林章秀 廈門惠盈動物科技有限公司 福建廈門 361023

恩諾沙星也叫做乙基環(huán)丙沙星，藥物是屬于喹諾酮類的抗生素，是指定為動物的專用藥物，屬于廣譜的殺菌藥。主要是對支原體有比較強的抗菌作用，也對大腸桿菌、克雷伯桿菌、沙門氏菌、變形桿菌、嗜血桿菌以及金黃色葡萄球菌、溶血性巴氏桿菌有一定抗菌作用。對綠膿桿菌、鏈球菌作用較弱，對厭氧菌作用微弱。對敏感菌有明顯的抗菌后效應。但恩諾沙星難溶于水，臨床應用時，很容易造成藥物損失，增加了養(yǎng)殖成本。為提高恩諾沙星溶解度，本試驗利用無水碳酸鈉與恩諾沙星通過混合法制備堿性恩諾沙星粉，并進行穩(wěn)定性試驗，為該制劑的臨床應用提供試驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要藥品與試劑恩諾沙星（浙江國邦藥業(yè)，批號151015-10，含量99.0%）；無水碳酸鈉（唐山三友化工股份有限公司，批號180109）；恩諾沙星對照品（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號H0081206，含量99.9%）；乙腈為色譜純，磷酸、三乙醇胺均為分析純，購自西隴科學股份有限公司；水為超純水，實驗室自制。

1.2 儀器和設備電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，型號MS105DU）；超聲波清洗器（天津市東康科技，型號DS-3120）；實驗型pH計（（雷磁）上海儀電科學儀器股份有限公司）；電熱恒溫干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司，型號DHG-9247A），；高效液相色譜儀（上海伍豐科學儀器有限公司，型號LC-100）；電子秤（廈門懿恒電子有限公司，型號TCS-150）；振蕩篩（常州市范進干燥設備廠，型號10022）；V型高效混合機（常州市范進干燥設備廠，型號V-1000）。

1.3 堿性恩諾沙星粉制備按質(zhì)量比M（恩諾沙星）∶M（無水碳酸鈉）=1∶9，稱取原輔料，進行過篩。過篩順序為先恩諾沙星，后無水碳酸鈉；篩網(wǎng)目數(shù)為60目。過篩后的物料投入V型混合機中進行混合（總物料體積應為混合機總?cè)莘e的30%～70%）[1]?；旌蠒r間10 min，混合結(jié)束后采用隨機取樣法，在混合粉體的不同部位隨機取10份樣品，進行含量均勻度測定，并以此為評價指標對混合時間進行驗證。另取樣品，進行水中溶解度、1%水溶液pH測定。產(chǎn)品制備3批次，批號分別為180301、180302、180303。

1.4 堿性恩諾沙星粉檢測

1.4.1 堿性恩諾沙星粉含量均勻度的測定 稱取堿性恩諾沙星粉樣品10份，按恩諾沙星粉（水產(chǎn)用）[2]質(zhì)量標準進行含量檢測，測定以標示量為100的相對含量X，求其均值和標準差S，以及標示量與均值之差的絕對值A。若A＋2.2S≤15.0，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定[3]。

1.4.2 堿性恩諾沙星粉溶解度的測定 分別稱取堿性 恩 諾 沙 星1.00 g、2.00 g、3.00 g、4.00 g、5.00 g、6.00 g、7.00 g、8.00 g、9.00 g、10.00 g、11.00 g、12.00 g，分別置于100 mL的容量瓶中，加入適量純化水（25±2℃），定容，每隔5 min強力振搖30 s；觀察溶解情況，觀察30 min，當看不見恩諾沙星顆粒時，即視為完全溶解[3]。

1.4.3 堿性恩諾沙星粉1%水溶液pH測定 稱取3批次堿性恩諾沙星粉各1.00 g，加入100 mL純化水，攪拌使溶解，按溶液pH檢測方法進行檢測，對檢測結(jié)果取平均值。

1.5 堿性恩諾沙星粉穩(wěn)定性試驗配制3批恩諾沙星與無水碳酸鈉（1∶9）樣品，混合10 min，其中1批進行影響因素試驗，取3批進行加速試驗和長期穩(wěn)定性試驗[2]。

1.5.1 影響因素試驗 取1批堿性恩諾沙星粉樣品，用純鋁袋包裝進行試驗。（1）高溫試驗：置于60℃恒溫箱中；（2）高濕試驗：置于25℃、相對濕度92.5%的恒溫恒濕箱中；（3）強光照射試驗：置于照度為4 000 Lux的光照箱中。

每項試驗期為10 d，于第5 d、第10 d取樣，觀察外觀和性狀，檢測pH值、水分及恩諾沙星含量?？疾旖Y(jié)果與第0 d的檢測結(jié)果進行比較，進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以平均值表示。

1.5.2 加速試驗 堿性恩諾沙星粉樣品取3批，用純鋁袋包裝，放置在恒溫恒濕箱中，設置溫度40℃、相對濕度75%，放置6個月。在第1、2、3、6月時取樣，檢測外觀與性狀、水分、pH值、恩諾沙星含量。檢測結(jié)果分別與第1 d的檢測結(jié)果進行比較，進行統(tǒng)計分析，結(jié)果以平均值表示。

1.5.3 長期穩(wěn)定性試驗 堿性恩諾沙星粉樣品取3批，用純鋁袋包裝，在25℃、相對濕度60.0%的條件下遮光密封保存24個月，分別于第3、6、9、12、18、24個月月末取樣1次，檢測外觀性狀、色澤、pH值、水分及恩諾沙星含量變化。恩諾沙星含量測定采用HPLC法，色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.025 moL/L磷酸溶液（用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH值至3.0）-乙腈（83∶17）為流動相；進樣量為10μL；檢測波長為278 nm；流速為1.0 mL/min。理論塔板數(shù)按恩諾沙星峰計算不低于2 500。分別與第1 d的檢測結(jié)果進行比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 堿性恩諾沙星粉含量均勻度結(jié)果堿性恩諾沙星粉通過混合機混合10 min，3批次的A＋2.2S數(shù)值都小于15，含量均勻度符合獸藥典要求，因此，以恩諾沙星與無水碳酸鈉1∶9混合10 min的生產(chǎn)工藝合理。見表1。

表1 含量均勻度結(jié)果

2.2 堿性恩諾沙星粉溶解度的測定結(jié)果當100 mL水中的堿性恩諾沙星為10.00 g時，溶液無可見顆粒，視為完全溶解；而當堿性恩諾沙星粉為11.00 g時，還有可見顆粒，視為不完全溶解（見表2）。因此，確定該堿性恩諾沙星溶解度約為10.00 g/100 mL（不完全精確），完全能滿足對于需要通過加藥器給藥的養(yǎng)殖場。

表2 溶解度測定結(jié)果

2.3 堿性恩諾沙星粉1%水溶液pH測定結(jié)果由表3測定結(jié)果可知：堿性恩諾沙星粉1%水溶液的pH在11.12～11.25。

表3 1%水溶液pH測定結(jié)果

2.4 穩(wěn)定性試驗結(jié)果由表4可知：堿性恩諾沙星粉在高溫、高濕、強光照射條件下放置時，外觀和性狀、pH均無明顯變化；水分逐漸升高，恩諾沙星含量逐漸下降。

表4 堿性恩諾沙星粉影響因素試驗結(jié)果（n=1）

由表5可知：在加速試驗整個過程中，堿性恩諾沙星粉的外觀、pH值基本無變化，水分隨時間延長逐漸升高，恩諾沙星含量隨時間延長逐漸降低。

表5 堿性恩諾沙星粉加速試驗結(jié)果（n=3）

由表6可知：樣品存放2年期間，外觀性狀未發(fā)生明顯改變，pH值有降低趨勢；水分由1.5%增加至2.5%；恩諾沙星含量由10.03%下降至9.62%，含量下降未超過標示量百分含量的10%，符合規(guī)定。說明該堿性恩諾沙星可溶性粉配方及工藝科學、合理、簡單易操作，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，有效期暫定2年。

表6 堿性恩諾沙星粉長期穩(wěn)定性試驗結(jié)果（n=3）

3 結(jié) 論

經(jīng)過前期小樣測試，可以確定該配方比例為質(zhì)量比M（恩諾沙星）∶M（無水碳酸鈉）=1∶9，堿性恩諾沙星粉的含量規(guī)格為10%。

穩(wěn)定性試驗，是考察藥物隨著溫度、濕度、光線的變化，放置不同時間變化的規(guī)律，為獸藥的生產(chǎn)過程、包裝材料、保存期、運輸條件提供了科學依據(jù)，可確定產(chǎn)品的有效期限[4]。獸藥的有效期，是衡量藥物穩(wěn)定性的重要指標，一般指的是在（25±2）℃、相對濕度（60%±10%）條件下，當藥物含量降解至標示量的90%時所需要的時間[5]。本試驗中，包裝樣品用的純鋁袋，具有很好的遮光、防潮性能，密封性好。用該純鋁袋分裝堿性恩諾沙星粉，密封保存24個月，其外觀和性狀、pH值均無明顯改變，水分和恩諾沙星含量略有變化，但檢測結(jié)果合格、均符合獸藥典的要求，因此，有效期可暫定為2年。

該堿性恩諾沙星可溶性粉配方合理、工藝科學，簡單易操作，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，可以進行規(guī)模生產(chǎn)。