范永嬋 上杭縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 福建上杭 364200

禽流感（Avian influenza，AI）是由A型流感病毒（AIV）引起的一種從呼吸系統(tǒng)到全身嚴(yán)重?cái)⊙榷喾N癥狀的禽類烈性傳染病，不僅嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)，而且對公共衛(wèi)生安全構(gòu)成了極大威脅。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為A類傳染病，我國將其列為一類動(dòng)物疫病。疫苗免疫是有效防控禽流感最重要的手段之一。為掌握禽流感疫苗不同免疫次數(shù)產(chǎn)生的免疫效果，進(jìn)行禽流感疫苗一免和二免試驗(yàn)，對免疫效果進(jìn)行對比與分析。

1 材料與方法

1.1 試劑禽流感病毒H5亞型Re-11株、H7亞型Re-3株血凝抑制試驗(yàn)抗原，陽性血清、陰性血清購自哈爾濱國生生物科技股份有限公司；1%紅細(xì)胞懸液、磷酸鹽緩沖液由實(shí)驗(yàn)室自配。

1.2 疫苗重組禽流感病毒（H5＋H7）三價(jià)滅活疫苗（H5N1Re-11株+Re-12株、H7N9H7-Re3株）來自政府統(tǒng)一采購。

1.3 器材一次性96孔V型微量反應(yīng)板、單道與多道移液器、低速臺(tái)式離心機(jī)、微量振蕩器、1.5 mL離心管等。

1.4 樣品來源血清樣品采自上杭縣臨城鎮(zhèn)4家規(guī)模禽場（2家河田雞場、2家番鴨場）。

1.5 樣品處理與保存翅靜脈采集2 mL血液樣品，3 000 r/min離心3 min，取上層血清倒入1.5 mL離心管并編號，置-20℃冰箱保存，備檢。

1.6 檢測方法根據(jù)GB/T18936-2020《高致病性禽流感診斷技術(shù)》規(guī)定，采用血凝（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）微量法。

1.7 結(jié)果判定HI抗體效價(jià)≥4log2，判定為免疫合格，HI抗體效價(jià)≤3log2，判定為免疫不合格；免疫抗體檢測合格數(shù)達(dá)到抽檢總數(shù)的70%以上，判定為群體免疫合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 各規(guī)模禽場存欄數(shù)、免疫及樣本采集情況2021年6～8月，選取臨城鎮(zhèn)飼養(yǎng)管理水平相當(dāng)?shù)?家規(guī)模禽場進(jìn)行禽流感一免和二免免疫效果對比。各場存欄數(shù)、免疫及樣本采集情況見表1。

表1 各規(guī)模禽場存欄數(shù)、免疫及樣本采集情況

2.2 禽流感H5Re-11株一免抗體檢測結(jié)果兩家規(guī)模雞場一免H5Re-11株的抗體合格率分別為86.7%、83.3%，抗體效價(jià)達(dá)到6log2以上的血樣共33份，占檢測總數(shù)的55%；兩家規(guī)模鴨場一免H5Re-11株的抗體合格率分別為60.0%、63.3%，抗體效價(jià)達(dá)到6log2以上的血樣共14份，占檢測總數(shù)的23.3%，見表2。結(jié)果表明，一免雞群H5Re-11株免疫抗體合格率明顯高于一免鴨群，超過農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定≥70%的標(biāo)準(zhǔn)，且雞群血樣抗體效價(jià)達(dá)到6log2以上的比鴨群多得多，能起到較好的群體保護(hù)作用。一免鴨群H5Re-11株的免疫抗體合格率低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，存在發(fā)生疫病的風(fēng)險(xiǎn)。

表2 H5Re-11株一免抗體檢測結(jié)果

2.3 禽流感H7Re-3株一免抗體檢測結(jié)果兩家規(guī)模雞場一免H7Re-3株的抗體合格率分別為83.3%、80.0%，抗體效價(jià)達(dá)到6log2以上的血樣共27份，占檢測總數(shù)的45.0%；兩家規(guī)模鴨場一免H7Re-3株的抗體合格率均為53.3%，抗體效價(jià)達(dá)到6log2以上的血樣10份，占檢測總數(shù)的16.7%，見表3。結(jié)果表明，一免雞群H7Re-3株免疫抗體合格率明顯高于一免鴨群，超過農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，且抗體效價(jià)達(dá)到6log2以上的血樣遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于鴨群，能起到群體保護(hù)作用。鴨群一免H7Re-3株的抗體合格率低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，存在發(fā)生疫病的風(fēng)險(xiǎn)。

表3 H7Re-3株一免抗體檢測結(jié)果

2.4 禽流感H5Re-11株不同免疫次數(shù)抗體檢測結(jié)果雞群二免H5Re-11株的抗體合格率為100%，抗體效價(jià)集中在8log2；鴨群的二免抗體合格率為83.3%，抗體效價(jià)大部分集中在6log2、7log2。雞群未開展二免H5Re-11株的抗體合格率為86.7%，鴨群為60.0%，見表4。結(jié)果表明，雞群和鴨群二免H5Re-11株的抗體合格率分別大大高于一免雞群和鴨群。通過二免，雞群抗體效價(jià)更高且整齊度較好，鴨群略差。

表4 H5Re-11株不同免疫次數(shù)抗體檢測結(jié)果

2.5 禽流感H7Re-3株不同免次數(shù)抗體檢測結(jié)果雞群二免H7Re-3株的抗體合格率為100%，抗體效價(jià)集中在8log2；鴨群抗體合格率為80.0%，抗體效價(jià)大部分集中在6log2、7log2。雞群未開展二免H7Re-3株的抗體合格率為83.3%，鴨群為56.7%，見表5。結(jié)果表明，雞群和鴨群二免H7Re-3株的抗體合格率分別大大高于一免雞群和鴨群。通過二免，雞群抗體效價(jià)更高且整齊度較好，鴨群略差。

表5 H7Re-3株不同免次數(shù)抗體檢測結(jié)果

2.6 不同禽場、不同免疫次數(shù)抗體檢測總體情況一免雞群的抗體合格率大大超過一免鴨群，二免雞群和鴨群的抗體合格率均明顯高于一免。H5Re-11株的免疫抗體合格率高于H7Re-3株，見表6。結(jié)果表明，雞群的免疫效果比鴨群好，H5Re-11株的免疫效果比H7Re-3株好。

表6 不同禽場、不同免疫次數(shù)抗體檢測匯總表

3 小結(jié)與討論

1）試驗(yàn)結(jié)果表明，雞群的免疫效果好于鴨群，二免免疫效果相較一免效價(jià)更高、更整齊。在生產(chǎn)實(shí)踐中，雞群要獲得較好的免疫效果，建議實(shí)行二免；對于鴨群，必須實(shí)施二免才能達(dá)到足夠的群體保護(hù)率。

2）本試驗(yàn)結(jié)果顯示H5Re-11株的免疫抗體合格率高于H7Re-3株，在多年的免疫監(jiān)測工作中也發(fā)現(xiàn)其他二價(jià)苗也有相類似的情況，這是否與檢測數(shù)量、疫苗中抗原相互競爭或抗原含量的多少存在相關(guān)性，有待進(jìn)一步探討。

3）高致病性禽流感是導(dǎo)致家禽死亡的主要疫病之一，制定合理的免疫程序，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高免疫接種技術(shù)，免疫接種前后1周不使用磺胺類、呋喃類抑制抗體產(chǎn)生的藥物，不安排消毒、轉(zhuǎn)群等以減少應(yīng)激，免疫接種前在飲水中添加電解多維、黃芪多糖等，可有效提高免疫效果。