吉楊丹，易艾晶，程 驊，王升勻，唐慧敏，李雙苗，王 恒

(黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，貴州都勻558013)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是常見的心血管疾病，2002～2016年急性心肌梗死(AMI)死亡率總體仍呈上升態(tài)勢，從2005年開始，AMI死亡率呈現(xiàn)快速上升趨勢，農(nóng)村地區(qū)AMI死亡率從2012年開始明顯升高，2013年和2016年大幅超過城市平均水平。2016年AMI死亡率城市為58.69/10萬，農(nóng)村為74.72/10萬[1]。狹葉崖爬藤(又名五爪金龍)為葡萄科植物崖爬藤的全株，具有活血通筋、散瘀消腫、跌打損傷功效[2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)狹葉崖爬藤有抗炎鎮(zhèn)痛和較強(qiáng)的抑菌作用，對大鼠心肌缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎具有很好的治療效果[3-6]。但用于治療AMI的實驗研究尚未見到報道。本研究以狹葉崖爬藤干預(yù)，復(fù)制大鼠急性心肌梗死模型，評價其對血流動力學(xué)的影響及心肌梗死相關(guān)指標(biāo)的作用，為狹葉崖爬藤的研發(fā)提供理論根據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物與試劑 狹葉崖爬藤采自貴州省三都縣打漁鄉(xiāng)，經(jīng)黔南民族醫(yī)專藥學(xué)系魏學(xué)軍教授鑒定為葡萄科植物崖爬藤(TetrastigmahyPoglaucumPlanch)的全株，按文獻(xiàn)方法制備提取液(按生藥量計算)[3]。CK-MB、LDH 試劑盒( 南京建成生物工程研究所，批號：20191230)。

1.1.2 動物 55只健康清潔級14～16周齡SD種大鼠，雄性，體重300～350 g，由貴州醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心(北校區(qū))提供[實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(黔)2018-0001，實驗動物使用許可證號：SYXK(黔)2018-0001]。實驗前置于室溫18～22℃，相對濕度65%，光照周期12 h，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d。

1.1.3 儀器 BL-422i型信息化集成化型號采集與處理系統(tǒng)，成都泰盟軟件有限公司；HX-300型動物呼吸機(jī)，浙江龍灣醫(yī)療器械廠；680型酶標(biāo)儀，上海伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司；TDL-4ZB型臺式低速離心機(jī)，湖南星科科學(xué)儀器廠；全自動生化分析儀，美國Thermo Fisher。

1.2 方法

1.2.1 造模及給藥 SD大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組(生理鹽水20 ml/kg)10只、模型組(生理鹽水20 ml/kg)15只、狹葉崖爬藤高劑量組(100 mg/kg)15只、 狹葉崖爬藤低劑量組(50 mg/kg)15只。灌胃容積為20 ml/kg。 每天灌胃1次，連續(xù)7 d。末次給藥后1 h，參照文獻(xiàn)方法復(fù)制AMI大鼠動物模型[7]。心電圖Ⅱ?qū)?lián)出現(xiàn)J點抬高，持續(xù)30 min以上即為模型成功[8]。假手術(shù)組大鼠冠脈穿線但未結(jié)扎。手術(shù)結(jié)束后，每組保證8只以上大鼠存活。

1.2.2 血流動力學(xué)分析 游離右頸總動脈約1.5～2.0 cm，插入Pe-50心導(dǎo)管(連接BL-422i型信息化集成化型號采集與處理系統(tǒng))。記錄波形及血流動力學(xué)指標(biāo)：開胸之前記錄1次，實驗結(jié)束再記錄1次左室內(nèi)壓最大下降速率(-dP/dtmax)、左室內(nèi)壓最大上升速率(+dP/ dtmax)[9]。對應(yīng)為手術(shù)及手術(shù)后血流動力學(xué)指標(biāo)。

1.2.3 J點位移 每只大鼠測至少6個連續(xù)的波形，取其平均值。

1.2.4 血清制備 各組大鼠在術(shù)后監(jiān)測血流動力學(xué)指標(biāo)以后，通過股動脈取血。3 000 r/ min離心10 min，取血清，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，全自動生化分析儀檢測血清中CK-MB 、LDH水平。

1.2.5 大鼠心肌組織病理形態(tài)學(xué)觀察 頸總動脈取血后解剖大鼠，取左心室缺血區(qū)心肌組織，以4%多聚甲醛溶液固定，HE染色，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量數(shù)據(jù)以表示，兩組間比較采用t檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 狹葉崖爬藤對大鼠急性心肌梗死J點位移及血流動力學(xué)的影響 手術(shù)后，模型組與假手術(shù)組比較，J點位移顯著增加(P<0.01)。與模型組比較，高劑量組和低劑量組顯著抑制心電圖J點位移的增加(P<0.01或P<0.05)。提示狹葉崖爬藤對AMI有保護(hù)作用，結(jié)果見表1。手術(shù)前各組+dP/dtmax和-dP/dtmax數(shù)值均未見顯著差異。手術(shù)后，模型組與假手術(shù)組比較，+dP/dtmax和-dP/dtmax數(shù)值均顯著降低(P<0.01)。與模型組比較，高劑量組能顯著升高+dP/dtmax和-dP/dtmax(P<0.05或P<0.01)。低劑量組對上述指標(biāo)有改善趨勢。結(jié)果見表2。

表1 狹葉崖爬藤對實驗性急性心肌梗死J點的影響

表2 狹葉崖爬藤對大鼠實驗性急性心肌梗死+dP/dtmax、-dt/dtmax的影響

2.2 狹葉崖爬藤對大鼠急性心肌梗死血清CK-MB、LDH的影響 與正常組相比，模型組大鼠血清 CK-MB、LDH明顯升高(P<0.01) ; 與模型組比較，高劑量組和低劑量組大鼠血清 CK-MB顯著降低(P<0.01或P<0.05) ，高劑量組大鼠血清LDH顯著降低(P<0.05) 。結(jié)果見表3。

表3 狹葉崖爬藤對實驗性急性心肌梗死血清CK-MB和LDH活力的影響

2.3 對大鼠冠脈結(jié)扎誘發(fā)急性心肌梗死心肌組織病理組織學(xué)的影響 心肌標(biāo)本鏡下觀察：假手術(shù)組心肌纖維排列整齊；模型組心肌纖維腫脹，排列紊亂，心肌間質(zhì)出現(xiàn)大量水腫，甚至可見血管擴(kuò)張；高劑量組心肌纖維排列較整齊，呈現(xiàn)輕度水腫；低劑量組心肌纖維排列較紊亂，心肌心肌間質(zhì)出現(xiàn)水腫及血管擴(kuò)張。結(jié)果見圖1。

假手術(shù)組 模型組

3 討論

心血管系統(tǒng)疾病是全球范圍內(nèi)危及人類生命和健康的頭號殺手，尤其心肌梗死是當(dāng)今世界威脅人類最嚴(yán)重的疾病之一。因此有效預(yù)防與治療心肌梗死成為當(dāng)前醫(yī)務(wù)工作者的當(dāng)務(wù)之急。本實驗通過檢測到J點位移證實了建立大鼠急性心肌梗死動物模型的成功[10]，狹葉崖爬藤能夠顯著減少J點位移。 血流動力學(xué)指標(biāo)是評價心功能作用的關(guān)鍵指標(biāo)，其中-dP/dtmax、+dP/dtmax二者可以反應(yīng)心肌舒張和收縮的速率[11]。本實驗結(jié)果顯示，冠脈結(jié)扎后，模型組-dP/dtmax和+dP/dtmax顯著降低。提示其心臟舒張和收縮功能出現(xiàn)紊亂，模型大鼠心功能障礙，建立模型成功。狹葉崖爬藤能顯著改善實驗性急性心肌梗死血流動力學(xué)指標(biāo)的紊亂，能改善心肌梗死心功能。心肌酶譜已經(jīng)成為臨床最常用的輔助診斷心肌梗死的一種方法[12]。本實驗結(jié)果表明狹葉崖爬藤對心肌梗死后CK-MB與LDH活力具有顯著的抑制作用。心肌缺血時間過長會引起心肌梗死，此時絕大部分心肌壞死，心肌間質(zhì)充血、水腫并伴大量炎癥細(xì)胞浸潤[13]。本實驗通過HE染色證實狹葉崖爬藤能夠顯著的抑制心肌損傷。

上述驗證了狹葉崖爬藤對實驗性AMI大鼠具有保護(hù)作用，可能與狹葉崖爬藤改善血流動力學(xué)相關(guān)，其作用機(jī)制有待于深入研究。