范亨林 吳騫 張曉霞 歐陽遠鵬

關(guān)鍵詞： 角質(zhì)層含水量;修復(fù)嫩膚;天地慈寡肽漢草凍干粉;療效觀察

【中圖分類號】 ?R283【文獻標識碼】A 【文章編號】1673-9026（2022）15--01

人皮膚成纖維細胞是皮膚真皮網(wǎng)織層中最重要的細胞，是皮膚衰老和細胞受損后的主要修復(fù)細胞之一[1]。它不但能夠促進表皮細胞的遷移、增殖 和分化，還能分泌大量的膠原蛋白、彈性纖維蛋白及多種細胞修復(fù)因子，具有強大的自我更新能力[2]，從而修復(fù)老化的皮膚。成纖維細胞是維持皮膚彈性和韌性的重要細胞[3]，其特有的生物學(xué)特性.在抗皮膚衰老中起著重要的作用。

本文就天地慈寡肽漢草凍干粉用于提升皮膚多種效果的有效性和安全性展開觀察研究，現(xiàn)報告如下。

1 對象與方法

1.1 對象 于東莞黃家圣幸中醫(yī)醫(yī)院選取有護膚需求的女性受試者35例，年齡18～50歲。所有受試者均已接受告知并簽署知情同意書。

1.2 納入標準

（1）皮膚光生物類型為Ⅱ型或Ⅲ型，以室內(nèi)活動為主，能嚴格遵守實驗要求，并簽署志愿者知情同意書者。

（2）年齡18～50歲;

（3）面部無炎癥、濕疹及銀屑病等影響療效觀察的皮膚病者;

1.3 排除標準

（1）不符合上述納入標準者;

（2）對化妝品有過敏或者高度敏感風(fēng)險者;

（3）近2個月內(nèi)參加藥物臨床試驗者或其他化妝品功效評價者;

（4）有嚴重內(nèi)分泌疾病患者、重的心血管、腎、肝、造血系統(tǒng)等原發(fā)性疾病;

（5）妊娠或哺乳期婦女;

（6）有活動性傳染病者;

（7）試驗期間受試部位應(yīng)用抗炎藥物、全身應(yīng)用糖皮質(zhì)激素免疫抑制劑類藥物;

（8）精神病患者及嚴重神經(jīng)官能癥而不能配合治療者。

1.4 實驗試劑 天地慈寡肽漢草凍干粉（天地慈生物科技有限公司）;DMEM培養(yǎng)基及胎牛血清（美國Gibco公司）;MTT（美國Sigma公司）;重組表皮生長因子（美國Gibco公司）;PDGF、VEGF、TGF-β1、MMP2、MMP9引物（上海生工）;PDGF、VEGF、TGF-β1、MMP2、MMP9抗體（美國CellSignalingTechnology公司）其他有機分析純試劑（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。

1.5 方法

（一）人皮膚成纖維細胞的培養(yǎng)與分組

復(fù)蘇細胞，添加培養(yǎng)基（89%DMEM+10%胎牛血清+1%雙抗）于37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，將第3次傳代的細胞用于后續(xù)實驗。實驗分為4組：空白對照組（NC）、以及不同濃度（加無菌水稀釋）的天地慈寡肽漢草凍干粉（1/4濃度、1/2濃度、1/1濃度（即為不稀釋））。

（二）MTT法檢測人皮膚成纖維細胞活性

將細胞懸液接種于96孔細胞培養(yǎng)板，密度為1×105個細胞/孔，培養(yǎng)24h后，空白對照組不做處理，其余組加入含不同濃度（加無菌水稀釋）的天地慈寡肽漢草凍干粉（1/4濃度、1/2濃度、1/1濃度（即為不稀釋））的細胞培養(yǎng)基，實驗重復(fù)3次。置于細胞培養(yǎng)箱中孵育24h后，根據(jù)MTT試劑盒說明書操作步驟，計算細胞存活率。

公式如下：細胞存活率（%）=（實驗組A值-空白孔A值）/（對照組A值-空白孔A值）×100%。

（三）流式細胞儀檢測人皮膚成纖維細胞增殖能力

將細胞懸液接種于12孔細胞培養(yǎng)板，密度為1.5×104個細胞/孔，孵育6h后，加入37℃預(yù)熱的預(yù)混液[磷酸鹽緩沖液（PBS）稀釋CFSE濃度至2.5μmol/L]，置于細胞培養(yǎng)箱中孵育20min后用含有2%牛血清白蛋白（BSA）的培養(yǎng)基潤洗3遍，更換為新鮮的培養(yǎng)基孵育15min?？瞻讓φ战M不做處理，其余組加入含不同濃度（加無菌水稀釋）的天地慈寡肽漢草凍干粉（1/4濃度、1/2濃度、1/1濃度（即為不稀釋））的細胞培養(yǎng)基。孵育36h后，細胞經(jīng)胰蛋白酶消化離心，PBS洗3次，重懸，流式細胞儀上樣檢測，實驗重復(fù)3次。

（四）受試者主觀評價

選取35名有護膚需求的女性受試者，在早晚面部清潔完后，全臉使用天地慈寡肽漢草凍干粉（粵G妝網(wǎng)備字2020279009;天地慈 （東莞）生物科技有限公司）2次/d，連續(xù)使用28d后進行療效主觀評價，內(nèi)容包含緊致度、平滑度、泛紅、干燥粗糙、肌膚不適感5個方面的改善情況。評價標準分為明顯改善、有所改善、無改善三個等級。

1.6 產(chǎn)品安全性評價 對受試者進行不良反應(yīng)評價，詢問受試者面部是否出現(xiàn)紅斑、刺痛等癥狀，如出現(xiàn)上述癥狀，則行斑貼試驗評估與受試產(chǎn)品相關(guān)性。

1.7 統(tǒng)計分析 應(yīng)用SPSS19.0軟件分析分析以上指標，采用t檢驗，并以（x±s）表示檢測結(jié)果，以率（%）表示比例，P<0.05為差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 天地慈寡肽漢草凍干粉對人皮膚成纖維細胞活性的影響

MTT結(jié)果顯示，地慈寡肽漢草凍干粉作用于皮膚成纖維細胞24h后，在1/4濃度、1/2濃度、1/1濃度（即為不稀釋）的范圍內(nèi)隨著濃度增大，皮膚成纖維細胞活性逐漸增加，與空白對照組相比（NC），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05圖1）。詳見圖1。

通過熒光標記探究天地慈寡肽漢草凍干粉對人皮膚成纖維細胞增殖的影響，采用平均熒光強度（MFI）進行定量分析，結(jié)果顯示，MFI數(shù)值隨著天地慈寡肽漢草凍干粉濃度升高而降低，表明細胞增殖數(shù)量隨著天地慈寡肽漢草凍干粉濃度升高而增多。與空白對照組相比（NC），1/4～1/1天地慈寡肽漢草凍干粉處理組的細胞增殖數(shù)量顯著增加（P<0.05，圖2）。流式細胞實驗與MTT結(jié)果吻合，進一步證明天地慈寡肽漢草凍干粉能夠促進人皮膚成纖維細胞增殖，詳見圖2

3 討論

本研究以人皮膚成纖維細胞為研究對象，通過 MTT 實驗評價天地慈寡肽漢草凍干粉對細胞活性的影響，結(jié)果顯示，天地慈寡肽漢草凍干粉處理組隨著濃度的增加，細胞活性顯著增加，表明能夠顯著增加人皮膚成纖維細胞活性。流式細胞儀檢測CFSE標記的人皮膚成纖維細胞，結(jié)果顯示，成纖維細胞增殖數(shù)量隨著天地慈寡肽漢草凍干粉濃度升高而增多;使用28d后，根據(jù)受試者對自身皮膚狀態(tài)、自我感受的判斷調(diào)查報告顯示，71.4%受試者認為皮膚緊致度提高，62.9%的受試者認為皮膚平滑度提高，68.6%的受試者認為泛紅改善，85.7%受試者認為皮膚干燥粗糙得到改善，88.6%的受試者認為肌膚不適感得到緩解。治療過程中，35名受試者均未出現(xiàn)不良反應(yīng)。

綜上所述，天地慈寡肽漢草凍干粉對于皮膚成纖維細胞增殖和活性有促進作用，由成纖維細胞分泌的膠原蛋白的促進也有一定的幫助，后期根據(jù)受試者主觀評價得出天地慈寡肽漢草凍干粉可以幫助皮膚提高緊致嫩滑的程度，對于皮膚粗糙和敏感有改善的作用。

參考文獻：

[1] 叢敬，吳景東.老化皮膚成纖維細胞的研究進展[J].中國美容醫(yī)學(xué).2009，（5）.736-738.

[2] 趙娟，李相軍，于曉艷，等.自體皮膚成纖維細胞在醫(yī)學(xué)美容中的應(yīng)用研究[J].中國美容醫(yī)學(xué).2008，（2）.225-228..

[3] 李利，王曦，劉蔚，等.女性面部皮膚皺紋相關(guān)因素研究--1004例成都地區(qū)漢族女性調(diào)查[J].中國實用美容整形外科雜志.2004，（3）.126-128.