蘭為環(huán)，張綠茵，李爽，唐海

（江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司，天津 300400）

佐匹克?。╖opiclone）是法國(guó)賽諾菲-安萬特公司（Sanofi-Aventis）于1987年12月上市的第一個(gè)非苯二氮?類失眠治療藥物，是環(huán)吡咯酮類第三代催眠鎮(zhèn)靜藥物的代表，具有鎮(zhèn)靜、抗焦慮、抗驚厥和肌肉松弛作用。其原料藥合成過程中使用了多種有機(jī)溶劑[1-2]，均需要采用有效方法對(duì)其殘留量進(jìn)行控制以保證產(chǎn)品的安全性。現(xiàn)有檢測(cè)方法[3-4]多針對(duì)第三類溶劑和部分第二類溶劑進(jìn)行檢查，并未對(duì)合成工藝中用到的第二類溶劑二甲苯及可能含有的第一類溶劑苯進(jìn)行檢測(cè)，本文參照2020年版《中國(guó)藥典》和ICH 的相關(guān)要求[5]，根據(jù)藥物合成工藝，選取了苯、三氯甲烷和二甲苯作為殘留溶劑的控制項(xiàng)目，擬定限度分別為0.000 2%、0.006%和0.217%，開發(fā)了頂空毛細(xì)管氣相色譜法對(duì)其進(jìn)行有效檢查。通過對(duì)佐匹克隆中殘留溶劑專屬性、準(zhǔn)確性等進(jìn)行研究[6]，從而確認(rèn)檢測(cè)方法的有效性、可靠性，進(jìn)而達(dá)到對(duì)產(chǎn)品中這幾個(gè)殘留溶劑準(zhǔn)確檢測(cè)和控制的目的。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

7890A 型氣相色譜儀，配有7697A 型頂空自動(dòng)進(jìn)樣器（安捷倫有限公司）；XS-105 型電子分析天平（梅特勒-托利多公司，精度為十萬分之一）。

1.2 試藥

佐匹克隆原料藥（批號(hào)：18000491、17000017、17000016，自制），二甲苯（色標(biāo)試劑，批號(hào)：20131105，天津威晨化學(xué)試劑有限公司），苯（色譜純，批號(hào)：H1520010，阿拉?。燃淄椋ê俊?9.0%，批號(hào)：20161102，利安隆博華（天津）醫(yī)藥化學(xué)有限公司）。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

以6%氰丙基苯-94%二甲基硅氧烷為固定相的毛細(xì)管為色譜柱（DB-624，30 m×0.32 mm×1.8 μm），起始溫度為40 ℃，維持5 分鐘，以每分鐘20 ℃的速率升溫至100 ℃，再以每分鐘10 ℃的速率升溫至160 ℃，再以每分鐘40 ℃的速率升溫至240 ℃，保持5 分鐘；進(jìn)樣口溫度200 ℃；檢測(cè)器溫度250 ℃；FID 檢測(cè)器，以氮?dú)鉃檩d氣，流速為每分鐘2.0 mL，分流比為3∶1。頂空瓶平衡溫度為85 ℃，平衡時(shí)間為30 分鐘，定量環(huán)溫度85 ℃，傳輸線溫度100 ℃。

2.2 溶液的配制

2.2.1 空白溶劑 精密量取二甲基亞砜（DMSO）5 mL，置于頂空瓶中，密封。

2.2.2 對(duì)照品溶液 取三氯甲烷、苯與二甲苯各適量，精密稱定，用二甲基亞砜定量稀釋制成每l mL 中分別約含0.006 mg、0.4 μg、0.2 μg 與0.217 mg 的混合溶液，精密量取5 mL，置20 mL 頂空瓶中，搖勻，密封，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液 取本品約0.5 g，精密稱定，置20 mL 頂空瓶中，精密加入二甲基亞砜5 mL，密封，振搖使混合成混懸液（頂空加熱可使溶解）作為供試品溶液。

2.2.4 供試品加標(biāo)溶液：精密稱定佐匹克隆0.5 g，置頂空瓶中，加入2.2.1 節(jié)5 mL 對(duì)照品溶液，密封，振搖，使成混懸液后，作為供試品加標(biāo)溶液。

2.3 專屬性考察

取三氯甲烷適量，用DMSO 溶解并稀釋制成每l mL 中分別約含0.06 mg 的三氯甲烷定位溶液；取苯適量，用DMSO 溶解并稀釋制成每l mL 中分別約含4 μg 的苯定位溶液；取二甲苯適量，用DMSO 溶解并稀釋制成每l mL 中分別約含2.17 mg 的二甲苯定位溶液；取上述三氯甲烷、苯、二甲苯定位溶液，及2.2 節(jié)空白溶劑、對(duì)照品溶液、供試品溶液、供試品加標(biāo)溶液，分別精密量取5 mL，置于頂空瓶中，密封，頂空進(jìn)樣，按照2.1 節(jié)色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果如表1及圖1所示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示空白溶劑、佐匹克隆主峰對(duì)殘留溶劑測(cè)定無干擾，各雜質(zhì)峰之間，分離度均大于1.5，佐匹克隆殘留溶劑測(cè)定方法專屬性良好。

表1 專屬性試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 The result of exclusivity

圖1 GC 色譜圖Fig.1 Gas chromatograms

2.4 檢測(cè)限和定量限考察

取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，逐級(jí)稀釋，當(dāng)S/N 約為10 時(shí)，三氯甲烷、苯、二甲苯定量限分別為1.78 μg/mL、0.064 5 μg/mL、0.390 μg/mL；當(dāng)S/N 約為3 時(shí)，三氯甲烷、苯、二甲苯檢測(cè)限分別為0.446 μg/mL、0.016 1 μg/mL、0.086 6 μg/mL。

2.5 線性關(guān)系考察

在定量限濃度至不低于150%指標(biāo)濃度的范圍內(nèi)取6個(gè)濃度點(diǎn)，分別精密量取5 mL，各取三份，按照2.1節(jié)的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，考察各組分濃度與峰面積的線性關(guān)系，并以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，用最小二乘法計(jì)算線性回歸圖，結(jié)果表明三氯甲烷在1.79～8.37 μg/mL 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為y=0.877 7x-0.047 4，r=0.996 1，苯在0.06～0.30 μg/mL 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為y=29.790 4x-0.028 4，r=0.996 9；二甲苯在0.39～324.75 μg/mL 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為y=10.208 8x-27.354 5，r=0.997 6。說明該方法在規(guī)定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 準(zhǔn)確度

按2.2 節(jié)供試品溶液的配制方法平行配制供試品溶液2 份，作為空白供試品溶液；精密稱取供試品約0.5 g，置頂空瓶中，稱取12 份，分別精密加入相當(dāng)于三氯甲烷及苯定量限（3 份）、二甲苯定量限（3 份）、100%（3 份）和120%（3 份）限度的溶液各5 mL，密封，振搖，混合均勻，頂空進(jìn)樣。按照2.1 節(jié)的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。結(jié)果如表2所示，該方法的準(zhǔn)確度較高，適用于佐匹克隆原料藥中3 種溶劑的殘留量測(cè)定。

表2 回收率測(cè)試結(jié)果Tab.2 Data of the recovery test

（續(xù)表）

2.7 精密度

2.7.1 儀器精密度實(shí)驗(yàn)

取2.2.2 節(jié)對(duì)照品溶液5 mL，置于頂空瓶中，密封，取6 份，頂空進(jìn)樣，進(jìn)樣6 次。根據(jù)譜圖分別記錄三氯甲烷、苯及二甲苯的峰面積，結(jié)果表明三氯甲烷、苯、二甲苯峰面積的RSD 依次分別為2.1%、1.5%，1.7%，儀器精密度良好。

2.7.2 方法精密度實(shí)驗(yàn)

分別按2.2節(jié)配制方法對(duì)照品溶液平行配制2份，供試品溶液平行配制6 份，供試品加標(biāo)溶液平行配制6 份；精密量取空白溶劑、對(duì)照品溶液、供試品溶液及供試品加標(biāo)溶液各5 mL，分別置各頂空瓶中，密封，頂空進(jìn)樣；根據(jù)測(cè)定結(jié)果按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品溶液中殘留溶劑量及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果顯示供試品溶液中三氯甲烷、苯、二甲苯均未檢出；供試品加標(biāo)溶液中三氯甲烷、苯、二甲苯回收率的RSD 依次分別為2.6%、1.9%、1.6%，方法精密度良好。

2.7.3 中間精密度

按2.2 節(jié)各溶液方法配制，由不同的分析人員、不同時(shí)間、不同儀器按2.1 節(jié)色譜條件依次測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果顯示，供試品溶液中三氯甲烷、苯、二甲苯均未檢出；12 份供試品加標(biāo)溶液中三氯甲烷、苯、二甲苯回收率的RSD 依次分別為4.3%、4.5%、2.4%，中間精密度良好。

2.8 耐用性

2.8.1 溶液穩(wěn)定性

按“2.2”項(xiàng)下配制空白溶劑、對(duì)照品溶液、供試品溶液、供試品加標(biāo)溶液，分別精密量取5 mL 分別置各頂空進(jìn)樣小瓶中，密封，室溫放置，分別于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、42 h 頂空進(jìn)樣，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果顯示室溫放置42 h，對(duì)照品溶液中三氯甲烷、苯、二甲苯峰面積RSD 分別為2.3%、2.2%、2.9%；供試品溶液中均未檢出相關(guān)溶劑；供試品加標(biāo)溶液中三氯甲烷、苯、二甲苯溶劑峰面積RSD 分別為2.1%、2.0%、1.6%；佐匹克隆原料藥殘留溶劑檢測(cè)對(duì)照品溶液、供試品溶液、供試品加標(biāo)溶液室溫放置在42 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8.2 耐用性

按2.2 節(jié)配制空白溶劑、對(duì)照品溶液、供試品溶液、供試品加標(biāo)溶液，分別考察不同流速、頂空溫度、柱升溫程序的影響，按照2.1 節(jié)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果顯示對(duì)照品溶液中三氯甲烷、苯、二甲苯峰面積RSD 依次為2.7%、4.4%、2.1%；供試品溶液中三氯甲烷、苯、二甲苯均未檢出；供試品加標(biāo)溶液中三氯甲烷、苯、二甲苯回收率的RSD依次為3.0%、3.5%、3.6%；該方法耐用性良好。

2.9 樣品檢測(cè)

分別取佐匹克隆原料藥18000491、17000016、17000017 三個(gè)批次的樣品進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果顯示該三批樣品中三氯甲烷、苯、二甲苯均未檢出。

3 結(jié)論

本文對(duì)佐匹克隆原料藥合成工藝中使用到的毒性溶劑苯、二甲苯和三氯甲烷的控制方法進(jìn)行了研究，采用頂空毛細(xì)管氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)該方法進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三氯甲烷、苯及二甲苯3 種有機(jī)溶劑均完全分離，空白溶劑無干擾；3 種溶劑的定量限分別為1.78 μg/mL、0.064 5 μg/mL、0.390 μg/mL，分別在1.79～8.37 μg/mL、0.06～0.30 μg/mL、0.3～324.75 μg/mL 濃 度 范 圍 內(nèi)線性關(guān)系良好，3 種溶劑的回收率分別為100.0%（RSD=1.8%，n=9），99.0%（RSD=1.8%，n=9）和96.8%（RSD=1.1%，n=9），準(zhǔn)確度良好；變動(dòng)分析方法中不同流速、頂空溫度、柱升溫程序，對(duì)測(cè)定結(jié)果無顯著影響，方法耐用性良好。以上結(jié)果表明該方法靈敏度高，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于佐匹克隆原料藥中三氯甲烷、苯、二甲苯的測(cè)定。