陳敏氡, 王彬, 李永平, 葉新如, 林錦輝, 曾美娟, 劉建汀,朱海生*, 溫慶放*

(1. 福建省蔬菜遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所, 福州 350013; 2. 漳州市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局, 福建 漳州 363000)

花椰菜(Brassica oleraceavar.botrytis)又名花菜、菜花，為十字花科(Cruciferae)蕓薹屬作物。近年來，我國(guó)花椰菜生產(chǎn)發(fā)展迅速，2019 年全國(guó)種植面積達(dá)5.47×105hm2，產(chǎn)量達(dá)1.07×107t，居于世界首位[1]。花椰菜營(yíng)養(yǎng)豐富，兼具保健功能。多項(xiàng)研討指出，花椰菜富含類黃酮、多酚、胡蘿卜素及維生素C (Vc)等多種抗氧化活性成分，長(zhǎng)期食用能夠減少罹患乳腺癌、直腸癌及胃癌的機(jī)率。因此，在美國(guó)《時(shí)代》雜志推薦的十大健康食品中花椰菜名列第四，并被美國(guó)公眾利益科學(xué)中心列為十種超優(yōu)食物之一[2]。

花椰菜種類繁多，依據(jù)花球松緊度，可分為松花菜和緊花菜兩類。依據(jù)花球顏色，又可分為白色花椰菜和彩色花椰菜兩類。目前，我國(guó)常見的花椰菜類型為白色緊花型和白色松花型。白色緊花型花椰菜又叫白花菜，花球大，產(chǎn)量高，南北方各地均廣泛種植。白色松花型花椰菜又叫松花菜，花梗長(zhǎng)，花層薄，近幾年在珠三角、江浙地區(qū)種植量大幅增加[1]。研究表明，松花菜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量高于緊花菜，但緊花菜品種間營(yíng)養(yǎng)成分含量的變異程度低[3]。彩色花椰菜包括紫色花椰菜、黃色花椰菜和淡綠色寶塔形花椰菜，是花椰菜的一個(gè)變種，19 世紀(jì)中葉從國(guó)外引進(jìn)，除了可作為商品銷售外，還可供觀賞?，F(xiàn)有研究表明，彩色花椰菜的營(yíng)養(yǎng)成分較白色花椰菜更高[4]。馬蓉等[5]研究表明寶塔型花椰菜中Vc、總胡蘿卜素及總黃酮含量明顯高于白花菜、松花菜和青花菜。雖然，現(xiàn)階段國(guó)內(nèi)外對(duì)花椰菜的營(yíng)養(yǎng)成分已有較多報(bào)道，但仍不夠系統(tǒng)和深入，需進(jìn)一步研究品質(zhì)指標(biāo)間的關(guān)系。

聚類分析和主成分分析是果蔬品質(zhì)評(píng)價(jià)研究的重要手段[6-8]。主成分分析可以將多個(gè)指標(biāo)轉(zhuǎn)化為少數(shù)幾個(gè)綜合指標(biāo)，分析出特征性的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo),聚類分析能夠?qū)⒉煌瑯悠钒雌湓谄焚|(zhì)上的親疏程度進(jìn)行分類[9-10]。目前，在花椰菜上，這兩種分析方法多應(yīng)用于植株形態(tài)、株型等農(nóng)藝性狀及生理指標(biāo)的研究中，而在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量分析方面的研究較少[11-13]。袁建民等[14]基于主成分分析和聚類分析評(píng)價(jià)了8 個(gè)花椰菜種質(zhì)中礦質(zhì)元素的含量，篩選出Ca、S、B、Mn、Na 和Cr 元素可作為評(píng)價(jià)花椰菜花球營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的特征性礦質(zhì)元素。朗朗等[15]利用主成分分析研究了花椰菜白色花球變紫前后的代謝物，認(rèn)為芍藥素O-己糖苷、矢車菊素半乳糖苷和芍藥素-3-O-葡萄糖甙氯化物與花球變紫的相關(guān)性較強(qiáng)，由此推測(cè)花椰菜白色花球變紫很可能與矢車菊合成途徑密切相關(guān)。可見，聚類分析和主成分分析是研究、評(píng)價(jià)花椰菜品質(zhì)的一種可行方法。然而目前，除白色花椰菜之外，尚未見其他類型花椰菜有類似的分析報(bào)道。本研究以6 個(gè)品種白色、黃色花椰菜為試材，對(duì)花球中Vc、總黃酮、總多酚、脂肪、蛋白質(zhì)、葉黃素、β-胡蘿卜素、Fe、Ca 和P 等10 項(xiàng)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，并采用相關(guān)分析、聚類分析和主成分分析等統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，明確不同品種之間的品質(zhì)差異，為挖掘及選育優(yōu)良花椰菜品種提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料和儀器

試驗(yàn)于2021 年3—4 月在福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所進(jìn)行。供試材料由廈門中廈蔬菜種籽有限公司提供，6 個(gè)花椰菜(Brassica oleraceavar.botrytis)品種的花球、花梗顏色和松緊度不同(表1)。9 月中旬穴盤播種育苗，10 月下旬定植于塑料大棚，常規(guī)栽培管理。次年2 月田間采集成熟期花球，每處理5 株重復(fù)，3 次重復(fù)。

表1 供試的6 個(gè)花椰菜品種Table 1 Six cauliflower varieties tested

葉黃素、β-胡蘿卜素、沒食子酸、蘆丁等標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥98%，購(gòu)于美國(guó)Sigma 公司；乙腈，甲醇為色譜純；2,6-二氯靛酚溶液、福林酚、丙酮、石油醚、硝酸鋁、氫氧化鈉、乙醇、碳酸鈉、無水醋酸鈉等均為分析純，均購(gòu)于福州倉(cāng)山九億實(shí)驗(yàn)器材公司。

超高效液相色譜儀，購(gòu)于美國(guó)WATERS 公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀購(gòu)于德國(guó)IKA 公司；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)購(gòu)于美國(guó)Thermo 公司；紫外分光光度計(jì)購(gòu)于上海天美科學(xué)儀器有限公司；氮吹儀購(gòu)于海能未來技術(shù)集團(tuán)股份有限公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋購(gòu)于上海一恒科技有限公司。

1.2 方法

Vc 含量參照GB 5009.86—2016《食品中抗壞血酸的測(cè)定》中2,6-二氯靛酚滴定法測(cè)定；脂肪含量參照GB 5009.6—2016《食品中脂肪的測(cè)定》中第一法索氏抽提法測(cè)定；蛋白質(zhì)含量參照GB 5009.5—2016《食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》測(cè)定；P 含量參照GB 5009.87—2016《食品中磷的測(cè)定》測(cè)定; Ca含量參照GB 5009.92—2016《食品中鈣的測(cè)定》; Fe含量參照GB 5009.90—2016《食品中鐵的測(cè)定》第一法火焰原子吸收光譜法測(cè)定；總黃酮含量參照郭溆等[16]的方法測(cè)定，以蘆丁(RE)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，用紫外分光光度計(jì)在510 nm 處測(cè)定吸光度，以mg/100 g表示；總多酚含量參照歐陽玉祝等[17]的方法測(cè)定,以沒食子酸做標(biāo)準(zhǔn)曲線，用紫外分光光度計(jì)在765 nm處測(cè)定吸光度，以mg/100 g 表示；葉黃素和β-胡蘿卜素含量參照陳敏氡等[18]的方法測(cè)定，用丙酮∶石油醚(2∶1)為浸提液，采用UPLC 法測(cè)定葉黃素和β-胡蘿卜素含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(Mean±SD)表示。采用Excel 建立數(shù)據(jù)庫(kù)，用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行相關(guān)性分析、聚類分析和主成分分析。

2 結(jié)果和分析

2.1 主要營(yíng)養(yǎng)成分含量分析

從表2 可見，不同花椰菜品種花球的營(yíng)養(yǎng)成分含量存在差異。Vc 含量依次為‘209’>‘210’>‘217’>‘214’>‘218’>‘100’；總黃酮含量為‘209’>‘217’>‘214’>‘210’>‘218’>‘100’；總多酚含量為‘209’>‘214’>‘218’>‘217’>‘210’>‘100’; 脂肪含量為‘209’>‘100’>‘214’>‘210’>‘218’>‘217’；蛋白質(zhì)含量‘209’>‘214’>‘218’>‘210’>‘100’>‘217’; Fe 含量為‘209’>‘217’>‘210’>‘214’>‘218’>‘100’；Ca 含量為‘209’>‘210’>‘217’>‘218’>‘214’>‘100’；P 含量為‘209’>‘214’>‘210’>‘218’>‘217’>‘100’。葉黃素和β-胡蘿卜素僅在黃色花椰菜品種(‘209’、‘100’、‘217’)中檢出, 葉黃素含量為‘100’>‘209’>‘217’，β-胡蘿卜素含量‘209’>‘100’>‘217’。白色花椰菜品種(‘214’、‘218’和‘210’)中未檢出。

表2 6 個(gè)花椰菜品種營(yíng)養(yǎng)成分含量Table 2 Nutrient contents of six cauliflower varieties

同時(shí)，β-胡蘿卜素和葉黃素含量在不同品種間的變異程度最大，分別為131.41%和123.94%，P 最小，為12.22%。方差分析表明，6 個(gè)花椰菜品種間的Vc、總多酚、Fe、Ca、P、葉黃素和β-胡蘿卜素含量均達(dá)顯著差異，‘209’花椰菜的Vc、總多酚和β-胡蘿卜素含量最高(P<0.05)，‘209’和‘217’花椰菜中Fe含量最高(P<0.05)，‘209’和‘210’花椰菜中Ca 含量最高(P<0.05)，‘209’和‘214’花椰菜中P 含量最高(P<0.05), ‘100’花椰菜中葉黃素含量最高(P<0.05),說明這7 項(xiàng)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)在不同花椰菜品種中存在著遺傳變異。

2.2 相關(guān)性分析

對(duì)花椰菜中10 種營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析(表3)，結(jié)果表明，10 種營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)間存在復(fù)雜的關(guān)聯(lián)性, 其中Vc、總黃酮、總多酚、Fe、Ca、P、蛋白質(zhì)之間相關(guān)顯著或極顯著。Vc 與總黃酮、Fe、Ca 呈顯著正相關(guān);總黃酮與Fe 呈極顯著正相關(guān)；總多酚與Fe、P 呈顯著正相關(guān)；蛋白質(zhì)與P 呈極顯著正相關(guān)；說明通過部分指標(biāo)可以預(yù)測(cè)與之相關(guān)指標(biāo)的增減趨勢(shì)，且相關(guān)性越強(qiáng)，趨勢(shì)越明顯。然而，簡(jiǎn)單相關(guān)性分析只是對(duì)有聯(lián)系的2 個(gè)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)表面關(guān)系密切程度的衡量, 揭示多個(gè)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)之間內(nèi)在聯(lián)系還需利用多元統(tǒng)計(jì)分析。

表3 花椰菜10 個(gè)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)間的相關(guān)系數(shù)Table 3 Correlation coefficients among ten nutrient indexes of cauliflower

2.3 主成分分析

通過主成分分析得到各主成分的特征值、方差貢獻(xiàn)率、累積方差貢獻(xiàn)率和主成分載荷矩陣。結(jié)果表明，前3 個(gè)主成分的特征值分別為5.59、2.19 和1.67，均大于1，其中第1 主成分的方差貢獻(xiàn)率為55.91%，第2 主成分的為21.89%，第3 主成分的為16.69%，累積方差貢獻(xiàn)率為94.48%，說明這3 個(gè)主成分反映了原始變量的絕大部分信息。因此，提取前3 個(gè)主成分代替原10 個(gè)指標(biāo)評(píng)價(jià)花椰菜品質(zhì), 達(dá)到了降維的目的。

主成分載荷矩陣反映了品質(zhì)指標(biāo)對(duì)主成分的影響程度和作用方向。由表4 可知，第1 主成分中載荷較高且數(shù)值為正的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)有Vc (0.94)、總黃酮(0.84)、總多酚(0.94)、Fe (0.91)、Ca (0.85)和P(0.89)，這5 個(gè)指標(biāo)對(duì)第1 主成分產(chǎn)生較大的正向影響，因此第1 主成分代表Vc、總黃酮、總多酚、Fe、Ca 和P 含量。第2 主成分中載荷較高且符號(hào)為正的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)有葉黃素(0.87)和β-胡蘿卜素(0.85), 這2個(gè)指標(biāo)對(duì)第2 主成分產(chǎn)生較大的正向影響，因此第2 主成分代表葉黃素和β-胡蘿卜素含量。第3 主成分中載荷較高且數(shù)值為正的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)是蛋白質(zhì)(0.74)，這1 個(gè)指標(biāo)對(duì)第3 主成分產(chǎn)生較大的正向影響，因此第3 主成分代表蛋白質(zhì)含量。由于第1 主成分的累計(jì)貢獻(xiàn)率為55.91%，超過總貢獻(xiàn)率的一半，因此認(rèn)為，Vc、總黃酮、總多酚、Fe、Ca 和P可作為評(píng)價(jià)花椰菜花球品質(zhì)的重要指標(biāo)。

2.4 綜合評(píng)價(jià)

為消除10 種營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)不同量綱和數(shù)量級(jí)對(duì)分析結(jié)果的影響，使數(shù)據(jù)具有可比性，需要對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理。采用Z 標(biāo)準(zhǔn)化處理，將原始營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化成均值為0，標(biāo)準(zhǔn)差為1 的無量綱數(shù)據(jù)。用各指標(biāo)變量的主成分載荷(表4)除以主成分相對(duì)應(yīng)的特征值開平方根，得到4 個(gè)主成分中每個(gè)指標(biāo)所對(duì)應(yīng)的系數(shù)即特征向量，以特征向量為權(quán)重構(gòu)建3 個(gè)主成分的函數(shù)表達(dá)式:Z1=0.169X1+0.150X2+0.169X3+0.026X4+0.118X5-0.057X6+0.083X7+0.163X8+0.151X9+0.159X10;Z2=0.050X1-0.049X2+0.045X3+0.351X4-0.004X5+0.400X6+0.389X7-0.013X8-0.116X9-0.043X10;Z3=-0.127X1-0.270X20.078X3+0.338X4+0.445X5-0.214X6-0.121X7-0.234X8-0.112X9+0.253X10; 式中，X1~X10分別為Vc、總黃酮、總多酚、脂肪、蛋白質(zhì)、葉黃素、β-胡蘿卜素、鐵、鈣、磷含量的標(biāo)準(zhǔn)化值(表5)。

表4 主成分載荷矩陣Table 4 Principal component loading matrix

表5 10 個(gè)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)的數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化值Table 5 Standardized data for 10 quality evaluation indexes

按照公式F=∑ri×Zi計(jì)算綜合得分，即以各個(gè)主成分對(duì)應(yīng)的方差貢獻(xiàn)率為權(quán)重，由主成分得分和對(duì)應(yīng)的權(quán)重線性加權(quán)求和得到綜合得分。綜合得分函數(shù)為F=0.5591Z1+0.2189Z2+0.1669Z3，根據(jù)計(jì)算，6 個(gè)花椰菜品種的綜合得分依次為‘209’>‘214’>‘210’>‘218’>‘217’>‘100’ (表6)。

表6 花椰菜品種的主成分因子綜合得分和排序Table 6 Comprehensive score and rank of cauliflower varieties based on principal component factors

2.5 聚類分析

基于10 項(xiàng)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)對(duì)6 種花椰菜品種進(jìn)行聚類分析(圖1)。在歐氏距離約為21 時(shí)，10 種營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)可將6 個(gè)花椰菜品種劃分為4 類，3 個(gè)黃色花椰菜‘209’、‘100’和‘217’各為一類，3 個(gè)白色花椰菜‘210’、‘214’和‘218’聚為一類。結(jié)合主成分分析綜合得分可知，3 個(gè)黃色花椰菜品質(zhì)差異較大，‘209’的品質(zhì)最佳，其營(yíng)養(yǎng)成分Vc、總多酚、總黃酮、蛋白質(zhì)、脂肪、Fe、Ca、P 和β-胡蘿卜素含量高；‘100’的品質(zhì)最差，其葉黃素含量高，但Vc、總多酚、總黃酮、Fe、Ca、P 含量低；‘217’的品質(zhì)較差，其脂肪和蛋白質(zhì)含量低；‘210’、‘214’和‘218’的排名居中，營(yíng)養(yǎng)成分相近?？梢?，聚類分析與主成分分析結(jié)果一致，可信度較高。

圖l 聚類分析系統(tǒng)樹Fig. 1 Dendrogram by cluster analysis

3 結(jié)論和討論

本研究測(cè)定了花椰菜6 個(gè)品種的主要營(yíng)養(yǎng)成分含量，結(jié)果表明，花椰菜富含Vc、總黃酮、總多酚等生物活性物質(zhì)。果蔬中的Vc 含量一般為20~50 mg/100 g。楊月欣等[19]測(cè)定了226 種蔬菜的Vc含量，只有22 種蔬菜的Vc 含量高于50 mg/100 g,而高于100 mg/100 g 的只有3 種。供試的6 個(gè)花椰菜品種的Vc 含量都高于50 mg/100 g，其中‘209’花椰菜的Vc 含量高達(dá)112 mg/100 g?？梢姡ㄒ耸荲c 的極好來源。陳玉霞等[20]測(cè)定了25 種常見蔬菜的總多酚和總黃酮含量，結(jié)果表明大部分蔬菜的總多酚和總黃酮含量低于100 mg/100 g，而本研究的6 個(gè)花椰菜品種的總多酚含量為120~264 mg/100 g,超過了其中21種蔬菜，總黃酮含量為102~160 mg/100 g,超過了其中23 種蔬菜。與已報(bào)道的白、黃色花椰菜品種相比，供試花椰菜品種中的總黃酮和總多酚含量皆高出2~3 倍，顯現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)[4,21-22]。此外，在黃色花椰菜品種‘209’、‘100’和‘217’還檢出葉黃素和β-胡蘿卜素成分，且β-胡蘿卜素含量與花球顏色呈顯著正相關(guān)，這與前人[23-24]的研究結(jié)果一致，推測(cè)β-胡蘿卜素可能參與花椰菜黃色花球的著色過程?？偠灾?，生物活性物質(zhì)是評(píng)價(jià)花椰菜營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的重要指標(biāo)，花椰菜可作為Vc、總黃酮、總多酚和類胡蘿卜素等生物活性物質(zhì)的良好來源。

6 個(gè)花椰菜品種的營(yíng)養(yǎng)成分含量存在一定差異,變異系數(shù)為13.18%~131.21%，屬于中強(qiáng)變異。楊加付等[25]分析了花椰菜營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)性狀的遺傳效應(yīng)，認(rèn)為花椰菜中的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)性狀主要受自身基因型與外部環(huán)境的影響。本研究的供試花椰菜花球樣品均來自同一溫室大棚，立地條件、管理模式等均一致，可以消除環(huán)境因子的影響，因此，推測(cè)本研究中花椰菜品種間營(yíng)養(yǎng)成分的差異可能來源于基因型。供試的6 種花椰菜包含了黃色、白色、松花和緊花4個(gè)類型，方差分析表明，不同類型的花椰菜品種間的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)差別較大，其中3 個(gè)黃色品種間的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)差別明顯，說明黃色花椰菜的營(yíng)養(yǎng)變異更為豐富，類型廣泛。楊加付等[26]認(rèn)為花椰菜花球的外觀品質(zhì)會(huì)明顯影響其營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)性狀，增大球徑或球高對(duì)提高花椰菜品種的Vc 含量有利。因此，供試6個(gè)花椰菜品種的品質(zhì)差異可能也與其外觀品質(zhì)有關(guān)。未來有必要深入研究外觀性狀與營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)之間的遺傳相關(guān)性。因?yàn)橥庥^品質(zhì)是容易直接鑒定的性狀，在育種中，我們可以通過選擇外觀品質(zhì)性狀來改良營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)性狀，進(jìn)一步育成符合育種目標(biāo)的優(yōu)質(zhì)品種。

采用主成分分析法將花椰菜10 項(xiàng)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)降維為3 個(gè)綜合指標(biāo)，簡(jiǎn)化了數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)，評(píng)價(jià)結(jié)果更為客觀、合理。建立綜合評(píng)價(jià)函數(shù)模型：F=0.5591Z1+0.2189Z2+0.1669Z3，綜合得分排在前2 位的花椰菜品種分別為‘209’和‘214’。結(jié)合花椰菜類型可知，松花型的綜合品質(zhì)基本高于緊花型，這與丁云花等[3]的研究結(jié)果一致，可見主成分分析法是評(píng)價(jià)花椰菜營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的一種可行方法。利用聚類分析方法可將6 個(gè)花椰菜品種劃分為4 類，3 個(gè)黃色花球花椰菜‘209’、‘100’和‘217’各為一類，3 個(gè)白色花球花椰菜‘210’、‘214’和‘218’聚為一類，與主成分分析綜合排名情況相符。這表明聚類結(jié)果科學(xué)有效，該方法可用于花椰菜的品質(zhì)分析。但由于本研究只測(cè)定了6 個(gè)花椰菜品種，涵蓋的品種數(shù)量和類型不夠，因此后續(xù)仍需加大該方法在花椰菜品質(zhì)分析上的應(yīng)用，從而進(jìn)一步驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性。

綜上，6 個(gè)花椰菜中富含Vc、總黃酮、總多酚、Fe、Ca 和P 等營(yíng)養(yǎng)成分，各營(yíng)養(yǎng)成分間存在一定的相關(guān)性。不同品種花椰菜的營(yíng)養(yǎng)成分存在著豐富的遺傳變異。通過運(yùn)用主成分分析與聚類分析方法,將6 個(gè)花椰菜品種分為4 類，綜合評(píng)價(jià)篩選出‘209’品質(zhì)最佳，可作為候選株系，在今后研究中可以結(jié)合其豐產(chǎn)性、抗逆性等指標(biāo)進(jìn)一步篩選，創(chuàng)制出更加優(yōu)良的花椰菜品種。