郭 帥

結(jié)腸癌是臨床上較為常見消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，目前隨著人們飲食機(jī)構(gòu)的改變，長(zhǎng)期、大量的高蛋白攝入，導(dǎo)致我國(guó)結(jié)腸癌的發(fā)病率越來(lái)越高[1]。臨床上的觀察研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤調(diào)控相關(guān)蛋白的改變，對(duì)結(jié)腸癌的病情進(jìn)展過(guò)程起著一定的作用[2]。Musashi 1蛋白作為一種腫瘤干細(xì)胞調(diào)控因子，對(duì)維持癌細(xì)胞核DNA的分裂速度，增加癌細(xì)胞的自我增殖效能起作用，最終促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的異常發(fā)生過(guò)程[3]；血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子-A(VEGF-A)是血管內(nèi)皮調(diào)控相關(guān)因子，其可以通過(guò)誘導(dǎo)新生腫瘤血管的形成，來(lái)幫助提高腫瘤病灶組織的血流灌注水平，促進(jìn)結(jié)腸癌的病情進(jìn)展[4]。有很多研究對(duì)VEGF在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)情況進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，VEGF蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率在結(jié)腸癌患者中會(huì)明顯上升[5]，但關(guān)于的Musashi 1分析缺不足。為了揭示Musashi 1、VEGF-A的表達(dá)與結(jié)腸癌患者的病情關(guān)系，本次研究收集了我院病理科在2018年1月～2020年1月期間的88例結(jié)腸癌組織，對(duì)Musashi 1、VEGF-A的表達(dá)情況進(jìn)行探討，并報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象

選取2018年1月～2020年1月我院病理科收集的88例結(jié)腸癌組織標(biāo)本及符合要求的44例癌旁組織標(biāo)本。

1.2 相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的關(guān)于結(jié)腸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均在我院接受手術(shù)，經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)病情；②結(jié)腸癌患者無(wú)放化療、免疫學(xué)治療史；③納入標(biāo)本患者的年齡、性別、病理學(xué)結(jié)果等資料完整；④癌旁組織為距離腫瘤邊緣5 cm以內(nèi)的正常結(jié)腸組織；⑤本研究符合《赫爾辛基宣言》中的醫(yī)學(xué)倫理要求標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他部位腫瘤；②合并腸道結(jié)核等其他類型的結(jié)腸器質(zhì)性病變；③資料缺失，無(wú)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

88例結(jié)腸癌患者的基線資料情況，男性49例、女性39例；年齡38～79歲，平均(57.0±11.4)歲；依據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期20例、Ⅱ期33例、Ⅲ期28例、Ⅳ期7例；腫瘤最大徑≥5 cm 51例、<5 cm 37例；腫瘤組織學(xué)分化：低分化30例、中分化33例、高分化25例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例；腫瘤浸潤(rùn)深度達(dá)到T1～T2 43例、T3～T4 45例。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化染色 采用免疫組化進(jìn)行Musashi 1、VEGF-A蛋白的檢測(cè)：采用石蠟切片，3%H2O2孵育20 min，然后采用蛋白封閉后，加入一抗(由羅氏公司生產(chǎn)，濃度為：1∶500)5 ml，在37℃下孵育2 h后，加入生物素?zé)晒鈽?biāo)記的二抗(由南京碧云天生物公司生產(chǎn)，濃度為：1∶2000)3 ml，在37℃下孵育20～30 min后，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，加入HRP辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素(由武漢生之源生物公司生產(chǎn)，試劑盒批號(hào)為：20178496)，HRP-DAB底物顯色試劑盒 (PA110)顯色，自來(lái)水沖洗，復(fù)染，封片。

1.3.2 免疫組化染色結(jié)果判斷 兩種蛋白的陽(yáng)性染色分為呈黃色、棕黃色及褐色表達(dá)，①依據(jù)染色的程度分為：未染色0分、淡黃色1分、棕黃色2分、褐色、黑色3分；②根據(jù)染色的細(xì)胞占比結(jié)果：≤10%1分、11%～50%2分、51%～75%3分、75%4分。結(jié)果判定：兩項(xiàng)得分之積<3分為陰性、≥3分為陽(yáng)性。

1.3.3 MVD的計(jì)數(shù)方法 對(duì)MVD表達(dá)情況的判定主要依據(jù)CD34標(biāo)記染色情況，而CD34陽(yáng)性著色分為單個(gè)或成簇狀黃色及棕黃色表達(dá)，依據(jù)陽(yáng)性著色數(shù)量進(jìn)行等級(jí)劃分，每張切片在40倍光鏡下選擇血管最多的區(qū)域，在400倍光鏡下選取3個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)：MVD陽(yáng)性計(jì)數(shù)<10個(gè)為(-)、MVD陽(yáng)性計(jì)數(shù)11～25個(gè)為(+)、MVD陽(yáng)性計(jì)數(shù)26～50個(gè)(++)、MVD陽(yáng)性計(jì)數(shù)>50個(gè)(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸癌組織與癌旁組織中Musashi 1、VEGF-A陽(yáng)性率比較

結(jié)腸癌組織中Musashi 1蛋白、VEGF-A陽(yáng)性率(70.45%、64.77%)，均高于癌旁組織的40.91%、36.36%(P<0.05),見表1。

表1 Musashi 1蛋白、VEGF-A陽(yáng)性率比較(例，%)

2.2 Musashi 1蛋白、VEGF-A陽(yáng)性率表達(dá)在不同病理學(xué)特征結(jié)腸癌中的差異比較

Musashi 1蛋白在不同TNM分期、不同浸潤(rùn)深度、不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的組織中表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；VEGF-A在不同TNM分期的結(jié)腸癌組織中表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) ；見表2、表3。

表2 Musashi 1蛋白在不同病理學(xué)特征結(jié)腸癌中的表達(dá)比較(例，%)

表3 VEGF-A在不同病理學(xué)特征結(jié)腸癌中的表達(dá)比較(例，%)

2.3 結(jié)腸癌組織中Musashi 1蛋白、VEGF-A表達(dá)與MVD形成的關(guān)系

Musashi 1蛋白陽(yáng)性、VEGF-A陽(yáng)性表達(dá)的結(jié)腸癌組織中MVD計(jì)數(shù)均高于其陰性表達(dá)組織(P<0.05)，見表4。

表4 結(jié)腸癌組織中Musashi 1蛋白、VEGF-A表達(dá)與MVD形成的關(guān)系

3 討論

腸道腺體上皮細(xì)胞的異常增殖過(guò)程中，由于癌基因的突變及腫瘤基因錯(cuò)配修復(fù)能力的下降，癌細(xì)胞的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)可明顯上升[7]。臨床上的觀察發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌患者的5年生存率或者中位生存時(shí)間等預(yù)后指標(biāo)均明顯惡化，結(jié)腸癌患者遠(yuǎn)期病情進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)可顯著上升[8,9]。對(duì)腫瘤新生血管的調(diào)控，可在腫瘤的早期發(fā)生或者病情進(jìn)展過(guò)程起到一定的作用。較高的腫瘤血管密度或者腫瘤血管新生速度，能夠提高腫瘤細(xì)胞的血流及血氧灌注水平，增加了癌細(xì)胞的增殖速度。通過(guò)對(duì)于腫瘤微血管密度生成調(diào)控的相關(guān)機(jī)制研究，能夠?yàn)榕R床上結(jié)腸癌的免疫靶向治療或者臨床預(yù)后評(píng)估提供參考。本次研究通過(guò)對(duì)于結(jié)腸癌患者病灶組織中Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的分析，能夠在部分揭示結(jié)腸癌臨床病情進(jìn)展的同時(shí)，為臨床上針對(duì)血管受體的免疫靶向治療提供參考。

Musashi 1蛋白是腫瘤干細(xì)胞調(diào)控因子，其能夠通過(guò)誘導(dǎo)結(jié)腸腺體上皮細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換，最終促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)于腸道肌層的浸潤(rùn)。基礎(chǔ)方面的機(jī)制研究還認(rèn)為，Musashi 1蛋白還能夠提高結(jié)腸纖體上皮細(xì)胞的粘附能力，加劇癌細(xì)胞的異常增殖[10,11]；VEGF-A是一種血管內(nèi)皮調(diào)控生成因子，不僅具有提高腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)能力，還可以增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力，最終增加腫瘤病灶組織的血流灌注[12-14]。多數(shù)研究者探討了VEGF不同受體亞型在結(jié)腸癌患者病情進(jìn)展過(guò)程中的作用，認(rèn)為VEGF蛋白的高表達(dá)能夠促進(jìn)結(jié)腸癌患者臨床病理特征的進(jìn)展[15-17]，但對(duì)于Musashi 1蛋白的分析研究不足。

本次研究發(fā)現(xiàn)在結(jié)腸癌患者病灶組織中，Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可明顯上升，高于結(jié)腸癌旁組織，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著，推測(cè)Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的高表達(dá)能夠在結(jié)腸癌的病情進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮作用。之所以存在較高的Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白表達(dá)，主要由于結(jié)腸腺體細(xì)胞的異常浸潤(rùn)，能夠顯著激活腫瘤細(xì)胞的病理生理途徑，提高了癌細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的激活程度，最終促進(jìn)了Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的合成釋放。有其他研究者也認(rèn)為，在結(jié)腸癌患者病灶組織中，Musashi 1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可超過(guò)45%以上，在具有肝臟轉(zhuǎn)移的患者中，Musashi 1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可隨著轉(zhuǎn)移病灶的擴(kuò)散而顯著上升[18-20]。在不同的臨床病理特征的患者中，能夠發(fā)現(xiàn)在臨床分期較晚、浸潤(rùn)深度較深或者發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，Musashi 1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率較高，這表明Musashi 1蛋白的高表達(dá)能夠顯著促進(jìn)結(jié)腸癌患者臨床病理特征的進(jìn)展。這主要由于Musashi 1蛋白能夠維持癌細(xì)胞干性特征，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞偽足的形成，最終促進(jìn)了癌細(xì)胞對(duì)于淋巴結(jié)及周圍正常組織的浸潤(rùn)；在不同的臨床分期患者中，VEGF-A蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率也明顯上升，表明VEGF-A蛋白同樣能夠顯著影響到腫瘤細(xì)胞的臨床病情的進(jìn)展。這主要由于VEGF-A能夠影響到癌細(xì)胞血管分支吻合程度，提高了血管分支的形成速度，加劇了腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和擴(kuò)散。MVD是評(píng)估腫瘤血管形成風(fēng)險(xiǎn)的指標(biāo)，過(guò)度的MVD上升能夠加劇腫瘤患者復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，本次研究中在 Musashi 1、VEGF-A蛋白陽(yáng)性表達(dá)的患者中，MVD計(jì)數(shù)可明顯上升，提示了Musashi 1、VEGF-A能夠顯著影響到腫瘤血管的形成過(guò)程。

綜上所述，結(jié)腸癌組織中Musashi 1蛋白陽(yáng)性、VEGF-A表達(dá)增強(qiáng)明顯增加，同時(shí)Musashi 1、VEGF-A的表達(dá)與腫瘤發(fā)展、微血管形成有一定的關(guān)系。