林馨穎，王鵬杰，楊如興，鄭玉成，陳瀟敏，張磊，邵淑賢，葉乃興

高茶氨酸茶樹新品系‘福黃1號(hào)’黃化變異機(jī)理

林馨穎1，王鵬杰1，楊如興2，鄭玉成1，陳瀟敏1，張磊2，邵淑賢1，葉乃興1

1福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院/茶學(xué)福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福州 350002；2福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，福州 350013

【】分析茶樹黃化變異相關(guān)的代謝和轉(zhuǎn)錄機(jī)制，探究高茶氨酸茶樹新品系‘福黃1號(hào)’的黃化變異和高茶氨酸形成機(jī)理。以茶樹‘福安大白茶’及其黃化突變種質(zhì)‘福黃1號(hào)’為試驗(yàn)材料，利用超微電鏡、廣泛靶向代謝組學(xué)、靶向代謝組學(xué)及轉(zhuǎn)錄組學(xué)聯(lián)合分析，確定茶樹黃化變異相關(guān)的色素、代謝物及轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。超微結(jié)構(gòu)顯示，‘福黃1號(hào)’的葉綠體類囊體呈現(xiàn)絲狀，基粒片層排列散亂不規(guī)則，片層間疏松，存在許多異常的囊泡。色素含量測(cè)定表明，葉綠素a和葉綠素b含量顯著下降，葉綠素a/b比率下降，相關(guān)基因表達(dá)顯著下調(diào)，黃化葉片中光捕獲葉綠素a/b蛋白（LHC）表達(dá)顯著下調(diào)。類胡蘿卜素總含量雖然差異不大，但各組分含量顯著變化，玉米黃質(zhì)為唯一顯著增加的組分，其調(diào)控基因表達(dá)顯著上調(diào)，其余組分含量均下降。與‘福安大白茶’相比，‘福黃1號(hào)’中共鑒定到680個(gè)差異表達(dá)基因（DEGs）和57個(gè)顯著變化的代謝物（SCMs）。KEGG富集分析表明，SCMs和DEGs顯著富集到氨基酸生物合成、谷胱甘肽代謝以及TCA循環(huán)等途徑。此外，與碳和氮代謝相關(guān)的通路也被激活。通過靶向測(cè)定，共鑒定到19種游離氨基酸，新品系‘福黃1號(hào)’游離氨基酸含量顯著高于‘福安大白茶’，達(dá)到97.13 mg?g-1，其中茶氨酸為66.90 mg?g-1，占氨基酸含量的68.89%，而精氨酸含量達(dá)到8.46 mg?g-1，是‘福安大白茶’的56.4倍。調(diào)控氨基酸合成的和的表達(dá)量上調(diào)1.17倍和3.17倍。‘福黃1號(hào)’的芽葉色澤主要受葉綠素、類胡蘿卜素和類黃酮等色素代謝的影響，和4種的共同作用也可能影響葉綠體的生物合成來調(diào)節(jié)葉片色澤?！｜S1號(hào)’茶氨酸含量顯著高于‘福安大白茶’的原因主要是泛素化相關(guān)的蛋白質(zhì)水解酶表達(dá)上調(diào)蛋白降解能力加強(qiáng)，葉綠素和其他含氮分子生物合成的減少，以及黃化葉中碳骨架的缺乏，氨基和氮資源被更有效地儲(chǔ)存，使得與氨基酸合成相關(guān)的氮代謝激活，茶氨酸合成前體物質(zhì)之一的谷氨酸積累，這可能促使茶氨酸成為黃化葉中顯著積累的含氮化合物。

茶樹；福黃1號(hào)；黃化；代謝；轉(zhuǎn)錄；組學(xué)技術(shù)

0 引言

【研究意義】茶樹（）是一種在世界范圍內(nèi)廣泛種植的葉用經(jīng)濟(jì)作物[1]。茶葉中富含次級(jí)代謝產(chǎn)物，例如兒茶素、茶氨酸、咖啡堿，不同茶樹品種的生化成分差異很大，對(duì)茶葉品質(zhì)和價(jià)值具有較大影響[2]。近年來，具有特定葉色的茶樹突變體，其獨(dú)特的外形和品質(zhì)受到越來越多的關(guān)注[3]。與綠葉品種相比，茶樹黃化突變種一般具有較高的游離氨基酸（包括茶氨酸）[4]，對(duì)茶樹新品種選育具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】植物葉片黃化現(xiàn)象的形成受到色素沉著、細(xì)胞結(jié)構(gòu)變異、代謝等多種生理生化過程的改變和環(huán)境因素影響[5]。黃化植物葉片的早期發(fā)育一般經(jīng)歷3個(gè)階段：黃化前期、黃化期和返青期，大多數(shù)茶樹葉片在黃化期，其葉綠體和類囊體膜異常發(fā)育，葉片顏色呈現(xiàn)白色到黃色不等，而這取決于葉綠素和類胡蘿卜素的缺乏程度[6-7]。光照敏感型黃化茶樹品種‘黃金芽’的葉片著色主要由類黃酮和類胡蘿卜素生物合成綜合作用決定[8]。而在‘白葉1號(hào)’中，參與固碳、苯丙素和類黃酮生物合成的代謝物的顯著變化是導(dǎo)致其葉色變異主要原因，同時(shí)，碳水化合物和能量代謝、葉綠體生物發(fā)生也在‘白葉1號(hào)’中有差異變化[9]。此外，黃化現(xiàn)象還伴隨著有助于茶葉風(fēng)味的代謝物積累，例如，高氨基酸會(huì)帶來“鮮味”；低水平含量的咖啡堿和兒茶素減少了澀味和苦味[5]。有研究認(rèn)為，茶樹黃化品種中的游離氨基酸含量增加，提高了成品茶的質(zhì)量，相對(duì)于綠葉品種而言，茶樹黃化品種具有更高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[10]。茶葉中含量較高的游離氨基酸是茶氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸和精氨酸，而作為茶葉中一種獨(dú)特的氨基酸，茶氨酸是一種天然成分，是茶葉鮮爽味的主要來源[11]。茶氨酸自被發(fā)現(xiàn)以來，其在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用，對(duì)人體具有鎮(zhèn)靜、安神等多種生理保健功能[12]。茶樹黃化品種因其高茶氨酸備受關(guān)注，因此，研究茶樹黃化品種茶氨酸的累積機(jī)理具有極其重要的意義。目前選育高茶氨酸茶樹品種，是茶樹育種研究的一個(gè)重要方向，也是茶樹功能性育種的重要內(nèi)容之一?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】福建省是中國(guó)茶樹栽培的主要省份之一，而在福建省內(nèi)發(fā)現(xiàn)的黃化變異種，如‘白雞冠’‘黃葉肉桂’‘黃金水仙’均不具有高茶氨酸?！｜S1號(hào)’是茶樹優(yōu)良品種‘福安大白茶’的黃化突變種，是筆者課題組前期挖掘出的高茶氨酸茶樹新品系，其黃化代謝及高茶氨酸累積機(jī)制不明，利用多組學(xué)技術(shù)分析黃化葉片相關(guān)通路尚待研究?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究以‘福安大白茶’和‘福黃1號(hào)’為試驗(yàn)材料，利用透射電鏡、廣泛靶向代謝組學(xué)、靶向代謝組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)整合分析，闡明茶樹黃化變異形成的機(jī)制，為高茶氨酸茶樹資源選育提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料處理

2021年3月在福建省寧德市蕉城區(qū)八都鎮(zhèn)茶樹品種示范茶園采集的‘福安大白茶’及其黃化種‘福黃1號(hào)’的春梢一芽二葉，立即用液氮進(jìn)行冷凍固定并在-80℃下保存，用于后續(xù)色素、代謝及轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)，均設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。再取表面完整無缺口或蟲口的第二片葉片，用2.5%戊二醛固定，用于后續(xù)超微結(jié)構(gòu)的鑒定。

1.2 葉綠體超微結(jié)構(gòu)觀察

透射電鏡樣品的制備參考Hao等[13]的方法，對(duì)‘福安大白茶’和‘福黃1號(hào)’的成熟二葉進(jìn)行處理，漂洗（磷酸緩沖液）并固定2 h，重復(fù)3次，再經(jīng)滲透劑滲透8—12 h后加入包埋劑（環(huán)氧樹脂），聚合48 h。超薄切片機(jī)（EM UC7，Leica（德國(guó)））切出厚度為80—100 nm的切片，并用鈾鉛雙染色，室溫干燥過夜，使用TEM Hitachi HT7700（日本）電鏡進(jìn)行觀察。

1.3 葉綠素和類胡蘿卜素含量測(cè)定

葉綠素和類胡蘿卜素總含量的測(cè)定方法參考Wang等[3]，稱取0.1 g樣品于15 mL離心管中，加入2 mL乙醇，渦旋混勻。12 000 r/min離心10 min。重復(fù)上述步驟直至殘?jiān)薀o色，合并上清。使用UV-3200分光光度計(jì)（Mapada，中國(guó)）在665 nm（Chl a）、649 nm（Chl b）和470 nm（總類胡蘿卜素）分析，以乙醇為空白對(duì)照。

類胡蘿卜素各組分含量的測(cè)定樣品前處理參考林馨穎等[14]的方法。數(shù)據(jù)采集儀器系統(tǒng)主要包括超高效液相色譜（UPLC）（ExionLC? AD，https://sciex.com. cn/）和串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）（QTRAP? 6500+，https://sciex.com.cn/）。液相條件主要包括：色譜柱：YMC C30（100 mm×2.0 mm，3 μm）；流動(dòng)相：A相，甲醇/乙腈（1﹕3，v/v）加入0.01% BHT和0.1%甲酸；B相，甲基叔丁基醚加入0.01% BHT；梯度洗脫程序：0 min A/B為100﹕0（V/V），3 min為100﹕0（V/V），5 min為30:70（V/V），9 min為5﹕95（V/V），10 min為100﹕0（V/V），11 min為100﹕0（V/V）；流速0.8 mL?min-1；柱溫28℃；進(jìn)樣量2 μL。質(zhì)譜條件主要包括：大氣壓化學(xué)離子源（atmospheric pressure chemical ionization source，APCI）溫度350℃，氣簾氣（curtain gas，CUR）25 psi。在Q-Trap 6500+中，每個(gè)離子對(duì)是根據(jù)優(yōu)化的去簇電壓（declustering potential，DP）和碰撞能（collision energy，CE）進(jìn)行掃描檢測(cè)。

1.4 游離氨基酸含量的測(cè)定

游離氨基酸含量的測(cè)定是利用三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀分析數(shù)據(jù)，液質(zhì)聯(lián)用儀：Sciex 4500 QTrap質(zhì)譜儀（美國(guó)Sciex公司）配Nexera X2LC-30A高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）。樣品提取及AQC衍生、色譜條件及質(zhì)譜條件的具體方法參考陳思肜[15]等。

1.5 LC-ESI-MS/MS代謝物分析

代謝物的提取參考ZHENG等[16]的方法。利用超高效液相色譜（SHIMADZU Nexera X2，https://www. shimadzu.com.cn/）和串聯(lián)質(zhì)譜（Applied Biosystems 4500 QTRAP，http://www.appliedbiosystems.com.cn/）分析代謝物。液相條件主要包括：色譜柱：Agilent?SB-C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）。流動(dòng)相：A相為超純水（加入0.1%的甲酸），B相為乙腈（加入0.1%的甲酸）。洗脫梯度：0 min，B相比例為5%；9.00 min內(nèi)，B相比例線性增加到95%，并維持在95% 1 min；10.00—11.10 min，B相比例降為5%，并以5%平衡至14 min。流速0.35 mL?min-1；柱溫40℃；進(jìn)樣量4 μL。質(zhì)譜條件主要包括：電噴霧離子源（electrospray ionization，ESI）溫度550℃，離子噴霧電壓（IS）5 500 V（正離子模式）/-4 500 V（負(fù)離子模式）；離子源氣體I（GSI）、氣體II（GSII）和簾氣（CUR）分別設(shè)置為50、60和25.0 psi，碰撞誘導(dǎo)電離參數(shù)設(shè)置為高，具體條件參考Lin等[17]。利用多元統(tǒng)計(jì)分析VIP值、值及差異倍數(shù)來篩選差異代謝物（SCMs），通過R包（v3.3.2）中pheatmap程序?qū)Y選出的‘福安大白茶’和‘福黃1號(hào)’差異代謝成分進(jìn)行聚類分析并繪制熱圖。對(duì)各組樣本差異代謝物進(jìn)行層次聚類，同時(shí)將得到的相應(yīng)差異代謝物進(jìn)行KEGG富集分析。

1.6 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析

總RNA提取和質(zhì)量控制參考文獻(xiàn)[18]。通過邁特維爾生物科技有限公司在Illumina HiSeq測(cè)序平臺(tái)上對(duì)文庫(kù)片段進(jìn)行測(cè)序。經(jīng)過原始數(shù)據(jù)過濾、測(cè)序錯(cuò)誤率檢查、GC含量分布檢查，獲得后續(xù)分析使用過濾序列（clean reads）。利用HISAT2將clean reads與參考基因組（茶樹‘黃棪’基因組）[1]進(jìn)行序列比對(duì)，獲取在參考基因組或基因上的位置信息，以及測(cè)序樣品特有的序列特征信息?；虻膔eads計(jì)數(shù)使用featureCounts[19]，并計(jì)算FPKM（Fragments Per Kilobase of transcript per Million fragments mapped）。采用DESeq2來確定差異表達(dá)基因（DEGs），差異分析之后，還需要用Benjamini-Hochberg方法對(duì)假設(shè)檢驗(yàn)概率（-value）進(jìn)行多重假設(shè)檢驗(yàn)校正，得到錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（false discovery rate，F(xiàn)DR）。差異基因的篩選條件為|log2fold change|≥1，且FDR＜0.05。使用clusterProfiler軟件[20]進(jìn)一步對(duì)DEGs進(jìn)行KEGG富集分析。

1.7 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)驗(yàn)證

為驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，挑取11個(gè)差異基因進(jìn)行表達(dá)水平驗(yàn)證，通過Primer3Plus（http://www. bioinformatics.nl/cgi-bin/）設(shè)計(jì)熒光定量引物（附表1）。參照林馨穎等[21]的方法，根據(jù)已提取的總RNA，使用全式金Easyscript One-step gDNA Removal and cDNA synthesis superMix試劑盒合成cDNA作為實(shí)時(shí)熒光定量PCR模板。以（登錄號(hào)：GE651107）作為內(nèi)參基因[22]，使用Bio-Rad的CFX96 Touch熒光定量PCR儀進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)，反應(yīng)體系參照Transstart? Tip Green qPCR superMix試劑盒的方法，反應(yīng)程序：94℃，30 s；94℃，5 s；60℃，30 s，40個(gè)循環(huán)。所有樣品均設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，使用2-△△CT方法計(jì)算表達(dá)水平。

2 結(jié)果

2.1 芽葉表型特征和超微結(jié)構(gòu)分析

正常性狀（圖1-a1）‘福安大白茶’芽到成熟葉均為正常綠色，黃化種‘福黃1號(hào)’（圖1-b1）頂芽到芽下三或四葉呈現(xiàn)黃色。超微結(jié)構(gòu)觀察表明（圖1-a2、a3、a4），‘福安大白茶’葉綠體緊貼細(xì)胞壁，多呈梭形或長(zhǎng)橢圓形，基粒片層結(jié)構(gòu)排列緊密有序且清晰，有少量的嗜鋨顆粒和淀粉粒，葉綠體被膜完整；‘福黃1號(hào)’葉綠體結(jié)構(gòu)顯示（圖1-b2、b3、b4），細(xì)胞和葉綠體的形態(tài)和結(jié)構(gòu)具有顯著地變化，葉綠體的被膜完整，但是葉綠體內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)育不良，只有少許的絲狀類囊體存在，基粒片層排列散亂不規(guī)則，片層間疏松，層次不清晰，甚至斷裂不成形，嗜鋨顆粒體積較小。

a1—a4：‘福安大白茶’表型和超微結(jié)構(gòu)；b1—b4：‘福黃1號(hào)’表型和超微結(jié)構(gòu)；SG：淀粉粒；Ch：葉綠體；CW：細(xì)胞壁；Th：類囊體；Gr：基粒；Va：液泡；OG：嗜鋨顆粒

2.2 廣泛靶向代謝組差異分析

2.2.1 廣泛靶向代謝物分析及差異代謝物篩選 通過廣泛靶向代謝組學(xué)在‘福安大白茶’（GF）和‘福黃1號(hào)’（YF）中共鑒定到1 158種代謝物，PCA和OPLS-DA分析結(jié)果表明，‘福安大白茶’與‘福黃1號(hào)’的代謝物分布明顯分離（附圖1-a和1-b）。根據(jù)代謝物VIP≥1、log2fold change≥2和log2fold change≤0.5篩選差異代謝物（SCMs），火山圖（圖2-A）顯示，含量顯著上升的代謝物26種，顯著下降的代謝物31種。與‘福安大白茶’相比，在‘福黃1號(hào)’中共鑒定出57種（4.92%）差異代謝物（附表2）。這些差異代謝物可分為11類，包括氨基酸及其衍生物、酚酸類、核苷酸及其衍生物、黃酮、木脂素和香豆素、鞣質(zhì)、萜類、有機(jī)酸、脂質(zhì)、生物堿和其他類（圖2-B）；而在黃化種中，脂質(zhì)、氨基酸及其衍生物、黃酮等上調(diào)，鞣質(zhì)、木脂素和香豆素、萜類無顯著變化。

A：正交偏最小二乘法判別分析；B：差異代謝物聚類熱圖 A: OPLS-DA; B: SCMs heatmap

2.2.2 差異代謝物KEGG功能富集分析 差異代謝物富集到氨基酸生物合成途徑，碳代謝，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝，半胱氨酸和蛋氨酸代謝，光合代謝等途徑（圖3）。表明在黃化茶中可能發(fā)生大規(guī)模代謝重編程事件，以適應(yīng)環(huán)境。

2.3 轉(zhuǎn)錄組分析

2.3.1 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量分析及差異表達(dá)基因篩選 為了鑒定‘福安大白茶’（GF）和‘福黃1號(hào)’（YF）中的差異表達(dá)基因（DEGs），進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)比較。如表1所示，總共獲得了290 925 592個(gè)原始序列（raw reads），在去除測(cè)序接頭污染和低質(zhì)量的序列后，共獲得高質(zhì)量的283 954 518個(gè)過濾序列（clean reads），共產(chǎn)生42.6 G的過濾堿基（clean bases），并且過濾序列Q20在95.62%以上，Q30在88.54%以上，整體測(cè)序錯(cuò)誤率在0.03%，表明測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量好，可用于后續(xù)分析。差異基因的篩選條件為|log2fold change|≥1，且FDR＜0.05。共篩選出680個(gè)DEGs，包括460上調(diào)基因和220下調(diào)基因。

2.3.2 差異表達(dá)基因KEGG功能富集分析 將‘福安大白茶’（GF）和‘福黃1號(hào)’（YF）的DEGs進(jìn)行KEGG功能富集，共富集到102個(gè)代謝途徑。前20條途徑的富集分析表明，大多數(shù)DEGs都作用于多個(gè)代謝過程，與氨基酸代謝、核苷酸代謝、脂質(zhì)代謝、碳水化合物代謝和次級(jí)代謝有關(guān)（圖4）。這些DEGs注釋的途徑與SCMs的分類密切相關(guān)，表明差異基因調(diào)控兩者之間代謝產(chǎn)物的變化。且DEGs富集到氨基酸生物合成、色氨酸代謝、谷胱甘肽代謝、類黃酮生物合成、光合作用-天線蛋白、TCA循環(huán)以及角質(zhì)、次分泌物和蠟生物合成等途徑。

圖3 ‘福安大白茶’和‘福黃1號(hào)’差異代謝物KEGG富集分析

圖4 差異表達(dá)基因KEGG富集分析

2.3.3 差異表達(dá)基因RT-qPCR分析 為了進(jìn)一步驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，從轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中選取了各通路中較為重要的11個(gè)差異表達(dá)基因（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）和（）進(jìn)行RT-qPCR驗(yàn)證。結(jié)果表明，挑選的11個(gè)差異基因的熒光定量表達(dá)水平的變化與轉(zhuǎn)錄組基因豐度變化趨勢(shì)基本一致，進(jìn)一步驗(yàn)證了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)的可靠性（圖5）。

表1 ‘福安大白茶’和‘福黃1號(hào)’轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的質(zhì)量

圖5 11個(gè)差異表達(dá)基因的表達(dá)水平驗(yàn)證

2.4 色素代謝相關(guān)的DEGs和SCMs聯(lián)合分析

植物葉片著色受許多色素的影響，包括葉綠素、類胡蘿卜素和類黃酮。對(duì)‘福安大白茶’和‘福黃1號(hào)’葉綠素a、b和總?cè)~綠素含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在黃化葉片中葉綠素a、b和總?cè)~綠素含量較綠葉顯著下降（圖6），葉綠素含量降低與黃化表型相關(guān)。在葉綠素合成途徑中葉綠素a鎂脫氫酶（）表達(dá)水平顯著下調(diào)，下調(diào)2.46倍（圖7-A）。對(duì)葉綠素a的合成和降解有重要作用，其表達(dá)降低可能會(huì)影響葉綠素代謝。對(duì)葉綠素合成途徑中的其他相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄數(shù)據(jù)進(jìn)行鑒定分析，在黃化葉片中未見顯著區(qū)別于‘福安大白茶’（附表3）。

類胡蘿卜素是植物中另一種重要的捕光色素，也可以顯著防止光損傷?！｜S1號(hào)’類胡蘿卜素總含量低于‘福安大白茶’，并未達(dá)到顯著水平；而‘福黃1號(hào)’中的-胡蘿卜素、葉黃素、-胡蘿卜素、花藥黃質(zhì)、紫黃質(zhì)和新黃質(zhì)的含量顯著降低（圖6），但玉米黃質(zhì)的含量顯著增加。此外，葉黃素含量在兩者中均高于其他類胡蘿卜素成分，其次是玉米黃質(zhì)和-胡蘿卜素。類胡蘿卜素生物合成途徑中（圖7-B），黃化種玉米黃質(zhì)環(huán)氧酶（）和9-順式-環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶（）的表達(dá)顯著下調(diào)，八氫番茄紅素合成酶（）和紫黃質(zhì)脫環(huán)氧酶（）表達(dá)上調(diào)，這些DEGs不同程度的表達(dá)，調(diào)節(jié)類胡蘿卜素含量的變化。是類胡蘿卜素合成途徑的第一個(gè)限速酶基因，其表達(dá)上調(diào)可能加速‘福黃1號(hào)’中類胡蘿卜素的代謝。表達(dá)下調(diào)、上調(diào)可能是玉米黃質(zhì)含量在黃化種中上升的重要原因。

在類黃酮生物合成途徑中，其代謝物存在一定區(qū)別，與‘福安大白茶’相比，‘福黃1號(hào)’中代謝物含量略微下降，包括肉桂酸、查爾酮、二氫山奈素、二氫槲皮素和二氫楊梅素（附表3）。轉(zhuǎn)錄數(shù)據(jù)顯示（圖7-C），類黃酮生物合成途徑相關(guān)的DEGs顯著下調(diào)。類黃酮3-羥化酶（F3H）、類黃酮3′, 5′-羥化酶（F3′5′H）、二氫黃烷醇4-還原酶（DFR）和花青素還原酶（ANS）表達(dá)顯著下降，F(xiàn)3H和F3′5′H是類黃酮合成途徑的關(guān)鍵酶，分別下調(diào)2.20和2.61倍。

A：葉綠素a、葉綠素b、葉綠素總含量、葉綠素a/b以及類胡蘿卜素總含量；B：類胡蘿卜素各組分含量。*表示在P＜0.05水平上差異顯著

2.5 ‘福黃1號(hào)’轉(zhuǎn)錄組與代謝組聯(lián)合分析

2.5.1 光合蛋白相關(guān)的DEGs基因分析 差異表達(dá)基因KEGG功能富集分析顯示，DEGs富集到與光合蛋白相關(guān)的途徑，包括‘光合作用-天線蛋白’途徑和‘內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工’途徑（圖8）。和是植物光合系統(tǒng)中重要的控制酶，‘福黃1號(hào)’中、、、均顯著下調(diào)，這與葉綠體發(fā)育不完全密切相關(guān)。外部壓力和植物體內(nèi)相關(guān)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生變化會(huì)干擾蛋白質(zhì)的合成和變性過程，黃化種中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工途徑中相關(guān)的多種DEGs發(fā)生顯著變化，其中，熱休克蛋白作為應(yīng)激水平的指標(biāo)，在‘福黃1號(hào)’中顯著下調(diào)，包括熱休克蛋白（、、）和熱休克轉(zhuǎn)錄因子（）。在黃化品種中，與蛋白加工相關(guān)的DEGs變化顯著，、、和顯著下調(diào)，和顯著上調(diào)，與泛素化相關(guān)的蛋白水解酶基因、、顯著上調(diào)，顯著下調(diào)，表明黃化種中的蛋白質(zhì)合成和降解更加劇烈，這可能導(dǎo)致黃化過程中其他物質(zhì)的積累或降解。

A：葉綠素生物合成通路；B：類胡蘿卜素生物合成通路；C：類黃酮生物合成通路。紅色代表上調(diào)代謝物，綠色代表下調(diào)代謝物。熱圖表示所有與通路相關(guān)DEGs的表達(dá)水平，由3個(gè)重復(fù)樣本計(jì)算得出的平均值進(jìn)行l(wèi)og2轉(zhuǎn)換生成。CHLG：葉綠素a合酶。NOL：葉綠素b還原酶；HCAR：7-羥甲基葉綠素a還原酶；DVR：二乙烯基葉綠素a 8-乙烯基還原酶；POR：原葉綠素還原酶；EARS：谷氨酰tRNA合成酶；SGR：鎂脫氫酶；PSY：八氫番茄紅素合成酶；PDS：八氫番茄紅素脫氫酶；LCYE：ε-番茄紅素環(huán)化酶；ZEP：玉米黃質(zhì)環(huán)氧酶；VDE：紫黃質(zhì)脫環(huán)氧酶；NCED：9-順式-環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶；CHS：查耳酮合成酶；CHI：查耳酮異構(gòu)酶；F3H：類黃酮3β-羥化酶；F3′5′H：類黃酮3′, 5′-羥化酶；DFR：二氫黃烷醇4-還原酶；ANS：花青素還原酶。下同

2.5.2 碳、氮代謝相關(guān)的DEGs和SCMs聯(lián)合分析 對(duì)游離氨基酸進(jìn)行靶向測(cè)定，共鑒定到19種游離氨基酸，其中‘福黃1號(hào)’茶氨酸、精氨酸、脯氨酸、賴氨酸、天冬氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺均顯著高于‘福安大白茶’，茶氨酸含量達(dá)到66.90 mg?g-1，占68.69%，而精氨酸含量達(dá)到8.46 mg?g-1，是‘福安大白茶’的56.4倍（表2）。相反，在黃化葉片中，葉綠素、核酸和其他幾種含氮化合物被抑制，氮的利用率降低。關(guān)于無機(jī)氮同化為氮轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸，觀察到編碼鐵氧還蛋白-亞硝酸鹽還原酶（）、二氧化碳可逆作用酶（）表達(dá)水平較低，但編碼谷氨酸合成酶（）、谷氨酰胺合成酶（）、谷氨酸脫羧酶（）表達(dá)水平與‘福安大白茶’相比較高（圖9）。參與絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶（）的表達(dá)在‘福黃1號(hào)’中受到抑制，而在芳香族氨基酸生物合成途徑中，觀察到編碼醇脫氫酶（）在黃化葉片中上調(diào)。在‘福黃1號(hào)’中、和的表達(dá)水平分別是‘福安大白茶’的1.17倍、3.17倍和2.31倍。谷胱甘肽代謝途徑中（圖9），磷脂酰膽堿二?；视湍憠A磷酸轉(zhuǎn)移酶（）表達(dá)受到抑制，而與編碼6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶（）相關(guān)的基因表達(dá)上調(diào)，且煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（）含量也在黃葉中顯著上調(diào)（附表3）。

A：光合作用-天線蛋白途徑；B：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工途徑。GlcI：甘露糖基寡糖葡糖苷酶；GlcII：甘露糖基寡糖α-1, 3-葡萄糖苷酶；Climp63：細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白4；CNX：鈣連接蛋白；ERP57：蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3；CRT：鈣網(wǎng)蛋白；UGGT：UDP-葡萄糖∶糖蛋白葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶；VIP36：凝集素, 甘露糖結(jié)合2；ERGL：凝集素, 甘露糖結(jié)合1；Sec：調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白；Ero1：ERO1 α蛋白；PDIs：蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶；OS9：OS-9蛋白；XTP3B：蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A1；TRAP：轉(zhuǎn)位子相關(guān)蛋白亞基α；Bap31：B細(xì)胞受體相關(guān)蛋白31；NEF：熱休克蛋白110；DOA1：磷脂酶A-2激活蛋白；Otu1：泛素硫酯酶；LHCA、LHCB：葉綠素a/b結(jié)合蛋白；Hsp20、Hsp40、Hsp70、Hsp90：熱休克蛋白；sHSF：熱休克轉(zhuǎn)錄因子；Png1：肽-N4-(N-乙?；?β-氨基葡萄糖基)天冬酰胺酰胺酶；ERManI：甘露糖基寡糖α-1, 2-甘露糖苷酶；SAR1：GTP結(jié)合蛋白；RAD23：紫外線切除修復(fù)蛋白；SWP1、WBP1：寡聚糖基轉(zhuǎn)移酶；Ubx、APC3、PCHY1：泛素化介導(dǎo)的蛋白水解酶；UBE3：RING型E3泛素化轉(zhuǎn)移酶；UBP：泛素化特異性蛋白酶

葉綠體和膜結(jié)構(gòu)的異常發(fā)育抑制了光合作用，從而損害了糖代謝和碳同化作用。SCMs和DEGs聯(lián)合分析發(fā)現(xiàn)，在‘福黃1號(hào)’中，糖酵解途徑中相關(guān)DEGs表達(dá)顯著下調(diào)，包括葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶（）、果糖二磷酸醛縮酶（）、2, 3-二磷酸甘油酸依賴性磷酸甘油酸變位酶（）?；趶V泛靶向代謝組數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)與‘福安大白茶’相比，‘福黃1號(hào)’中大多數(shù)碳水化合物及其結(jié)合物的含量較低，如D-果糖（D-Fructose）、D-葡萄糖*（D-Glucose*）、D-半乳糖*（D-Galactose*）、麥芽糖（Maltotriose）、木糖醇（Xylitol）、蔗糖-6-磷酸（Sucrose-6-phosphate）。相比之下，在‘福黃1號(hào)’中D-木糖（D-Xylose）、D-蔗糖*（D-Sucrose*）的含量都明顯增加（附表3）。關(guān)于TCA循環(huán)（圖9），黃化葉片中的酮戊二酸和檸檬酸含量增加，但蘋果酸含量減少。磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（）、三磷酸腺苷檸檬酸合酶（）表達(dá)量顯著上調(diào)，而琥珀酸脫氫酶（）表達(dá)量顯著下調(diào)。

糖酵解途徑、三羧酸循環(huán)途徑、同化硝酸鹽還原途徑、谷胱甘肽代謝途徑及氨基酸合成途徑。GPI：葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶；ALDO：果糖二磷酸醛縮酶；PGAM：2,3-二磷酸甘油酸依賴性磷酸甘油酸變位酶；PPC：磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶；ACLY：三磷酸腺苷檸檬酸合酶；ADH：醇脫氫酶；SDHC：琥珀酸脫氫酶；glyA：絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶；GOGAT：谷氨酸合成酶；GLU：谷氨酰胺合成酶；GAD：谷氨酸脫羧酶；DHAR：磷脂酰膽堿二酰基甘油膽堿磷酸轉(zhuǎn)移酶；PGD：6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶；NirA：鐵氧還蛋白-亞硝酸鹽還原酶；cynT：二氧化碳可逆作用酶

3 討論

3.1 ‘福黃1號(hào)’的葉色變異

植物葉片顏色由其所含色素共同作用決定，葉綠素a和葉綠素b代謝異常產(chǎn)生的黃化、淺綠等表型居多，而類胡蘿卜素代謝異常，通常會(huì)產(chǎn)生白化致死表型[23]。在‘福黃1號(hào)’中，發(fā)現(xiàn)葉綠素a和葉綠素b的含量顯著低于‘福安大白茶’，葉綠素a/b通常與光合能力有關(guān)[24]，也呈現(xiàn)下降。葉綠素合成途徑中，‘福黃1號(hào)’中鎂脫氫酶基因（）表達(dá)量顯著降低，該基因是葉綠素a和葉綠素b合成相關(guān)的重要酶，在茶樹‘黃金水仙’發(fā)現(xiàn)表達(dá)量下調(diào)會(huì)影響葉綠素的合成，而葉綠素生物合成相關(guān)基因和也可能在‘華白1號(hào)’的顏色變化中起一定作用[10,16]。在茶樹黃化品種中，葉片葉綠體結(jié)構(gòu)遭到破壞，葉綠素a/b下降和葉綠素含量降低，相關(guān)基因表達(dá)下調(diào)，黃化葉片中光吸收和轉(zhuǎn)換光能效率降低，最終影響葉片著色。類胡蘿卜素合成通路中，和表達(dá)顯著上調(diào)，是類胡蘿卜素合成通路的第一個(gè)限速酶，對(duì)類胡蘿卜素的合成具有調(diào)控作用。催化玉米黃質(zhì)裂解而調(diào)控玉米黃質(zhì)積累[25]；在‘福黃1號(hào)’中，這些差異基因不同程度的上調(diào)與下降有助于類胡蘿卜素組分的改變。尤其是玉米黃質(zhì)的顯著增加，玉米黃質(zhì)具有氧化作用，保護(hù)類囊體膜免受光抑制和光破壞，推測(cè)黃化品種茶樹的葉片中玉米黃質(zhì)含量的升高是植物在過剩光和低溫下為了維持正常的光合能力和效率而做出的調(diào)整，也可能是茶樹黃化產(chǎn)生的原因之一[14,26]。有研究發(fā)現(xiàn)類黃酮合成基因在黃化葉片中表達(dá)量下降[27]。在‘福黃1號(hào)’類黃酮合成途徑中，SCMs與DEGs均下調(diào)，和是類黃酮合成途徑的關(guān)鍵酶，這表明‘福黃1號(hào)’黃葉表型產(chǎn)生由不同的分子機(jī)制決定。

表2 ‘福安大白茶’和‘福黃1號(hào)’游離氨基酸含量

不同小寫字母表示差異顯著（＜0.05） a, b: Indicate significant difference (＜0.05)

前人研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)葉色突變體在類囊體膜的結(jié)構(gòu)上會(huì)發(fā)生變化，如在銀杏葉中，黃葉的類囊體膜被轉(zhuǎn)化成許多異常的囊泡[28]。在‘福安大白茶’和‘福黃1號(hào)’的研究中，發(fā)現(xiàn)突變體的葉綠體結(jié)構(gòu)與正常綠葉的葉綠體結(jié)構(gòu)有顯著差異，葉綠體類囊體呈絲狀，基粒片層排列疏松散亂，片層間縫隙大，存在許多異常的囊泡。因此，突變體葉片顏色的變化可能反映了突變體葉片中質(zhì)體發(fā)育和功能的異常。植物光合系統(tǒng)與葉綠體密切相關(guān)，‘福黃1號(hào)’葉綠體的發(fā)育不完全，使得與光合作用相關(guān)的差異基因顯著下調(diào)，是植物光合系統(tǒng)中重要的光捕獲葉綠素a/b結(jié)合蛋白，與‘福安大白茶’相比，其黃葉中、、、均顯著下調(diào)，表明光合作用活性下降。而外界壓力會(huì)干擾蛋白質(zhì)的合成和變性過程，熱休克蛋白（HSPs）可以作為保護(hù)性蛋白質(zhì)來維持植物體內(nèi)的細(xì)胞穩(wěn)態(tài)[29]。在許多植物中已經(jīng)觀察到通過介導(dǎo)葉綠體發(fā)育而參與葉片的著色。擬南芥中HSP100家族成員的失活通過影響葉綠體功能而導(dǎo)致葉片變黃和生長(zhǎng)遲緩[30]。抑制兩個(gè)的轉(zhuǎn)基因擬南芥表現(xiàn)為白色且發(fā)育不良，并且葉綠體類囊體膜很少或完全沒有[31]。在‘黃葉肉桂’中也發(fā)現(xiàn)這種特定的轉(zhuǎn)錄模式[3]。這暗示在‘福黃1號(hào)’中，和表達(dá)受到抑制進(jìn)而影響葉綠體的生物合成來調(diào)節(jié)葉片著色。

3.2 ‘福黃1號(hào)’高茶氨酸代謝

前人研究發(fā)現(xiàn)，植物在應(yīng)對(duì)生物或非生物脅迫反應(yīng)中，通過降解異常、錯(cuò)誤折疊或受損的蛋白質(zhì)，以避免這些冗余蛋白造成的損害。蛋白質(zhì)降解是一種非常重要的翻譯后修飾，而泛素（Ub）-蛋白酶系統(tǒng)（UPS）是真核細(xì)胞中主要的蛋白降解途徑[32]。在‘安吉白茶’中共鑒定到9個(gè)顯著上調(diào)的泛素化相關(guān)蛋白，低溫耐受性的蛋白質(zhì)泛素化可能是‘安吉白茶’白化期蛋白質(zhì)減少和氨基酸積累的關(guān)鍵原因[33]。本研究中，‘福黃1號(hào)’中與泛素化相關(guān)的DEGs共4個(gè)，包括泛素化介導(dǎo)的蛋白水解酶（、）和RING型E3泛素化轉(zhuǎn)移酶（）表達(dá)顯著上調(diào)，泛素化特異性蛋白酶（）表達(dá)顯著下調(diào)，這表明在黃化種中處理變性蛋白的需求增加，黃化葉片中蛋白質(zhì)的降解更加劇烈，這可能與導(dǎo)致黃化過程中氨基酸的積累相關(guān)，在‘黃金菊’中也有類似的發(fā)現(xiàn)[5]。

在茶樹黃化突變體中，氮代謝的激活和氨基酸的積累通常歸因于廣泛的蛋白質(zhì)降解和低氮消耗[34]。在目前的研究中，觀察到‘福黃1號(hào)’中葉綠素、核酸和其他幾種含氮化合物被抑制，氮的利用率降低，蛋白質(zhì)加工和氨基酸代謝相關(guān)的轉(zhuǎn)錄水平增加，這種現(xiàn)象可能是由膜結(jié)構(gòu)受損和大分子分解引起的[27]，從而增加了黃化葉中的氨基酸含量。事實(shí)上，通過轉(zhuǎn)錄和非靶向測(cè)定，發(fā)現(xiàn)‘福黃1號(hào)’中游離氨基酸含量顯著高于‘福安大白茶’，包括茶氨酸、谷氨酰胺、精氨酸等，尤其是茶氨酸（表2），且在‘福黃1號(hào)’中調(diào)節(jié)谷氨酸和谷氨酰胺合成的、的表達(dá)水平分別是‘福安大白茶’的1.17倍、3.17倍。谷氨酸一直被用作含氮化合物生物合成的氮源[35]。葉綠素和其他含氮分子生物合成的減少導(dǎo)致谷氨酸的前體代謝物的消耗減少，從而推動(dòng)谷氨酸的積累。隨著氮資源的積累，以及黃化葉片中碳骨架的缺乏，氨基和氮資源被更有效地儲(chǔ)存，這可能促使谷氨酰胺、茶氨酸和精氨酸成為黃化葉片中顯著積累的含氮化合物[27]。此外，L-茶氨酸只能在根系中生物合成，可能由于從根系中的連續(xù)運(yùn)輸和在黃化葉中消耗的減少而積累。在茶葉中，谷氨酸作為茶氨酸生物合成的前體，谷氨酸向茶氨酸的轉(zhuǎn)化經(jīng)常發(fā)生，高谷氨酸水平加速茶氨酸的生物合成[36]。在‘福黃1號(hào)’中，碳水化合物減少，糖代謝減少，類黃酮含量減少以及氨基酸含量顯著積累，這表明與碳代謝相關(guān)的途徑都被抑制，進(jìn)一步破壞了黃化突變種中碳氮之間的平衡，前人在擬南芥變異種中也有類似發(fā)現(xiàn)，光合速率和碳代謝降低，而氮代謝增強(qiáng)[34]。轉(zhuǎn)錄和代謝聯(lián)合分析結(jié)果顯示，黃化葉片參與糖酵解相關(guān)的DEGs表達(dá)顯著下調(diào)（、、），大多數(shù)碳水化合物及其結(jié)合物的含量較低，如果糖、葡萄糖，葉片處于缺碳狀態(tài)，沒有足夠的碳骨架促進(jìn)生物合成氨基酸。有趣的是，黃化葉中檸檬酸、酮戊二酸含量顯著增加但蘋果酸含量減少。磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（）、三磷酸腺苷檸檬酸合酶（）表達(dá)量在‘福黃1號(hào)’中顯著上調(diào)，而琥珀酸脫氫酶（）表達(dá)量顯著下調(diào)，這暗示了即使碳架的有效性降低，TCA循環(huán)卻被激活。這一結(jié)果可能是氮積累和碳供應(yīng)短缺的共同作用，該結(jié)果與以往研究相似[5,17,27]。

4 結(jié)論

‘福黃1號(hào)’葉綠素a/b值下降、葉綠素含量降低、葉綠體結(jié)構(gòu)受到破壞，葉綠素合成以及光捕獲相關(guān)的基因表達(dá)下調(diào)，這可能是葉色呈現(xiàn)黃色的重要原因。此外，在黃化葉片中，泛素化相關(guān)的蛋白質(zhì)水解酶表達(dá)上調(diào)，蛋白降解能力加強(qiáng)，葉綠素和其他含氮分子生物合成的減少，以及碳骨架的缺乏，氨基和氮資源被更有效地儲(chǔ)存，使得與氨基酸合成相關(guān)的氮代謝激活，與茶氨酸合成有關(guān)的前體物質(zhì)之一的谷氨酸積累，這可能促使茶氨酸在‘福黃1號(hào)’中顯著積累。高茶氨酸茶樹資源具有重要的應(yīng)用價(jià)值，具有高茶氨酸的‘福黃1號(hào)’可排除遺傳背景、生長(zhǎng)條件等部分因素的影響，是較優(yōu)的葉色變異和高茶氨酸茶樹新品系選育材料。

致謝：本研究得到福建省蕉城區(qū)茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展中心連光付、吳洪新、馮昌強(qiáng)，福建省蕉城區(qū)茶業(yè)協(xié)會(huì)鄭康麟、宋岸偉、吳妙金的大力幫助，特此致謝。

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The Albino Mechanism of a New High Theanine Tea Cultivar Fuhuang 1

LIN XinYing1, WANG PengJie1, YANG RuXing2, ZHENG YuCheng1, CHEN XiaoMin1, ZHANG Lei2, SHAO ShuXian1, YE NaiXing

1College of Horticulture, Fujian Agriculture and Forestry University/Key Laboratory of Tea Science at Universities in Fujian, Fuzhou 350002;2Tea Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350013

【】 The aim of this study was to analyze metabolic and transcriptional mechanism of etiolated variation in tea plant, and to explore the albino mutation of a new homotheanine tea cultivar Fuhuang 1 and its formation mechanism of homotheanine. 【】 The experimental materials were Fuan Dabaicha and Fuhuang 1. The combined analysis of ultramicroelectron microscopy, widely targeted metabolism, targeted metabolomics and transcriptomics was used to clarify the pigments, metabolism and transcriptome data related to the albino tea.【】The results of ultrastructure showed that the chloroplast thylakoids of Fuhuang 1 was filamentous, with irregular arrangement of basal granule lamellae and many abnormal vesicles. Chlorophyll a and chlorophyll b content, chlorophyll a/b ratio,gene expression and light-harvesting chlorophyll a/b protein (LHC) expression were significantly reduced in yellow leaves. Although the total content of carotenoids did not change significantly, the content of each component changed significantly. Zeaxanthin was the only component with significant increase, and the expression of its regulatory genewas significantly up-regulated, and the content of other components decreased. Compared with Fuan Dabaicha, 680 differentially expressed genes (DEGs) and 57 significantly changed metabolites (SCMs) were identified in Fuhuang 1. KEGG enrichment analysis showed that SCMs and DEGs were significantly enriched in pathways related to amino acid biosynthesis, glutathione metabolism and TCA cycle. In addition, the pathways related to carbon and nitrogen metabolism were also activated. A total of 19 free amino acids were identified by targeted determination. The free amino acid content of Fuhuang 1 was 97.13 mg?g-1, which was significantly higher than that of Fuan Dabaicha. Theanine content was 66.90 mg?g-1, accounting for 68.89% of amino acids, while the content of arginine was 8.46 mg?g-1, which was 56.4 times as more as that of Fuan Dabaicha. The expression levels ofand, which regulated amino acid synthesis, were up-regulated in Fuhuang 1 by 1.17 and 3.17 times higher than that in Fuan Dabaicha. 【】The leaf color of Fuhuang 1 was mainly influenced by chlorophyll, carotenoids and flavonoids. The combined action ofand the fourmight also affect chloroplast biogenesis to regulate leaf color. The content of theanine in Fuhuang 1 was significantly higher than that in Fuan Dabaicha. The main reason was that the up-regulation of ubiquitination-related protein hydrolase activity and the enhanced protein degradation ability. The biosynthesis of chlorophyll and other nitrogen-containing molecules was reduced, the carbon skeleton in yellow leaves was lacking, amino and nitrogen resources were stored more effectively. The activation of nitrogen metabolism associated with amino acid synthesis led to the accumulation of glutamate, one of the precursors of theanine synthesis. Theanine accumulated significantly in yellow leaves.

teaplant; Fuhuang 1（）; albino; metabolomics; transcriptomics; omics technology

10.3864/j.issn.0578-1752.2022.09.012

2021-09-02；

2021-11-01

福建省“2011協(xié)同創(chuàng)新中心”中國(guó)烏龍茶產(chǎn)業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心專項(xiàng)（閩教科〔2015〕75號(hào)）、福建省屬公益類科研院所基本科研專項(xiàng)（2021R1029001）、茶學(xué)福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放項(xiàng)目（KLTS2018001）、福建張?zhí)旄２枞~發(fā)展基金會(huì)科技創(chuàng)新基金（FJZTF01）

林馨穎，E-mail：12565769@qq.com。通信作者葉乃興，E-mail：ynxtea@126.com。通信作者楊如興，E-mail：649745878@qq.com

（責(zé)任編輯 趙伶俐）