫度320 ℃；離子峰掃描范圍150～1 500 m/z。

1.3.4 花色苷抗氧化能力的測(cè)定

按照參考文獻(xiàn)[20]方法并稍作改動(dòng)，采用無(wú)水乙醇溶解DPPH配制成濃度為0.6 mmol·L-1的混合溶液，避光保存。將2 mL DPPH溶液與1 mL不同組分(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)分別配制成不同質(zhì)量濃度(10、20、40、60、80、100 g·L-1)的溶液混合均勻，避光反應(yīng)30 min，以同濃度的維生素C溶液作陽(yáng)性對(duì)照，在517 nm處測(cè)定混合液的吸光度A，按照公式計(jì)算DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基清除率=[A0-(A1-A2)/A0]×100%。式中，A1為樣品組(樣品和DPPH溶液)的吸光度；A2為樣品對(duì)照組(樣品和無(wú)水乙醇)的吸光度；A0為對(duì)照組(無(wú)水乙醇與DPPH溶液)的吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 影響花色苷提取量的單因素水平

由表2可知，隨著超聲波水平的增加花色苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)發(fā)生了明顯的改變，先增加后降低，各水平間差異極顯著(P<0.01)，當(dāng)超聲波功率為120 W(水平4)時(shí)，花色苷的提取量最大(5.09 mg·g-1)。主要原因是超聲波增加了空化氣泡的數(shù)量，在超聲提取中，氣泡會(huì)爆裂并產(chǎn)生局部壓力，導(dǎo)致植物組織破裂，提高溶劑滲透性并加速活性成分的滲出，從而有利于花色苷的提??；當(dāng)功率超過(guò)120 W時(shí)，空化氣泡會(huì)急劇增加，超聲能量傳輸?shù)浇橘|(zhì)中的效率降低，花色苷的內(nèi)部結(jié)構(gòu)也更易被破壞，從而降低了花色苷的提取量。

隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)水平的增加花色苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)發(fā)生了明顯的改變，先增加后降低，各水平間差異極顯著(P<0.01)，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%(水平4)時(shí)，花色苷的提取量最大(4.62 mg·g-1)。主要原因是花色苷為水溶性天然色素，當(dāng)乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)不斷增加，溶液體系中含水量減小，隨之溶出的花色苷減少，果實(shí)中花色苷的提取量因其溶解量減少而降；當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)超過(guò)60%時(shí)，溶液體系中所含的水分逐漸減少，花色苷溶解到水中能力受限，從而降低了花色苷的提取量。

隨著超聲時(shí)間的增加花色苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)發(fā)生了明顯的改變，先增加后降低，各水平間差異顯著(P<0.05)，當(dāng)超聲時(shí)間為4 min(水平4)時(shí)，花色苷的提取量最大(4.73 mg·g-1)。主要原因是超聲波具有破壁作用，在超聲提取過(guò)程中使溶劑滲透到植物基質(zhì)中，在一定的時(shí)間變化范圍內(nèi)，超聲時(shí)間越長(zhǎng)花色苷的溶出量越大。當(dāng)超聲時(shí)間達(dá)到4 min時(shí)，花楸果細(xì)胞完全破碎，從而有利于花色苷的提??；當(dāng)超聲時(shí)間超過(guò)4 min時(shí)，花色苷會(huì)因長(zhǎng)時(shí)間暴露在超聲波中，導(dǎo)致部分花色苷在過(guò)高溫度環(huán)境下被氧化、分解，使得花色苷的提取量逐漸下降。

隨著V(液)∶m(料)的增加花色苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)發(fā)生了明顯的改變，先增加后下降，各水平間差異顯著(P<0.05)，當(dāng)V(液)∶m(料)為20 mL∶1 g(水平4)時(shí)，花色苷的提取量最大(4.57 mg·g-1)。主要原因是植物內(nèi)細(xì)胞液與外部溶劑的存在濃度差，比值越大，代表植物內(nèi)細(xì)胞液與外部溶劑的濃度差越大，花色苷在其中擴(kuò)散速度加快，從而有利于花色苷的提取，當(dāng)V(液)∶m(料)超過(guò)20 mL∶1 g時(shí)，超聲能量隨單位體積的增大而減小，使得花色苷的提取量下降。

表2 各因素對(duì)黑果腺肋花楸花色苷提取量的影響

2.2 黑果腺肋花楸中花色苷最佳提取條件

由于各單因素的最佳值為水平4(乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%、超聲功率為120 W、超聲時(shí)間為4 min、V(液)∶m(料)=20 mL∶1 g)，因此，根據(jù)各因素水平3、水平4和水平5進(jìn)行響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(見(jiàn)表3)。

表3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與花色苷提取量

利用Design-Expert 12軟件，通過(guò)方差分析，花色苷提取量預(yù)測(cè)模型如下：

Y=6.38-0.326 7A+0.175 0B+0.085 8C-0.060 8D-

0.452 5(A×B)+0.037 5(A×C)-0.035 0(A×D)-

0.040 0(B×C)-0.462 5(B×D)-0.16(C×D)-

0.998 4A2-1.000 0B2+0.005 3C2-0.764 7D2，

R2=0.983 8，

式中：Y為花色苷提取量，A為乙醇體積分?jǐn)?shù)，B為超聲波功率，C為超聲時(shí)間，D為V(液)∶m(料)。

表4 回歸模型方差分析結(jié)果

由1(a)可知，在超聲時(shí)間保持在4 min、V(液)∶m(料)=20 mL∶1 g的情況下(零級(jí)水平)，在乙醇體積分?jǐn)?shù)從40%增加到56.13%、超聲功率從80 W增加125.21 W時(shí)，三維響應(yīng)曲面逐漸向上上升，說(shuō)明花色苷提取量也相應(yīng)增大；當(dāng)分別超過(guò)56.13%和125.21 W時(shí)，曲面開(kāi)始下降，表明花色苷提取量逐漸減小。另外，等高線圖也可以印證乙醇體積分?jǐn)?shù)和超聲功率之間交互作用極顯著(P<0.01)，這與回歸模型方差分析相符合。

由1(b)可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)和液料比分別固定在60%和V(液)∶m(料)=20 mL∶1 g時(shí)(零級(jí)水平)，在超聲波功率為80～123.16 W、超聲時(shí)間為3～4.16 min，曲面呈現(xiàn)上升狀態(tài)，說(shuō)明在此范圍內(nèi)兩因素交互作用使花色苷提取量在不斷增加；當(dāng)曲面上升至頂點(diǎn)時(shí)，對(duì)應(yīng)的兩因素條件為123.16 W、4.16 min，此時(shí)花色苷提取量最大為6.38 mg·g-1。另外，等高線圖可觀察得到，超聲功率和超聲時(shí)間兩因素交互作用極顯著(P<0.01)。

由圖1(c)可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)和超聲時(shí)間分別設(shè)定為60%和4 min的前提下(零級(jí)水平)，圖形呈現(xiàn)先上升后下落的曲面，這與隨超聲功率、V(液)∶m(料)的增加，花色苷提取量先增大后減小相對(duì)應(yīng)。當(dāng)超聲功率為116.70 W、V(液)∶m(料)=20.30 mL∶1 g時(shí)，達(dá)到曲面的頂點(diǎn)且此時(shí)花色苷提取量最大為6.20 mg·g-1。此外，等高線圖也反映超聲功率和V(液)∶m(料)也存在顯著的交互作用(P<0.05)。

通過(guò)求解回歸方程，得到所選變量的最佳值為：乙醇體積分?jǐn)?shù)55.75%、超聲功率125.02 W、超聲時(shí)間4.12 min、V(液)∶m(料)=20.64 mL∶1.00 g，黑果腺肋花楸花色苷的提取量可達(dá)最大理論值為6.51 mg·g-1，根據(jù)實(shí)際操作情況，將最佳工藝條件修改為：乙醇體積分?jǐn)?shù)56%、超聲功率125 W、超聲時(shí)間4 min、V(液)∶m(料)=20 mL∶1 g，在此條件下進(jìn)行花色苷提取的驗(yàn)證試驗(yàn)，重復(fù)3次，花色苷提取量平均值為6.49 mg·g-1。針對(duì)近似誤差的百分比計(jì)算預(yù)測(cè)值和實(shí)驗(yàn)值，該百分比不超過(guò)接近誤差的10%，近似誤差為1.05%，表明驗(yàn)證的結(jié)果在預(yù)測(cè)值和實(shí)驗(yàn)值基本吻合，優(yōu)化參數(shù)可用。

2.3 高速逆流色譜(HSCCC)分離純化花色苷

由圖2可知，黑果腺肋花楸花色苷粗提物中分離得到4個(gè)峰，其中峰1未完全分離，峰2、3、4分別在62、123、195 min時(shí)出現(xiàn)并都取得了較好的分離效果，將得到的3個(gè)純度較高的組分分別命名為組分Ⅰ、組分Ⅱ、組分Ⅲ。

在波長(zhǎng)280、510 nm左右有最大吸收波長(zhǎng)是花色苷類物質(zhì)的特征[21]，所以在指定波長(zhǎng)下有無(wú)最大吸收波長(zhǎng)可作為初步判斷物質(zhì)是否為花色苷的方法之一。由圖3可知，組分Ⅰ在220.1、280.5、514.23處有最大吸收波長(zhǎng)，組分Ⅱ在226.3、282.5、519.6處有最大吸收波長(zhǎng)，且通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)組分Ⅰ和Ⅱ最大吸收波長(zhǎng)相似且圖譜輪廓也相似，初步推測(cè)二者為同一花色苷元，組分Ⅲ在221.9、286.4、523.6處存在最大吸收波長(zhǎng)，3個(gè)組分在特定波長(zhǎng)范圍內(nèi)均有最大吸收峰，由此可證明得到的組分為花色苷物質(zhì)。

圖1 各因素交互作用的響應(yīng)面及等高線

由圖4可知，將高速逆流色譜分離得到的3個(gè)組分進(jìn)行純度分析，各組分分離效果較好，均無(wú)其他雜峰，表明得到單一的花色苷，根據(jù)峰面積計(jì)算各組分的純度為：組分Ⅰ為82.04%、組分Ⅱ?yàn)?5.65%、組分Ⅲ為88.37%。

2.4 花色苷的結(jié)構(gòu)式

根據(jù)分子離子及其碎片可以確認(rèn)分離得到的花色苷的身份[22]，由圖5(a)的ESI-MS信息可知，組分Ⅰ的碎片離子的質(zhì)荷比(m∶z)為419.1，二級(jí)碎片離子的質(zhì)荷比(m∶z)為287.06是矢車菊的特征離子[23]，遺失碎片的質(zhì)荷比(m∶z)為132是脫水五碳糖基的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。另外，由紫外可見(jiàn)吸收光譜可知，組分Ⅰ的A440/Aλmax大于20%可判斷其成苷位在C3上，經(jīng)分析可初步判定組分Ⅰ為矢車菊-3-O-阿拉伯糖苷，這與位路路[24]、李騰[25]等人檢測(cè)出的黑果腺肋花楸花色苷的結(jié)果一致。

圖2 高速逆流色譜分離黑果腺肋花楸花色苷的色譜圖

圖3 高速逆流色譜各組分紫外-可見(jiàn)光譜圖

圖4 組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的高效液相色譜色譜圖

由圖5(b)的ESI-MS信息可知，組分Ⅱ的碎片離子的質(zhì)荷比(m∶z)為449.11，二級(jí)碎片離子的質(zhì)荷比(m∶z)為287.06是矢車菊的特征離子，遺失碎片的質(zhì)荷比(m∶z)為162是脫水六碳糖基的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，由于花色苷用鹽酸水解后的六碳糖只有葡萄糖，另外，由紫外可見(jiàn)吸收光譜可知，組分Ⅱ的A440/Aλmax大于20%，經(jīng)分析可可初步判定組分Ⅱ?yàn)槭杠嚲账?3-O-葡萄糖苷，這一結(jié)果與Br?unlich et al.[26]人提取出的花色苷單體結(jié)論相同。

由圖5(c)的ESI-MS信息可知，組分Ⅲ的碎片離子的質(zhì)荷比(m∶z)為465.1，二級(jí)碎片離子的質(zhì)荷比(m∶z)為303.05，遺失碎片的質(zhì)荷比(m∶z)為162，這表明組分Ⅲ的花色苷是飛燕草素為母核與葡萄糖形成的苷，再結(jié)合紫外吸收光譜可知，組分Ⅲ的A440/Aλmax大于20%，經(jīng)分析初步判定組分Ⅲ為飛燕草素-3-O-葡萄糖苷，這一結(jié)論與張上上等[27]人鑒定出的花青苷類化合物研究結(jié)果一致。

圖5 各組分ESI-MS圖及花色苷結(jié)構(gòu)式

2.5 花色苷的抗氧化性

通過(guò)測(cè)定DPPH自由基清除率可以判斷花色苷的抗氧化能力，以IC50值(清除率為50%時(shí)，抗氧化劑的濃度值)作為評(píng)價(jià)花色苷清除DPPH自由基能力的指標(biāo)，值越小清除效果越好[28]。由表5可知，隨著樣品質(zhì)量濃度的提高，對(duì)DPPH自由基清除率呈上升趨勢(shì)，經(jīng)計(jì)算維生素C、花色苷粗提物、組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的IC50值分別為46.94、32.52、24.53、21.15、15.38 g·L-1。說(shuō)明組分Ⅲ清除DPPH自由基的能力最強(qiáng)，其次是組分Ⅱ，再次為組分Ⅰ，也就是說(shuō)分離出的3個(gè)單體抗氧化性均強(qiáng)于花色苷粗提物，且花色苷粗提物、組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ也均強(qiáng)于維生素C，說(shuō)明黑果腺肋花楸中花色苷的抗氧化效果較好。這是由于不同的花色苷單體結(jié)構(gòu)不同導(dǎo)致抗氧化性不同[29]，飛燕草素-3-O-葡萄糖苷(組分Ⅲ)苯環(huán)上的酚羥基數(shù)量最多(9個(gè))，與DPPH發(fā)生氧化還原反應(yīng)提供氫也最多，所以抗氧化能力最強(qiáng)。對(duì)DPPH自由基清除能力由強(qiáng)到弱的順序?yàn)椋猴w燕草素-3-O-葡萄糖苷、矢車菊素-3-O-葡萄糖苷、矢車菊-3-O-阿拉伯糖苷、花色苷粗提物、維生素C。

表5 黑果腺肋花楸中花色苷和VC對(duì)DPPH自由基清除率的影響

3 結(jié)論

在本研究中，采用超聲波輔助技術(shù)從黑果腺肋花楸果實(shí)中提取花色苷，超聲功率對(duì)花色苷提取量的影響最大，其次是乙醇體積分?jǐn)?shù)，再次是超聲時(shí)間，產(chǎn)生最小影響的是V(液)∶m(料)?；ㄉ兆罴烟崛l件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)56%、超聲功率125 W、超聲時(shí)間4 min、V(液)∶m(料)=20 mL∶1 g，花色苷的實(shí)際提取量為6.49 mg·g-1。利用高速逆流色譜方法從黑果腺肋花楸中成功分離得到3個(gè)組分，通過(guò)對(duì)3個(gè)組分紫外吸收光譜、液相色譜以及質(zhì)譜數(shù)據(jù)的分析，判定組分Ⅰ為矢車菊3-O-阿拉伯糖苷、組分Ⅱ?yàn)槭杠嚲账?3-O-葡萄糖苷、組分Ⅲ為飛燕草素-3-O-葡萄糖苷；黑果腺肋花楸中花色苷對(duì)DPPH自由基清除能力由強(qiáng)到弱的順序?yàn)椋猴w燕草素-3-O-葡萄糖苷、矢車菊素-3-O-葡萄糖苷、矢車菊-3-O-阿拉伯糖苷、花色苷粗提物。

該實(shí)驗(yàn)再次證實(shí)，超聲輔助提取能有效地從植物中提取重要的化學(xué)物質(zhì)，為進(jìn)一步分離純化花青素等天然色素提供技術(shù)支持，也為黑果腺肋花楸花色苷的應(yīng)用提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論指導(dǎo)。分離出的花色苷單體具有抗氧化能力，對(duì)更深入地促進(jìn)黑果腺肋花楸在食品、藥品和化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用具有重要的實(shí)踐意義。