羅 璽，許小琪，劉冬榕，王 糾，韓 兵，時 軍

·藥劑與工藝·

丹參酮IIA-丹酚酸B共載脂質體水凝膠制備及性能考察

羅 璽1，許小琪2，劉冬榕1，王 糾1，韓 兵3，時 軍1, 4*

1.廣東藥科大學中藥學院，廣東 廣州 510006 2.汕頭市科學技術協會，廣東 汕頭 515031 3.中國醫(yī)學科學院整形外科醫(yī)院，北京 100144 4.廣東省局部精準遞藥制劑工程技術研究中心，廣東 廣州 510006

制備丹參酮IIA-丹酚酸B共載脂質體水凝膠（Lip-Gel@TSA/SAB），并進行離體皮膚滲透動力學研究。采用薄膜分散-pH梯度法制備丹參酮IIA-丹酚酸B共載脂質體，再進一步負載于氧化透明質酸/琥珀酰殼聚糖，制得水凝膠Lip-Gel@TSA/SAB，進行掃描電子顯微鏡（SEM）表征；HE染色法研究Lip-Gel@TSA/SAB皮膚刺激性；動態(tài)透析法研究Lip-Gel@TSA/SAB的體外釋藥規(guī)律；改良Franz擴散池法研究Lip-Gel@TSA/SAB體外透皮滲透和真皮層滯留性能，計算并擬合藥物釋放模型。脂質體在透射電子顯微鏡（TEM）下呈球狀或類球狀層狀囊泡結構，平均粒徑為（189.50±1.57）nm，粒度多分散系數（polydispersity index，PDI）為0.246±0.030，平均ζ電位為（?18.73±1.41）mV。Lip-Gel@TSA/SAB呈橘紅色，質地均勻，內部為三維多孔網狀結構。體外透皮試驗表明，TSA-SAB Lips/Gel中TSA、SAB在48 h內單位面積累積透過量分別為（17.55±1.01）、（918.99±50.83）μg/cm2，真皮滯留量分別為（10.07±0.75）、（36.12±2.06）μg/cm2，符合Hixon-crowell方程和一級動力學模型。Lip-Gel@TSA/SAB處方工藝合理，具有良好的透皮吸收性能和藥物真皮滯留性能。

脂質體；水凝膠；皮膚滲透動力學；丹參酮IIA；丹酚酸B；薄膜分散-pH梯度法；透明質酸；琥珀酰殼聚糖；動態(tài)透析法；透皮吸收

增生性瘢痕（hypertrophic scar，HS）是皮膚深度創(chuàng)傷愈合的病理性結局，成纖維細胞過度增殖或細胞外基質過度沉積形成隆起狀皮膚病變。現多采用手術、激光、藥物注射等治療方式，但存在高復發(fā)率、皮膚萎縮、毛細血管擴張、局部壞死等不良反應[1-2]。明代《證治準繩瘍醫(yī)》記載，瘢痕又稱蟹足腫、黃瓜癰，病機為瘀血阻滯。丹參能“破積聚癥堅，散癭贅惡瘡”，具有活血化瘀、涼血消癰的功效，以丹參酮IIA（tanshinone IIA，TSA）和丹酚酸B（salvianolic acid B，SAB）為代表性成分[3]?，F代藥理研究證明，丹參具有改善微循環(huán)、抗血栓、抗凝血、調節(jié)免疫等作用，以及顯著的抗炎、抗纖維化的效果，能夠有效防治增生性瘢痕[4]，臨床有丹參注射液、丹參川芎嗪注射液、丹參涂膜劑等運用于HS的防治[5]。中醫(yī)藥防治HS具有安全有效的優(yōu)勢，為降低毒副作用、提高患者依從性、避免口服給藥的肝臟首過效應，研制防治HS的經皮給藥制劑具有重大意義。

TSA具有明顯的抗肝、腎、心肌纖維化作用，SAB能夠有效抑制成纖維細胞增殖及膠原合成，在防治HS方面具有廣闊的應用前景。Chen等[6]研究發(fā)現，TSA能阻斷細胞周期，誘導細胞早期凋亡，降低凋亡抑制基因（survivin）蛋白的表達，從而治療皮膚纖維化疾病。Liu等[4]發(fā)現，SAB能夠減輕博萊霉素誘導的小鼠皮膚纖維化程度，其機制可能與抑制轉化生長因子-β1（transforming factor-β1，TGF-β1）/SMAD、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）/細胞外調節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）信號通路有關。Peng等[7]通過建立結腸炎小鼠模型觀察到丹參莖葉總酚酸與丹參酮聯用時對結腸炎具有協同治療作用，聯合給藥藥效優(yōu)于單獨給藥。因此，本研究擬構建丹參酮IIA-丹酚酸B共載脂質體水凝膠（Lip-Gel@TSA/SAB），為活血化瘀中藥的納米透皮制劑提供新的研究思路。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UltiMate 3000高效液相色譜儀系統(tǒng)，賽默飛世爾科技公司；LF-50型脂質體擠出儀，加拿大Avestin公司；NK200-1B型可視孔氮吹儀，杭州米歐儀器有限公司；JY 96-IIN型超聲波細胞破碎機，寧波新芝生物科技股份有限公司；RE-2000A型旋轉蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；SHA-B水浴恒溫振蕩器，上海力辰邦西儀器科技有限公司；Olympus CKX41型倒置式生物顯微鏡，北京中儀光科科技發(fā)展有限公司；TP-6型透皮擴散儀，天津市精拓儀器科技有限公司；FD-1-50型真空干燥機，北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司；MS-H-Pro+型磁力攪拌器，美國賽洛捷克公司；3-30K型低溫離心機，美國Sigma-Aldrich公司；TGL-16型臺式高速冷凍離心機，湖南湘儀離心機儀器有限公司；JEM-2100F型透射電子顯微鏡（TEM）、JEM-1200EX型掃描電子顯微鏡（SEM），日本電子株式會社；Zetasizer Nano ZS90型馬爾文激光粒度儀，英國Malvern Panalytical儀器有限公司；IR Prestige-21型島津傅立葉變換紅外光譜儀，日本Shimadzu島津公司。

1.2 材料

TSA對照品，中國食品藥品檢定研究院，批號111562-2020012，質量分數≥99%；TSA原料藥（批號Y14M10C82864，質量分數≥95%）、SAB對照品（批號H16O10Y100218，質量分數≥98%），上海源葉生物科技有限公司；大豆卵磷脂，德國Lipoid公司，批號579010-1150055-13；膽固醇，上海艾偉特醫(yī)藥科技有限公司，批號B01221；寡聚透明質酸，華熙生物科技股份有限公司，相對分子質量7294，批號20070121；-琥珀酰殼聚糖（-succinyl chitosan，NSC），江蘇金殼生物醫(yī)藥科技有限公司，取代度81.3%，黏度62 mPa·s，批號201201；其余試劑均為分析純。

1.3 動物

SPF級健康SD大鼠，雌雄各半，體質量200～250 g，合格證號為SCXK（粵）2019-0041；普通級健康新西蘭兔，雌雄各半，體質量1.5～2.2 kg，合格證號為SCXK（粵）2019-0015。所有動物實驗遵循廣東藥科大學試驗動物倫理委員會有關實驗動物管理和使用的規(guī)定，均符合3R原則。

2 方法與結果

2.1 Lip-Gel@TSA/SAB的制備

2.1.1 TSA-SAB脂質體的制備 精密稱取處方量的磷脂、膽固醇、TSA（物質的量比100∶46∶3）共溶于10 mL二氯甲烷，37 ℃真空旋轉蒸發(fā)30 min，氮氣吹干，加7 mL去離子水后常壓孵育30 min，冰浴條件下用探頭超聲（100 W、超聲1 s，間隔1 s）5 min；將12 mg SAB溶于3 mL 1%甘氨酸-鹽酸緩沖溶液，加入上述溶液中，繼續(xù)孵育30 min，過0.8 μm微孔濾膜，400 nm脂質體擠出儀來回擠出20次整粒，得TSA-SAB脂質體（TSA-SAB Lips）。再加入9.0%蔗糖混合均勻，冷凍干燥24 h，得TSA-SAB脂質體凍干粉。

2.1.2 Lip-Gel@TSA/SAB的制備 制備氧化透明質酸（oxidized hyaluronic acid，OHA）[8]并用鹽酸羥胺滴定法測定OHA樣品中的氧化程度（OD）。精密稱取0.1 g OHA于25 mL 0.25 mol/mL的鹽酸羥胺-0.05%甲基橙溶液中，用0.1 mol/mL的NaOH溶液作為滴定液，當體系溶液由紅色變?yōu)辄S色時即到達滴定終點，記錄NaOH的消耗量。按公式（1）計算OD分別為（42.39±2.22）%、（49.18±1.62）%、（61.42±1.36）%，記為OHA40、OHA50、OHA60；將20 mg/mL的OHA溶液緩慢加入于150 mg/mL的NSC溶液中，兩者質量比為1∶1，攪拌均勻，即得空白水凝膠（OHA/NSC）。將TSA-SAB脂質體凍干粉（質量分數為30%）復溶于20 mg/mL OHA溶液中，加至150 mg/mL NSC，攪拌均勻，即得Lip-Gel@TSA/ SAB，如圖1所示。

圖1 Lip-Gel@TSA/SAB的制備

OD＝NaOHHA/2HA（1）

NaOH為NaOH濃度，為NaOH的消耗量，HA為透明質酸相對分子質量，HA為透明質酸質量

2.2 Lip-Gel@TSA/SAB的基礎性能表征

2.2.1 脂質體表征 采用低速離心法測定脂質體中TSA的包封率[9]，將TSA-SAB Lips 2000 r/min（離心半徑6.3 cm）離心5 min，取上清，甲醇稀釋10倍并超聲破乳，HPLC法測定TSA質量濃度為1；另取TSA-SAB Lips甲醇稀釋10倍并超聲破乳，HPLC法測定TSA質量濃度為2。根據公式（2），計算得TSA的包封率為（87.93±0.97）%。

TSA包封率＝1/2（2）

采用高速離心-超濾法測定脂質體中SAB的包封率[10]，將TSA-SAB Lips 15 000 r/min（離心半徑9.98 cm）離心30 min，取上清，截留相對分子質量100 000超濾管10 000 r/min（離心半徑9.98 cm）離心15 min，收集濾過液，HPLC法測定游離SAB質量濃度為3；取TSA-SAB Lips甲醇稀釋10倍并超聲破乳，HPLC法測定稀釋前SAB質量濃度為4。根據公式（3），計算得SAB的包封率為（91.20±0.47）%。

SAB包封率＝(4－3)/4（3）

用去離子水復溶TSA-SAB Lips凍干粉，觀察脂質體復溶液；將脂質體復溶液滴至銅網上，滴加2%磷鎢酸溶液進行負染，自然干燥后，利用透射電子顯微鏡（transmission electron microscope，TEM）觀察其形貌特征；利用馬爾文激光粒度儀測定其平均粒徑、粒度多分散系數（polydispersity index，PDI）和ζ電位。如圖2所示，TSA-SAB Lips呈淺肉橘色，稀釋后可觀察到明顯的淡藍色乳光，TEM下呈球狀或類球狀層狀囊泡結構；平均粒徑為（189.50±1.57）nm（＝3），PDI為0.246±0.030（＝3），平均ζ電位為（?18.73±1.41）mV（＝3）。

2.2.2 傅里葉變換紅外光譜（FTIR）分析 采用溴化鉀壓片法制備不同氧化程度的OHA、NSC和OHA/NSC樣品。掃描范圍為500～4000 cm?1，掃描速度為0.2 cm/s，分辨率為4 cm?1。如圖3所示，與HA相比，OHA在1739 cm?1處出現醛基伸縮振動吸收峰（-C＝O），且強度隨著氧化程度增加而增大，表明OHA制備成功。與OHA和NSC相比，OHA/ NSC在1645 cm?1處出現亞胺鍵伸縮振動吸收峰 （-C＝N-），且未見明顯的醛基吸收峰，表明OHA的醛基與NSC的氨基之間發(fā)生席夫堿反應，OHA/ NSC制備成功。

2.2.3 SEM分析 將OHA/NSC經液氮驟冷后真空冷凍干燥，切開，對斷面進行噴金處理，利用SEM觀察內部微觀形貌。如圖4所示，OHA/NSC內部為疏松海綿狀多孔材料，隨著OHA氧化程度增大，交聯度變高，孔徑變小，形成的網絡結構致密。

2.2.4 基礎性能特征 系列OHA/NSC pH值分別為6.28±0.04、6.59±0.12、6.89±0.23。將OHA/NSC 0.4 g倒置傾斜30 s不流動，記錄成膠時間，為（77±5）s；將0.2 g凍干OHA/NSC浸沒于蒸餾水中，定時取出稱定質量，直至樣品質量不再增加，按公式（4）計算平衡溶脹率；將2 g OHA/NSC放入溫度（30.0±0.5）℃、相對濕度（50±5）%的藥品穩(wěn)定性試驗箱中，定時取出稱定質量，至質量不再減少，按公式（5）計算保濕率；將不同顏色的OHA/NSC切開，并重新拼接[11]，自愈合能力良好；將OHA/ NSC置于不同材料（玻璃板、丁腈手套、人體皮膚）表面均能良好黏附；將OHA/NSC通過26 G針頭注射，通針性良好，結果如表1和圖5所示。

A-復溶前后整體外觀 B-TEM C-丁達爾效應 D-粒徑 E-ζ電位

a-HA b-OHA40 c-OHA50 d-OHA60 e-NSC f-OHA40/NSC g-OHA50/NSC h-OHA60/NSC

平衡溶脹率＝(2－1)/1（4）

保濕率＝1－(4－3)/3（5）

1為凍干水凝膠質量，2為溶脹過程中水凝膠質量，3為初始水凝膠質量，4為試驗過程中水凝膠質量

圖4 OHA/NSC的SEM表征(×200)

表1 OHA/NSC的性能特征 (, n = 3)

Table 1 Properties of OHA/NSC (, n = 3)

表1 OHA/NSC的性能特征 (, n = 3)

OHA/NSC成膠時間/s平衡溶脹率/%保濕率/% OHA40/NSC91.00±7.35836.70±15.6885.99±3.62 OHA50/NSC74.33±4.08781.57±12.3783.44±6.01 OHA60/NSC49.83±2.99710.85±16.6486.31±3.91

2.2.5 Lip-Gel@TSA/SAB的表征 稱取適量Lip-Gel@TSA/SAB，甲醇溶解，超聲20 min，過0.22 μm微孔濾膜，HPLC法測得TSA質量分數為（0.98±0.27）mg/g（＝3），SAB質量分數為（8.37±0.70）mg/g（＝3），平均總載藥量為（8.80±0.52）%（＝3）；將處方量擴大5倍后，測得TSA的包封率為（86.60±2.39）%（＝3），SAB的包封率為（90.61±1.01）%（＝3），平均總載藥量為（8.74±0.91）%（＝3）。

圖5 OHA/NSC水凝膠的性能表征

觀察Lip-Gel@TSA/SAB整體形狀并進行SEM分析，結果如圖6所示，Lip-Gel@TSA/SAB呈橘紅色，質地均勻，內部為三維多孔網狀結構，斷面可見散在脂質體球狀顆粒；將Lip-Gel@TSA/SAB置于不同材料（玻璃板、丁腈手套、人體皮膚）表面，具有良好黏附性。

2.3 體外透皮吸收實驗

取SD大鼠進行脫毛處理，處死后剝取腹部皮膚并去除皮下脂肪等其他組織，將皮膚固定于Franz擴散池的供給室和接收室之間，角質層朝向供給室，接收介質溶液為無水乙醇-PEG400-生理鹽水（5∶2∶3），37 ℃、350 r/min進行試驗；將TSA和SAB溶于20 mg/mL OHA溶液中，加至150 mg/mL NSC，攪拌均勻，得TSA-SAB水凝膠（TSA-SAB Gel）；分別在供給室中加入0.5 g TSA-SAB Gel、Lip-Gel@ TSA/SAB，于0、1、2、4、6、8、10、12、24、30、36、48 h分別取樣5 mL，并補加等量接收介質，氮氣吹干，甲醇復溶，HPLC法測定SAB、TSA的質量濃度，按公式（6）計算單位面積累積透過量（Q）。

Q＝(CV＋CV)/（6）

Q為時間點單位面積累積透過量；C為第個取樣點所取樣品中藥物的質量濃度；C為第（＝－1）個時間點所取樣品中藥物的質量濃度；為接收池體積體積（15 mL）；V為取樣體積；為擴散池有效接觸面積（1.766 cm2）；0為供給室初始濃度；為模擬方程直線部分的斜率

以為橫坐標，Q為縱坐標，繪制-曲線并進行模型擬合。如圖7所示，Lip-Gel@TSA/SAB中TSA在48 h內的Q為（17.55±1.01）μg/cm2（＝3），為0.200 μg/(cm2·h)，＝?1.044＋0.941－0.0192＋0.000 23（2＝0.966 5）；SAB在48 h內的Q為（918.99±50.83）μg/cm2（＝3），為0.214 μg/(cm2·h)，＝?49.444＋74.392－2.2532＋0.0233（2＝0.979 3），透皮釋放過程均符合Hixson-Crowell方程，為溶蝕與一級動力學釋藥的作用過程。

2.3.1 皮膚刺激性 取新西蘭兔背部皮膚進行脫毛處理，隨機分為對照組（生理鹽水）、陽性對照組（15 mg/mL甲醛水溶液）、free TSA-SAB組（TSA-SAB物理混合）、TSA-SAB Lips組和Lip-Gel@TSA/SAB組，每組3只，24 h后給藥，每天1次，連續(xù)7 d，記錄受試部位皮膚情況；7 d后處死并取受試部位皮膚進行HE染色，顯微鏡下觀察皮膚情況。甲醛水溶液組皮膚紅腫并伴有紅斑，其余給藥組均未出現異常癥狀。

A-整體性狀 B-SEM（×200），紅點為脂質體顆粒 C-黏附性

圖7 Lip-Gel@TSA/SAB透皮吸收曲線(, n = 3)

如圖8所示，甲醛水溶液組皮膚結構表皮受損，真皮組織處可見大量炎性細胞浸潤，膠原纖維排列紊亂，皮下組織輕中度水腫；對照組和free TSA/SAB組的兔子皮膚結構完整，角質層無破損，基底膜內側細胞排列整齊緊密；TSA-SAB Lips組和Lip-Gel@ TSA/SAB組均可見皮膚組織結構表皮細胞無序排列，真皮組織處無炎性細胞浸潤，皮下組織棘層細胞和表皮形成細胞小水腫，細胞間隙增大，提示脂質體凝膠可增加角質層細胞間隙，改變角質層結構或加強角質層水合作用從而影響角質層屏障，增強皮膚滲透性。其中，皮下組織棘層細胞和表皮形成細胞小水腫如圖TSA-SAB Lips組、Lip-Gel@TSA/ SAB組所示，皮膚結構表皮受損、炎性細胞浸潤如圖陽性對照組所示。

2.3.2 體外釋藥試驗 將Lip-Gel@TSA/SAB 0.5 mL置于透析袋（截留相對分子質量14 000）內，加入1 mL釋放介質（含1%十二烷基硫酸鈉的0.9% NaCl溶液），再放入50 mL釋放介質中，37 ℃、100 r/min水浴振搖，于0、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、30、36 h分別取樣1 mL，并補加等量釋放介質，HPLC法測定TSA的質量濃度。另取質量濃度相等的TSA溶液、TSA-SAB Lips和TSA-SAB Gel，同上述實驗步驟進行測定。

圖8 皮膚組織HE染色切片(×400)

SAB體外釋藥試驗的釋放介質為0.9% NaCl溶液，操作同上，測定相同質量濃度的SAB溶液、TSA-SAB Lips、TSA-SAB/Gel和Lip-Gel@TSA/SAB中SAB的質量濃度。按公式（7）計算體外釋藥累積釋放率，以取樣時間點（）為橫坐標，累積釋放率（Q）為縱坐標，繪制-曲線并進行模型擬合。如圖9所示，Lip-Gel@TSA/SAB中TSA 36 h累積釋放率48.63%，＝3.992＋6.072－0.2362＋0.0033，2＝0.988 1；Lip-Gel@TSA/SAB中SAB 24 h累積釋放率61.65%，＝?0.402＋8.943－0.4002＋0.0063，2＝0.989 1，體外釋藥模型均符合Hixon-Crowell和一級動力學模型，即其釋放行為遵循溶蝕、擴散和動力學過程。

圖9 Lip-Gel@TSA/SAB體外釋藥曲線(, n = 3)

Q＝(CV＋CV)/（7）

C為第個取樣點所取樣品中藥物的質量濃度；為釋放介質總體積；C為第個時間點所取樣品中藥物的濃度；V為取樣體積；為初始加入透析袋內樣品所含藥物總量；Q為時間點的體外釋藥累積釋放率

2.3.3 真皮滯留量 透皮試驗結束后，用生理鹽水洗凈離體皮膚，研磨成漿，甲醇溶解，超聲20 min，3500 r/min（離心半徑6.3 cm）離心10 min，取上清液，濾過，HPLC法測定TSA、SAB含量，計算真皮皮膚滯留量。TSA-SAB/Gel中TSA和SAB的真皮滯留量分別為（5.15±0.22）、（23.84±3.85）μg/cm2（＝3）；Lip-Gel@TSA/SAB中為（10.07±0.75）、（36.12±2.06）μg/cm2（＝3）。Lip-Gel@TSA/SAB中真皮滯留量均高于TSA-SAB/Gel，表明Lip-Gel@ TSA/SAB在皮膚真皮組織蓄積，形成藥物貯庫，緩慢持續(xù)釋放藥物。

3 討論

TSA具有顯著的抗纖維化、抗炎、促進血液循環(huán)、改善機體免疫力等作用，SAB能夠抑制成纖維細胞增殖、抗內皮細胞過度分化、減少炎癥反應[4]，在防治HS方面具有廣闊的應用前景。然而，TSA透皮性能較差，阻礙了其在皮膚制劑領域中的應用。脂質體為雙分子層結構，具有高度組織相容性和細胞親和力，利用其結構特性同時搭載TSA、SAB 2種不同極性的藥物。

脂質體溶液皮膚附著性能較差，采用水凝膠支架，可以延長給藥時間，在真皮層形成藥物貯庫，提高生物利用度[12]。實驗通過對不同氧化程度OHA的考察確定最佳OHA/NSC。OHA上醛基能與NSC上的氨基發(fā)生席夫堿反應形成水凝膠，當HA的氧化程度過低，醛基含量過少不利于形成均一的水凝膠；而當氧化程度過高，則醛基含量過大易導致細胞毒性過大[13]。綜合考慮均一性和細胞毒性，確定OHA50為試驗條件。

Dai等[14]研究發(fā)現，TSA、SAB、丹酚酸A聯合使用可抑制檳榔提取物誘導的口腔黏膜纖維化，可顯著抑制小鼠口腔黏膜成纖維細胞的異常增殖和膠原沉積，抑制I型膠原（collagen type 1，COL1A1）和III型膠原（collagen type 3，COL3A1）的轉錄，通過增加基質金屬蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP2）和MMP9的活性，降低組織金屬蛋白酶抑制因子-1（tissue specific inhibitor-1，TIMP-1）和TIMP-2的表達，改善膠原生成和代謝的平衡，抑制結締組織生長因子（connective tissue growth factor，CTGF）、TGF-β1、白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因 子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）等促炎、促纖維化因子的轉錄和釋放，其抗纖維化作用機制可能與抑制檳榔提取物誘導的蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）/ERK和TGF-β1/Smads通路有關[15]。TSA和SAB聯用可能通過調控相關MMPs和TIMPs的表達與活性，發(fā)揮抗HS作用[15-16]。

本實驗結果表明，Lip-Gel@TSA/SAB質量穩(wěn)定，具有良好的緩釋性能，且藥物真皮滯留性能良好，有助于降低給藥頻率，提高患者順應性[13]，后續(xù)試驗將深入研究Lip-Gel@TSA/SAB抗瘢痕增生效果及作用機制，為制劑開發(fā)及應用提供科學依據。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Preparation and properties of tanshinone ⅡA-salvianolic acid B co-loaded liposomes hydrogel

LUO Xi1, XU Xiao-qi2, LIU Dong-rong1, WANG Jiu1, HAN Bing3, SHI Jun1, 4

1.School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China 2.Shantou Science and Technology Association, Shantou 515031, China 3.Plastic Surgery Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100000, China 4.Guangdong Engineering & Technology Research Center of Topical Precise Drug Delivery System, Guangzhou 510006, China

To prepare tanshinone IIA-salvianolic acid B co-loaded liposomes hydrogel (Lip-Gel@TSA/SAB) and investigate permeation kinetics of skin.Tanshinone IIA-salvianolic acid B co-loaded liposomes were prepared by thin film dispersion-pH gradient method, and then loaded on oxidized hyaluronic acid/-succinyl chitosan hydrogel to obtain Lip-Gel@TSA/SAB.SEM was used to characterize Lip-Gel@TSA/SAB.HE staining was used to study the skin irritation of Lip-Gel@TSA/SAB.Dynamic dialysis was used to study the drug release of Lip-Gel@TSA/SAB.Modified Franz diffusion cell method was used to study the transdermal penetration and dermal retention of Lip-Gel@TSA/SAB, and the drug release model was calculated and fitted.Liposomes showed a spherical or sphere-like laminar vesiclestructure under TEM with an average particle size of (189.50 ± 1.57) nm, a PDI of 0.246 ± 0.030, and an average ζ potential of (?18.73 ± 1.41) mV.Lip-Gel@TSA/SAB was orange-red with homogeneous texture and a three-dimensional porous network structure inside.The transdermal testshowed that the cumulative penetration amounts of TSA and SAB per unit area of TSA-SAB Lips/Gel within 48 h were (17.55 ± 1.01) and (918.99 ± 50.83) μg/cm2, respectively, and the dermal retention of TSA was (10.07 ± 0.75) μg/cm2while SAB was (36.12 ± 2.06) μg/cm2, which accorded with Hixon-crowell equation and first-order kinetic model.Lip-Gel@TSA/SAB preparation process is reasonable, it has good transdermal absorption, drug dermal retention and high bioavailability.

liposome; hydrogel; skin permeation kinetics;tanshinone IIA; salvianolic acid B; thin film dispersion-pH gradient method; hyaluronic acid;-succinyl chitosan; dynamic dialysis; transdermal absorption

R283.6

A

0253 - 2670(2022)10 - 2977 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.10.006

2021-11-23

國家自然科學基金資助項目（82173982）；廣東省自然科學基金資助項目（2022A1515011382）

羅 璽（1995—），女，在讀碩士研究生，研究方向為中藥制劑研究與開發(fā)。Tel: 13322910501 E-mail: 528990196@qq.com

通信作者：時 軍（1980—），男，博士，副教授，主要從事中藥經皮給藥技術與增生性瘢痕防治研究。Tel: 13580334598 E-mail: shijun8008@163.com

[責任編輯 鄭禮勝]