劇慧棟，解立斌，趙 瑋

(1.石家莊學(xué)院，河北石家莊 050000; 2.石家莊市疾病預(yù)防控制中心，河北石家莊 050000)

蝙蝠作為一種人獸共患疾病病原的重要載體，近年來(lái)越來(lái)越引起人們的重視，蝙蝠寄生線蟲(chóng)作為潛在的人獸共患病病原體需要進(jìn)行研究。莫圓屬線蟲(chóng)(Molinostrongylus)隸屬于圓形目(Strongylida)， 莫林科(Molineidae)，是由Skarbilovitch在1934年建立的，其模式種為(MolinostrongylusskrjabiniSkarbilovitsch 1934)[1]，寄生于蝙蝠消化道，目前該屬共報(bào)道了19種[2-6]，在全球除美洲外均有分布，其中分布于大洋洲2種[9]，分布于歐洲6種[7]，分布于亞洲7種[7,11]，分布于非洲6種[7,10]。我國(guó)僅報(bào)道1種[Molinostrongylusalatus(Ortlepp,1932) Skarbilovitch,1934]，該種最早是由Ortlepp在1932年發(fā)現(xiàn)，1934年，Skarbilovitch將該種移入莫圓屬，1980年，我國(guó)學(xué)者尹文真在云南德宏南蝠(Iaio)腸中采集并報(bào)道了該種，將該種命名為南蝠莫圓線蟲(chóng)[8]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 透明液(乳酸∶苯酚∶蒸餾水∶甘油=1∶1∶1∶2)，河北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院動(dòng)物系統(tǒng)學(xué)與分子進(jìn)化實(shí)驗(yàn)室配制。

1.1.2 主要儀器 數(shù)碼光學(xué)顯微鏡(Nikon Eclipse Ni)、解剖鏡(Nikon SMZ1500)，尼康株式會(huì)社公司產(chǎn)品；超凈工作臺(tái)，蘇靜集團(tuán)安泰空氣技術(shù)有限公司產(chǎn)品；超級(jí)藍(lán)吉列白金涂層刀片，中美合資上海吉列有限公司產(chǎn)品；針灸針，蘇州東邦醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集 標(biāo)本于2018年9月采自廣東省龍門縣大蹄蝠(Hipposiderosarmiger)，廣東省廣州越秀公園東亞伏翼(Pipistrellusabramus)的腸胃。解剖蝙蝠采集的線蟲(chóng)分別放入不同的培養(yǎng)皿中，然后用80℃左右的熱水將蟲(chóng)體燙直。并將線蟲(chóng)保存于700 mL/L乙醇的EP管中，在其中放置硫酸紙標(biāo)簽，標(biāo)簽詳細(xì)記錄宿主的種名、寄生部位、采集時(shí)間和地點(diǎn)等，并將以上記錄信息登記成冊(cè)。標(biāo)本保存于河北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院。

1.2.2 線蟲(chóng)的觀察測(cè)量與繪圖 將已固定的完整蟲(chóng)體用750 mL/L乙醇或透明液制成臨時(shí)裝片，在光學(xué)顯微鏡下，對(duì)蟲(chóng)體的結(jié)構(gòu)和器官進(jìn)行整體的觀察，使用顯微鏡測(cè)量和繪圖工具對(duì)標(biāo)本的體長(zhǎng)、最大體寬、頭泡長(zhǎng)與寬、神經(jīng)環(huán)、頸乳突、排泄孔距離頭端的距離、食道長(zhǎng)與食道的最大寬度、側(cè)翼寬、交合傘的形態(tài)及肋的長(zhǎng)度及組合方式，背肋的形態(tài)，分叉的形式、雄蟲(chóng)交合刺的長(zhǎng)度、形態(tài)、交合刺分叉的形態(tài)、引帶的長(zhǎng)度、形態(tài)、雌蟲(chóng)陰門的形態(tài)距尾端的距離，陰道的長(zhǎng)度，前庭的長(zhǎng)度形態(tài)、括約肌的形態(tài)和長(zhǎng)度、漏斗的形態(tài)和長(zhǎng)度、子宮的長(zhǎng)度、卵的形態(tài)和長(zhǎng)度、寬度、雌蟲(chóng)尾部等結(jié)構(gòu)進(jìn)行測(cè)量和手繪圖，借助數(shù)碼光學(xué)顯微鏡的拍攝功能對(duì)線蟲(chóng)標(biāo)本的主要形態(tài)特征進(jìn)行鑒別并拍照。

1.2.3 線蟲(chóng)橫截面切片的制作與觀察繪圖方法 清洗：用0.1 mol/L的磷酸鹽緩沖液清洗線蟲(chóng)標(biāo)本。固定：將線蟲(chóng)置于100 mL/L福爾馬林溶液24 h～48 h，使組織硬度適于切片。切片：將線蟲(chóng)置于載玻片上，用針灸針蘸取微量水，使線蟲(chóng)保持濕潤(rùn)，用解剖鏡觀察線蟲(chóng)，找到目的部位，雙手持刀片，使刀刃垂直于蟲(chóng)體的縱軸，迅速切割橫截面使其一分為二，其中一半保存?zhèn)溆茫硪话朐诮馄淑R下選取距切面最近的截面，迅速切下，將橫截面置于載玻片，蓋上蓋玻片，用吸管在載玻片邊緣加一滴水，放到顯微鏡下觀察脊的個(gè)數(shù)、大小、是否垂直于體表、是否有側(cè)翼及其他結(jié)構(gòu)。繪制線蟲(chóng)橫截面圖，重點(diǎn)描繪出脊的個(gè)數(shù)、大小、形態(tài)，如果有側(cè)翼，將側(cè)翼的特點(diǎn)進(jìn)行描繪。本文測(cè)量單位均為μm(文中另行標(biāo)出的除外)。

2 結(jié)果

2.1 等刺莫圓線蟲(chóng)(Molinostrongylus spasskii)

2.1.1 宿主和采集地 大蹄蝠(Hipposiderosarmiger)采自中國(guó)廣東省龍門縣；檢視標(biāo)本：5雄2雌(HBNU-M1013)。寄生部位：小腸、胃。感染率：100%(解剖1只)。感染強(qiáng)度：7條。采集時(shí)間：2018年9月。

2.1.2 宿主和采集地 東亞伏翼(Pipistrellusabramus)采自中國(guó)廣東省廣州越秀公園；檢視標(biāo)本：4雄1雌(HBNU-M1014)。寄生部位：小腸、胃。感染率：100 %(解剖1只)。感染強(qiáng)度：5條。采集時(shí)間：2018年9月。

(1)鑒定特征:細(xì)小乳白色線蟲(chóng)，具頭泡(圖1B)。體表具細(xì)小橫紋，有兩個(gè)側(cè)翼(圖1B)，雄蟲(chóng)側(cè)翼從頭泡末端一直延伸至交合傘，雌蟲(chóng)側(cè)翼一直延伸至尾端。腹面和背面各有3條從頭泡一直延伸的尾端的縱脊(圖1A)。身體中部最寬，食道細(xì)長(zhǎng)呈棒狀，后部比前部稍寬。神經(jīng)環(huán)大約在食道的前1/2的位置；排頸乳突大約在食道的2/3的位置圖(1B)；排泄孔在頸乳突與神經(jīng)環(huán)中間緊挨頸乳突。雄蟲(chóng)交合傘由2個(gè)大的側(cè)葉和1個(gè)小的背葉組成，交合傘肋的排列方式為3-2型。背肋的各分叉明顯，分支細(xì)長(zhǎng)(圖1C)。交合刺細(xì)長(zhǎng)，末端分為兩個(gè)叉(圖1D，圖2A和圖3D)。引帶近端呈不規(guī)則斧頭狀，遠(yuǎn)端類似紡錘的一端(圖1D，圖2B和圖3D)。雌蟲(chóng)尾端有3個(gè)瘤狀突起和1根細(xì)長(zhǎng)刺，3個(gè)瘤狀突起大小相同且粗壯(圖1F和圖4C)。

A.雄蟲(chóng)體中部橫切面；B.雄蟲(chóng)前部，腹面觀；C.交合傘，腹面觀；D.交合刺，腹面觀；E.排卵器，側(cè)面觀；F.雌蟲(chóng)尾，側(cè)面觀

A.交合刺，腹面觀；B.引帶，腹面觀A.Spicules,ventral view; B.Gubernaculum,ventral viewScale-bars:A=50 μm; B =10 μm

(2)雄蟲(chóng)(9條)：蟲(chóng)體長(zhǎng)2.9 mm～3.3 mm(3.1 mm)，最大體寬66 mm～82 mm(72 mm)。頭泡長(zhǎng)31 mm～40 mm(35 mm)，寬26 mm～35 mm(32 mm)。神經(jīng)環(huán)、頸乳突、排泄孔距離頭端的距離分別為96 mm～110 mm(103 mm)、169 mm～180 mm(172 mm)和163 mm～172 mm(166 mm)。食道長(zhǎng)233 mm～272 mm(254 mm)，最大寬度35 mm～52 mm(37 mm)。側(cè)翼最寬18 mm～22 mm(20 mm)。交合傘由兩個(gè)大的側(cè)葉和一個(gè)小的背葉組成。交合傘肋的排列方式為3-2型，第2肋與其它肋分開(kāi)；第3肋和第4肋基部相連，平行延伸至末端。第5肋和第6肋基部連接在一起，末端分開(kāi)。第8肋起自近背肋基部。背肋垂直向下延伸，近末端分為2支，內(nèi)支末端又分為2個(gè)細(xì)長(zhǎng)的小支，分別為尾感器和第10肋(內(nèi)側(cè)小支)(圖1C)。交合刺細(xì)長(zhǎng)，末端分為兩個(gè)叉，長(zhǎng)165 mm～180 mm(175 mm)。引帶近端呈不規(guī)則斧頭狀，遠(yuǎn)端類似紡錘的一端，長(zhǎng)38 mm～52 mm(45 mm)。

A.雄蟲(chóng)頭端放大，側(cè)面觀；B.雄蟲(chóng)的頭端，腹面觀；C.雄蟲(chóng)尾部放大，腹面觀；D.雄蟲(chóng)尾部，腹面觀

(3)雌蟲(chóng)(3條)：體長(zhǎng)3.1 mm～3.5 mm(3.4 mm)，最大體寬為82 mm～96 mm(89 mm)，頭泡長(zhǎng)39 mm～56 mm(47 mm)，寬32 mm～42 mm(36 mm)(圖4A,4B)。神經(jīng)環(huán)神經(jīng)環(huán)、頸乳突、排泄孔距離頭端的距離分別為132 mm～146 mm(136 mm)，165 mm～196 mm(176 mm)，160 mm～191 mm(169 mm)。食道長(zhǎng)268 mm～305 mm(285 mm)，最大寬度為21 mm～28 mm(24 mm)。側(cè)翼最寬12 mm～17 mm(15 mm)。陰門距尾端1.22 mm～1.50 mm(1.35 mm)陰道長(zhǎng)16 mm～22 mm(18 mm)，前前庭長(zhǎng)55 mm～77 mm(65 mm)，后前庭長(zhǎng)33 mm～39 mm(36 mm)。前括約肌和漏斗分別長(zhǎng)20 mm～29 mm(25 mm)和25 mm～35 mm(30 mm)后括約肌和漏斗分別長(zhǎng)15 mm～22 mm(19 mm)和26 mm～34 mm(29 mm)(圖1E)，前子宮長(zhǎng)0.8 mm～1.3 mm(1.1 mm)，子宮內(nèi)有 5～28(17)個(gè)蟲(chóng)卵，后子宮長(zhǎng)1.0 mm～1.3 mm(1.1 mm) ，子宮內(nèi)有10～22(15)個(gè)蟲(chóng)卵，此時(shí)的蟲(chóng)卵均處于桑葚期，蟲(chóng)卵長(zhǎng)55 mm～92 mm(73 mm)，寬33 mm～72 mm(53 mm)，肛門距尾端的距離為56 mm～78 mm(66 mm)。雌蟲(chóng)尾端3個(gè)瘤狀突起長(zhǎng)14 mm～20 mm(17 mm)和細(xì)刺長(zhǎng)15 mm～23 mm(19 mm)。

A.雌蟲(chóng)頭端放大，側(cè)面觀；B.雌蟲(chóng)的頭端，腹面觀；C.雌蟲(chóng)尾部放大，腹面觀；D.雌蟲(chóng)尾部，腹面觀

3 討論

莫圓屬截止到目前一共報(bào)道19種。1975年，Durette-Desset等將該屬分為5個(gè)組(group)，分別是orantus組、richardae組、alatus組、skrjabini組、vespertilionis組。其中alatus組的鑒定特征為：兩個(gè)側(cè)翼，3個(gè)小的腹脊，3個(gè)小背脊，交合刺末端分兩個(gè)叉。

1968年，Andrejko等在烏克蘭大鼠耳蝠Myotismyotis和水鼠耳蝠Myotisdaubentoni體內(nèi)發(fā)現(xiàn)等刺莫圓線蟲(chóng)(Molinostrongylusspasskii)[12]，我們的標(biāo)本采自中國(guó)廣東省龍門縣的大蹄蝠(Hipposiderosarmiger)，中國(guó)廣東省廣州越秀公園的東亞伏翼(Pipistrellusabramus)，寄生部位為小腸和胃。通過(guò)對(duì)本次所采標(biāo)本的觀察測(cè)量，其符合alatus組的分類標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)該歸于alatus組，而該標(biāo)本雄蟲(chóng)的背肋的形態(tài)，引帶的形態(tài)特征，雌蟲(chóng)尾部具1個(gè)細(xì)長(zhǎng)刺，3個(gè)瘤狀突起形態(tài)大小相同且粗壯的特點(diǎn)是alatus組中M.spasskii所獨(dú)有的，原始描述相對(duì)比較簡(jiǎn)單，本研究增加了神經(jīng)環(huán)、頸乳突、排泄孔距離頭端的距離，食道長(zhǎng)度，雌蟲(chóng)陰門距尾端、肛門距尾端的距離，陰道、前庭、括約肌、漏斗、子宮的手繪圖，原始描述中交合刺的平均長(zhǎng)度為159 μm，引帶的平均長(zhǎng)度為53 μm，本研究中交合刺長(zhǎng)165 μm～180 μm(175 μm)，引帶長(zhǎng)38 μm～52 μm (45 μm)，我們的標(biāo)本交合刺的長(zhǎng)度略長(zhǎng)于原始報(bào)道，引帶的長(zhǎng)度略短于原始報(bào)道。在原始描述中雌蟲(chóng)尾端3個(gè)瘤狀突起和細(xì)刺的平均長(zhǎng)度分布為13 μm和16 μm，我們標(biāo)本的瘤狀突起和細(xì)刺的長(zhǎng)度分別為14 μm～20 μm (17 μm)和15 μm～23 μm (19 μm)均略大于原始標(biāo)本，其原因可能與不同的生存環(huán)境有關(guān)，也可能與來(lái)源于不同宿主有關(guān)。在主要形態(tài)上等刺莫圓線蟲(chóng)交合刺末端的分叉方式、引帶的形態(tài)；雌蟲(chóng)尾端瘤狀突起與細(xì)刺的形態(tài)與本次所采的標(biāo)本特征一致，因此判斷我們所采的標(biāo)本為等刺莫圓線蟲(chóng)。等刺莫圓線蟲(chóng)在我國(guó)為首次報(bào)道，為我國(guó)新記錄種。