單夢(mèng)瑤,王維綱,董金香,田建明,宋蓮蓮,陳英紅,房曉雪,邱智東,羅浩銘,朱迪夫

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥藥劑實(shí)驗(yàn)室，吉林 長(zhǎng)春 130117；2.吉林醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院中醫(yī)科，吉林 吉林 132013；3.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院中藥二所，吉林 長(zhǎng)春 130012；4.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)與中藥化學(xué)教研室，吉林 長(zhǎng)春 130117；5.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生物制藥與保健食品教研室，吉林 長(zhǎng)春 130117）

少弱精癥是近年來(lái)臨床常見(jiàn)的病癥，多導(dǎo)致男性不育癥，已占男性不育病因的75%。因環(huán)境污染和生活壓力帶來(lái)的影響日益加劇，男性患有少弱精癥的人數(shù)逐年升高，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)［1-2］，主要表現(xiàn)在精子總數(shù)與精子質(zhì)量的明顯下降。目前，少弱精癥的病因病機(jī)尚不明確，致病因素較多且臨床缺少特效治療藥物［3］。現(xiàn)階段臨床上常采用經(jīng)驗(yàn)性藥物治療，例如采用促性腺激素和促性腺激素釋放激素等激素療法，或采用L-肉堿和維生素E治療，以及采用輔助生殖技術(shù)和手術(shù)治療提高生育率?，F(xiàn)有藥物單用療效并不顯著，臨床常采用聯(lián)合用藥的方式，藥物帶來(lái)了多種不良反應(yīng)，且輔助生殖技術(shù)要求高、成功率低且價(jià)格昂貴，因此經(jīng)驗(yàn)性藥物及輔助技術(shù)在臨床推廣受到一定限制［4-7］。近年來(lái)，中醫(yī)藥治療少弱精癥優(yōu)勢(shì)較為明顯，市場(chǎng)已有的中成藥生精膠囊和麒麟丸均顯示出了獨(dú)特的療效［8-9］。

人參（Panax ginseng C.A.Mey）被譽(yù)為百草之王，具有補(bǔ)氣固脫、健脾補(bǔ)肺和安神益智的作用［10-12］。研 究［13-16］顯 示：人 參 具 有 改 善 男 性 性 功能障礙的作用，其作用機(jī)制可能與睪丸中誘導(dǎo)精子生成并激活和增加精原干細(xì)胞中膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（glialcellline-derivedneurotrophicfactor，GDNF）的表達(dá)有關(guān)，也可能與以內(nèi)皮細(xì)胞和血管神經(jīng)為介導(dǎo)的一氧化氮（nitric oxide，NO）釋放有關(guān)，或是人參中有效成分影響Cyp11a1基因的表達(dá)，增強(qiáng)睪丸功能，影響器官形態(tài)與生殖系統(tǒng)發(fā)育。因此，人參在改善生精障礙和治療少弱精癥方面有很好的開(kāi)發(fā)前景。

本課題組針對(duì)人參糖蛋白（Panax ginsengglycoproteins，PGG）進(jìn)行研究。本課題組［17］檢測(cè)PGG熒光標(biāo)記后的小鼠體內(nèi)藥物的組織分布和靶向效率結(jié)果顯示：PGG在小鼠腦組織和睪丸組織有明顯的靶向性趨勢(shì)，具有透過(guò)血腦屏障和血睪屏障的可能性。為探討PGG對(duì)少弱精癥的治療作用，本研究采用環(huán)磷酰胺建立小鼠少弱精癥模型，在此基礎(chǔ)上給予小鼠PGG，在體內(nèi)研究PGG促進(jìn)小鼠生殖功能的生物活性，并初步探討其作用機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)旨在為深度開(kāi)發(fā)PGG提供依據(jù)，為少弱精癥治療藥物的研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、主要試劑和儀器昆明種小鼠60只，均為雄性，體質(zhì)量（20±1）g，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001。PGG（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)自制），生精膠囊（遵義廖元和堂藥業(yè)有限公司），注射用環(huán)磷酰胺（德國(guó)Baxter Oncology GmbH公司），小鼠ELISA試劑盒（江蘇綠葉生物科技有限公司），蘇木精-伊紅（hematoxylin eosin，HE）試劑盒（山東西亞化學(xué)股份有限公司），生理鹽水（石家莊四藥有限公司），甲醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）。Olympus BX51光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司），NIS-ELEMNT BR型圖像分析系統(tǒng)（日本Nikon公司），BI2000圖像分析儀（成都泰盟科技有限責(zé)任公司），i30計(jì)數(shù)器（廣東省深圳市海天地科技有限公司），Leica RM 2255型石蠟切片機(jī)和Leica EG1140石蠟包埋機(jī)（德國(guó)Leica公司）。

1.2 PGG理化性質(zhì)測(cè)定和結(jié)構(gòu)分析按文獻(xiàn)［18］的方法測(cè)定PGG的中性糖構(gòu)成比、酸性糖構(gòu)成比和蛋白質(zhì)構(gòu)成比，進(jìn)行相對(duì)分子質(zhì)量分布測(cè)定、組成糖分析、氨基酸分析和甲基化分析。

1.3 PGG在小鼠睪丸組織中分布檢測(cè)按文獻(xiàn)［17］方法對(duì)PGG進(jìn)行熒光標(biāo)記，觀察其在小鼠臟器組織中的分布情況。采集小鼠睪丸組織，并置于－20℃冰箱中凍存20 min后，將組織連續(xù)切片，置于載玻片上，放入動(dòng)物熒光成像儀中，觀察小鼠睪丸組織中熒光分布情況。拍攝條件：拍攝像素：2×2，F(xiàn)OV：10，激發(fā)波長(zhǎng)：480 nm，發(fā)射波長(zhǎng)：535 nm，曝光時(shí)間：2 s。

1.4 生精膠囊和PGG劑量設(shè)計(jì)陽(yáng)性對(duì)照藥物：生精膠囊，臨床用量為0.4 g/?！?2粒/人/日，折算成小鼠的等效劑量為700 mg·kg－1；根據(jù)文獻(xiàn)［19-20］，PGG的低、中和高劑量分別設(shè)為100、200和400 mg·kg－1。

1.5 小鼠少弱精癥模型制備［21］取60只雄性小鼠，隨機(jī)選取10只小鼠作為正常組，腹腔注射生理鹽水10 mL·kg－1，其余小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺30 mg·kg－1，每日1次，連續(xù)7 d，建立小鼠少弱精癥模型。與正常組比較，造模小鼠精子總數(shù)、精子活率和精子活力明顯降低，精子畸形率明顯升高，則表明造模成功。

1.6 動(dòng)物分組和給藥處理將小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組（生精膠囊，700 mg·kg－1）、低劑量PGG組（100 mg·kg－1PGG）、中劑量PGG組（200 mg·kg－1PGG） 和 高 劑 量PGG組（400 mg·kg－1PGG），每組10只。正常組和模型組小鼠灌胃等體積純凈水，其他各組小鼠分別灌胃相應(yīng)藥液，每日1次，連續(xù)給藥28 d。

1.7 各組小鼠精子檢查給藥結(jié)束次日取材，稱量小鼠體質(zhì)量、脫臼處死，打開(kāi)腹腔，取出雙側(cè)睪丸，分離兩側(cè)附睪組織，置入含有提前預(yù)熱至37℃、1 mL生理鹽水的小平皿中，采用眼科剪刀剪碎，靜置5 min，吸管吹打均勻。取懸液滴于細(xì)胞計(jì)數(shù)板中，立即置于顯微鏡下計(jì)精子總數(shù)、活精子數(shù)、畸形精子數(shù)、前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)（a級(jí)精子數(shù)+b級(jí)精子數(shù)），a級(jí)精子：表示精子快速直線向前運(yùn)動(dòng)，直線運(yùn)動(dòng)；b級(jí)精子：表示精子緩慢或呆滯向前移動(dòng)，緩慢運(yùn)動(dòng)；并計(jì)算精子活率、精子畸形率和精子活力。精子活率=活精子數(shù)/精子總數(shù)×100%；精子畸形率=（頭、尾斷裂的精子數(shù)）/精子總數(shù)×100%；精子活力=（a級(jí)精子數(shù)+b級(jí)精子數(shù)）/精子總數(shù)×100%。另取50μL懸液滴至載玻片上，蓋玻片縱向涂一線條，均勻涂片。置室溫自然干燥，甲醇固定5 min，干燥，1%伊紅染色1 h，用水輕沖，干燥，獲得各組小鼠精子觀察圖。

1.8 各組小鼠臟器系數(shù)測(cè)定取小鼠睪丸（雙）、前列腺+貯精囊（雙）、包皮腺（雙）和提肛肌稱質(zhì)量，分別計(jì)算睪丸、前列腺+貯精囊、包皮腺和提肛肌臟器系數(shù)。臟器系數(shù)=（臟器質(zhì)量或臟器平均質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量）×100%，單位均為mg·100 g－1。

1.9 HE染色檢測(cè)各組小鼠睪丸組織病理形態(tài)表現(xiàn)取小鼠右側(cè)睪丸組織，4%多聚甲醛溶液固定24 h，進(jìn)行梯度乙醇脫水透明。將固定后的組織橫切，取0.5 cm組織塊，采用石蠟包埋，制備5μm切片，組織切片置于60℃烘箱中烘烤1 h，冷卻至室溫。

將組織切片浸入二甲苯中浸泡10 min，更換二甲苯后再浸泡10 min，采用100%、95%、90%和80%梯度乙醇水化，水沖洗，水化后的切片置入蘇木精染液中浸泡5～20 min，細(xì)胞核染成紫藍(lán)色，水沖洗3～5 min，1%鹽酸酒精分化5～30 s，水沖洗1～3 min，弱堿性水溶液返藍(lán)30～60 s，水充分沖洗5～10 min，充分水化后的切片直接入伊紅染色液中浸泡5～15 min，細(xì)胞質(zhì)染成粉紅色，蒸餾水稍洗，采用90%、95%和100%梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。觀察各組小鼠睪丸組織病理形態(tài)表現(xiàn)。

1.10 各組小鼠生精小管形態(tài)指標(biāo)測(cè)量測(cè)量各組小鼠睪丸組織中12個(gè)生精小管內(nèi)生精細(xì)胞層厚度，取平均值。生精細(xì)胞層厚度反映生精細(xì)胞分化成熟程度，厚度值越高，生精細(xì)胞分化層級(jí)越高，生精細(xì)胞數(shù)量越多，精子生成和成熟進(jìn)程越高。

測(cè)量各組小鼠睪丸組織中5個(gè)類圓形生精小管切面內(nèi)生精細(xì)胞層橫截面的面積，取平均值。生精細(xì)胞層橫截面面積反映動(dòng)物生精能力，橫截面面積越大，生精細(xì)胞數(shù)量越多，生精能力越強(qiáng)，生成精子總數(shù)越多。

1.11 各組小鼠血清性激素水平檢測(cè)末次給藥1 h后，小鼠眼眶采血，將血樣以3 000 r·min－1離心10 min，分離血清，采用ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清睪酮（testosterone，T）、卵泡刺激素（follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH）和 催 乳 素（prolactin，PRL）水平，具體操作步驟按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組小鼠精子總數(shù)、臟器系數(shù)、生精小管中生精細(xì)胞層厚度和生精細(xì)胞層橫截面面積及血清性激素水平經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)呈正態(tài)分布，以±s表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。精子活率、精子畸形率和精子活力組間兩兩比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PGG的理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)分析PGG是相對(duì)分子質(zhì)量為12 690（100%）的大分子混合物，中性糖、酸性糖和蛋白質(zhì)構(gòu)成比分別為45.4%、4.3%和51.1%。PGG單糖組成為甘露糖（21.01%）、葡萄糖（26.53%）、N-乙酰葡萄糖或N-乙酰半乳糖（12.17%）、半乳糖（28.23%）和巖藻糖（9.78%）。氨基酸檢測(cè)結(jié)果顯示：PGG主要含有15種氨基酸，其中谷氨酸（13.724%）、精氨酸（6.227%）和賴氨酸（6.19%）居多［17］。甲基化分析和單糖組成分析結(jié)果表明：PGG的主鏈部分是由→2）-Man-（1→，→4）-Rha-（1→，→4）-Fuc-（1→，→6）-Gal-（1→，→3）-Gal-（1→，→4）-GalA-（1→，→4）-GlcNAc-（1→，→4）-GalNAc-（1→組成，支鏈主要由→3，6）-Man-（1→，2，6）-Man-（1→，2，5）-Man-（1→組成，末端主要由1→）-Fuc，1→）-Glc，1→）GlcNAc or 1→）-GalNAc組成。

2.2 PGG在小鼠睪丸組織中的分布PGG在小鼠睪丸組織處大量富集，睪丸組織的生精小管內(nèi)有較強(qiáng)熒光信號(hào)表達(dá)，主要集中在生精小管內(nèi)生精細(xì)胞表面。見(jiàn)圖1。

圖1 PGG在小鼠睪丸組織中的熒光分布Fig.1 Fluorescence distribution of PGG in testis tissue of mice

2.3 各組小鼠精子總數(shù)、精子活率、精子畸形率和精子活力與正常組比較，模型組小鼠精子總數(shù)明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，生精膠囊組、中和高劑量PGG組小鼠精子總數(shù)明顯升高（P＜0.05）。與正常組比較，模型組小鼠精子活率明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，生精膠囊組、中劑量PGG組和高劑量PGG組精子活率明顯升高（P＜0.01）。與正常組比較，模型組小鼠精子畸形率明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，生精膠囊組、中劑量PGG組和高劑量PGG組小鼠精子畸形率明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。與正常組比較，模型組小鼠精子活力明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，生精膠囊組、中劑量PGG組和高劑量PGG組精子活力明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。見(jiàn)表1和圖2。

圖2 各組小鼠精子形態(tài)表現(xiàn)（×100）Fig.2 Morphology of sperm of mice in various groups(×100)

表1 各組小鼠精子總數(shù)、精子活率、精子畸形率和精子活力Tab.1 Total number of sperm，survival rates of sperm,malformation rates of sperm,and motilities of sperm of mice in various groups (n=10，±s）

表1 各組小鼠精子總數(shù)、精子活率、精子畸形率和精子活力Tab.1 Total number of sperm，survival rates of sperm,malformation rates of sperm,and motilities of sperm of mice in various groups (n=10，±s）

*P＜0.01 compared with normal group；△P＜0.05，△△P＜0.01 compared with model group.

Group Survival rate of sperm（η/%）F P Normal Model Shengjing capsule PGG Low dose Medium dose High dose Total number of sperm（×104 mL－1）148.10±35.86 94.10±27.67*126.30±27.26△76.84±6.69 55.70±10.11*74.51±9.66△△11.419 7.197＜0.01＜0.01 99.90±24.29 127.90±32.00△136.60±44.17△67.28±14.43 72.70±7.95△△74.66±3.14△△2.779 6.908 7.353＞0.05＜0.01＜0.01 Group F P F P Normal Model Shengjing capsule PGG Low dose Medium dose High dose Malformation rate of sperm（η/%）18.03±5.72 41.87±6.24*27.82±8.26△△19.270 7.197＜0.01＜0.01 Motility of sperm（η/%）68.45±7.31 47.57±7.47*66.61±9.78△△10.369 7.001＜0.01＜0.01＞0.05＜0.05＜0.01 36.95±4.20 30.73±6.40△26.67±3.94△△0.624 3.936 6.690＞0.05＜0.05＜0.01 54.83±9.54 62.83±7.41△65.89±8.32△△1.265 4.063 7.064

2.4 各組小鼠各類臟器系數(shù)與正常組比較，模型組小鼠睪丸和前列腺+貯精囊臟器系數(shù)明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），包皮腺和提肛肌臟器系數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組比較，生精膠囊組和各劑量PGG組小鼠睪丸、前列腺+貯精囊、包皮腺和提肛肌臟器系數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠各類臟器系數(shù)T ab.2 Different kinds of organ coefficients of mice in various groups [n=10，±s，w B/(mg·100 g－1)]

表2 各組小鼠各類臟器系數(shù)T ab.2 Different kinds of organ coefficients of mice in various groups [n=10，±s，w B/(mg·100 g－1)]

*P＜0.05，**P＜0.01 compared with normal group.

2.5 各組小鼠睪丸組織病理形態(tài)表現(xiàn)各組小鼠睪丸組織病理學(xué)結(jié)果顯示：正常組小鼠睪丸組織生精細(xì)胞排列具有層次，所占面積較大，各級(jí)生精細(xì)胞數(shù)量豐富，精子分化形成過(guò)程中的各級(jí)細(xì)胞均易見(jiàn)，管腔內(nèi)可見(jiàn)較多精子。與正常組比較，模型組小鼠睪丸組織生精上皮變薄，生精細(xì)胞層次和結(jié)構(gòu)疏松、排列紊亂，生精過(guò)程中的各級(jí)細(xì)胞受損，分化異常，管腔內(nèi)見(jiàn)少量精子或未見(jiàn)精子。與模型組比較，生精膠囊組和各劑量PGG組小鼠睪丸組織生精上皮表現(xiàn)為生精障礙的程度得到有效緩解，生精細(xì)胞層增厚，多見(jiàn)生精過(guò)程中的各級(jí)細(xì)胞，精子分化形成過(guò)程得到明顯改善，管腔內(nèi)精子總數(shù)增加，隨著PGG劑量增加效果越明顯。見(jiàn)圖3。

圖3 各組小鼠睪丸組織病理形態(tài)表現(xiàn)（HE，×400）Fig.3 Pathomorphology of testis tissue of mice in various groups(HE，×400)

2.6 各組小鼠生精小管中生精細(xì)胞層厚度和生精細(xì)胞層橫截面面積與正常組比較，模型組小鼠生精小管中生精細(xì)胞層厚度和生精細(xì)胞層橫截面面積明顯減?。≒＜0.01）。與模型組比較，生精膠囊組和各劑量PGG組小鼠生精小管中生精細(xì)胞層厚度和生精細(xì)胞層橫截面面積明顯增加（P＜0.05或P＜0.01）。見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠生精小管內(nèi)生精細(xì)胞層厚度和橫截面面積Tab.3 Spermatogenic cell layer thickness and spermatogenic cell layer cross-sectional areas in seminiferous tubules of mice in various groups (n=10，x±s）

2.7 各組小鼠血清性激素水平與正常組比較，模型組小鼠血清T、FSH和PRL水平明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，生精膠囊組、中劑量PGG組和高劑量PGG組小鼠血清T水平明顯升高（P＜0.05或P＜0.01），生精膠囊組和各劑量PGG組小鼠血清FSH水平明顯升高（P＜0.05或P＜0.01），各劑量PGG組小鼠血清PRL水平明顯升高（P＜0.01）。見(jiàn)表4。

表4 各組小鼠血清性激素水平Tab.4 Levels of sex hormones in serum of mice in various groups （n=10，±s）

表4 各組小鼠血清性激素水平Tab.4 Levels of sex hormones in serum of mice in various groups （n=10，±s）

*P＜0.05，**P＜0.01 compared with normal group；△P＜0.05，△△P＜0.01 compared with model group.

Group T Normal Model Shengjing capsule PGG Low dose Medium dose High dose[cB/(nmol·L－1)]241.89±63.93 149.99±46.10**FSH[λB/(U·L－1)]22.18±9.73 12.22±4.76*PRL[ρB/(mg·L－1)]7.61±1.08 6.11±1.23*203.62±51.15△25.39±11.00△7.29±0.71 8.75±0.68△△9.23±0.58△△11.59±2.86△△198.03±44.08 210.35±48.75△235.89±79.25△△26.96±8.65△△21.92±5.32△△32.32±6.37△△

3 討 論

近年來(lái)，隨著人們對(duì)人參多糖及其復(fù)合物的研究不斷系統(tǒng)和深入，對(duì)PGG的生物活性有了新的認(rèn)識(shí)。前期研究［22-24］證實(shí)：PGG具有改善睡眠、增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶功能、鎮(zhèn)靜催眠和鎮(zhèn)痛等多方面的作用。生精障礙即精子發(fā)生障礙，是引發(fā)男性不育的重要原因，其致病因素多樣，一些無(wú)精子癥或少精子癥等大部分是由生精障礙引起的。本研究結(jié)果顯示：PGG可提高精子數(shù)量和質(zhì)量，提高小鼠血清T、FSH和PRL水平，可有效改善少弱精癥小鼠的生精障礙。

環(huán)磷酰胺是常用的抗腫瘤藥物和免疫抑制劑，具有生殖毒性，可對(duì)生精干細(xì)胞進(jìn)行破壞，影響p53和Fas/FasL等途徑，從而誘導(dǎo)生殖細(xì)胞畸形、遺傳物突變和凋亡［25］。研究［26］顯示：環(huán)磷酰胺可引起無(wú)精癥或少精癥，導(dǎo)致不育或畸形的發(fā)生。本研究采用環(huán)磷酰胺建立小鼠少弱精癥模型，探討PGG對(duì)少弱精癥小鼠生精障礙的改善作用。與正常組比較，模型組小鼠的精子總數(shù)、精子活率和精子活力降低，精子畸形率升高，以上結(jié)果說(shuō)明造模成功。小鼠精子總數(shù)、精子活率、精子畸形率和精子活力實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：生精膠囊組和各劑量PGG組小鼠上述指標(biāo)均有改善，且具有劑量依賴性，即中和高劑量PGG對(duì)少弱精癥具有明顯的治療作用，表明PGG可促進(jìn)精子發(fā)生，增強(qiáng)精子質(zhì)量。小鼠臟器系數(shù)反映生殖器官的發(fā)育情況及損害情況［27］，與模型組比較，生精膠囊組和各劑量PGG組小鼠睪丸、前列腺+貯精囊、包皮腺和提肛肌臟器系數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果表明PGG對(duì)臟器無(wú)明顯毒害或修復(fù)損傷作用。睪丸組織病理形態(tài)結(jié)果需要結(jié)合精子檢查的相關(guān)指標(biāo)綜合分析，因細(xì)胞不能明確分層，造模后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞成分、種類、形態(tài)復(fù)雜，排列紊亂等情況，不利于客觀評(píng)價(jià)結(jié)果。為最大可能排除干擾，減小誤差，本研究采用計(jì)算生精小管中生精細(xì)胞層厚度和生精細(xì)胞層橫截面面積的方式進(jìn)行評(píng)價(jià)。本研究結(jié)果顯示：經(jīng)生精膠囊和各劑量PGG治療后，小鼠睪丸組織中生精障礙均得到有效改善，且對(duì)PGG具有劑量依賴性，表明PGG可恢復(fù)生精上皮細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，推動(dòng)細(xì)胞分化進(jìn)程，逐步恢復(fù)分化秩序和功能，增加精子數(shù)量，有效改善少弱精癥。

T是雄性激素的重要組成部分，其水平與睪丸生精功能密切相關(guān)，具有促進(jìn)精子生成與成熟，提升精子數(shù)量與質(zhì)量的作用［28-29］。FSH作用于支持細(xì)胞分泌T，PRL雖然不被認(rèn)為是一種“經(jīng)典”的性激素，但其可能在男性內(nèi)分泌控制中發(fā)揮作用。本研究結(jié)果顯示：模型組小鼠血清T、FSH和PRL水平明顯低于正常組，經(jīng)各劑量PGG治療后，小鼠血清性激素水平提高，且具有劑量依賴性，高劑量PGG組小鼠血清T、FSH和PRL水平高于中劑量PGG組和低劑量PGG組。PGG可能是通過(guò)提高血清性激素水平從而改善少弱精癥小鼠生精障礙，但其對(duì)性激素作用的機(jī)制需要進(jìn)一步的研究和探討。

綜上所述，PGG對(duì)少弱精癥小鼠的生精障礙具有明顯的改善作用，本研究結(jié)果為研究改善生精狀況、提高精子活力和提高生殖質(zhì)量提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。