王磊，劉群，肖云娜，趙凱麗，王佳茜，李建朋，李穎穎，楊蕊

(1.煙臺市食品藥品檢驗檢測中心，山東 煙臺 264000；2.山東第一醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，山東 濟南 250014)

天麻素(gastrodin)分子式為C13H18O7，又名天麻苷，即4-羥甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷，結(jié)構(gòu)式見圖1，于1979年首次從天麻中提取分離，因其植物提取法消耗工作量大，成本較高，現(xiàn)在各大藥企主要用化學(xué)合成法制備天麻素原料。

圖1 天麻素結(jié)構(gòu)式

天麻素在國家藥品標(biāo)準(zhǔn)收錄為中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物[1]，有抗驚厥、抗癲癇[2]、鎮(zhèn)靜催眠[3]、鎮(zhèn)痛抗炎[4]、心血管保護[5]等作用。天麻素片臨床用于神經(jīng)衰弱、頭痛、偏頭痛等癥。根據(jù)原國家食品藥品監(jiān)督管理局?jǐn)?shù)據(jù)庫檢索結(jié)果，目前國內(nèi)批準(zhǔn)上市的天麻素片劑有25 mg、50 mg、0.1 g(以天麻素計)、0.2 g(以天麻素計)4種規(guī)格，主要采用鋁塑泡罩包裝。不同企業(yè)的制備工藝不同，具體工藝參數(shù)也存在差異。

目前，我國天麻素片主要執(zhí)行《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》，標(biāo)準(zhǔn)編號為WS1-XG-021-2001，《美國藥典》《英國藥典》《日本藥局方》《歐洲藥典》均未收載天麻素與相關(guān)制劑標(biāo)準(zhǔn)，后三者僅收載了天麻。天麻素片現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)[1]采用紫外分光光度法測定天麻素含量，無法區(qū)分待測成分與其他雜質(zhì)在測定波長處的共同響應(yīng)，方法專屬性不強。本文建立了一種高效液相色譜法，方法專屬性好，簡便準(zhǔn)確，儀器精密度高，適用于天麻素片中天麻素的含量測定和含量均勻度檢查。

我國現(xiàn)有天麻素片批準(zhǔn)文號40個，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)[1]中無25 mg規(guī)格的含量均勻度項目，無法監(jiān)測該藥品質(zhì)量的均一性。根據(jù)相關(guān)規(guī)定[7]，本文對收集到的25 mg的天麻素片進行了含量均勻度考察，為天麻素片的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 XPR205DR電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；2040C高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司)；Mill-Q純水機(法國默克公司)。

1.2 藥品與試劑 3批天麻素片(規(guī)格25 mg，批號：20200101、20190506、20200304)均來自云南某生產(chǎn)企業(yè)；天麻素對照品(NIFDC，96.7%，批號：110807-201809)；液相色譜級乙腈，其他試劑均為分析純級。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Thermo BDS C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)色譜柱；乙腈-0.1%H3PO4溶液(3∶97)為流動相；流速：1.0 mL·min-1； 檢測波長為220 nm；柱溫：25 ℃；進樣10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取天麻素片20片，精密稱定，精密稱取本品細粉(約0.028 g，相當(dāng)于含天麻素約5 mg)，置100 mL量瓶中，加水約70 mL，超聲使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，用中速濾紙過濾，將續(xù)濾液用0.45 μm有機系微孔濾膜濾過，即得。

2.2.2 對照品溶液 將10.27 mg天麻素對照品置200 mL量瓶中，加入約130 mL水，超聲使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，用中速濾紙過濾，將續(xù)濾液用0.45 μm有機系微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 按該企業(yè)天麻素片工藝處方，取除天麻素以外的其他輔料，按 “2.2.1”項下方法，從“精密稱取本品細粉……”開始，依法制得本溶液。

2.3 專屬性試驗 取上述3種溶液，照“2.1”項下方法測定，結(jié)果見圖1。在天麻素峰處未見其他雜質(zhì)干擾，說明測定方法專屬性較好。

圖2 HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系試驗 精密量取對照品溶液1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 mL，分別置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，制得系列線性溶液，分別按 “2.1”項下方法重復(fù)測定2次。以天麻素濃度(X,μg·mL-1)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程:Y=36 128.68X-3 208.74，r=1.000 0。結(jié)果顯示，此方法中天麻素在0.497～24.83 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好。

2.5 精密度試驗 取“2.2.2”項下對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件，連續(xù)進樣 6 次，計算得6針天麻素峰面積的RSD=0.06%，儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 按“2.1”項下色譜條件，在 0、2、4、6、8、12、24 h時分別對同一供試品溶液進樣分析，7針的峰面積RSD=0.8%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，能夠滿足測定需要。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一批號天麻素片，照“2.2.1”項下方法制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分析，測得該批次天麻素片含天麻素17.8%，RSD=0.05%，該方法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗 取9份“2.7”項下所用天麻素片細粉0.014 g，分別置于 100 mL容量瓶中，每3份分別加入天麻素對照品溶液(4.815 mg·mL-1)0.400、0.500、0.600 mL，照“2.2.1”項下方法，自“加入約70 mL水……”開始，制備溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.9 方法耐用性 本試驗考察了Daiso Capcell PAD C18、Waters Xbridge C18、Thermo BDS Hypersil C18、Sepax GP C184種不同色譜柱對系統(tǒng)適應(yīng)性的影響，結(jié)果顯示，采用4種不同廠家、不同填料、不同柱長的C18色譜柱，雖然保留時間、峰面積響應(yīng)有所不同，但峰形良好、分離度均大于2.0，均能滿足待測物的分析要求。表明該方法耐用性良好。

2.10 樣品含量測定 取樣品(批號：20180904、20190506、20200304)，照 “2.2”項下方法制備溶液，按 “2.1”項下方法測定標(biāo)示含量，測得結(jié)果分別為94.9%、 96.4%、96.3%。

2.11 樣品含量均勻度測定 本文中收集到的3批天麻素片均為25 mg規(guī)格，為保證該藥品質(zhì)量的均一性，根據(jù)相關(guān)規(guī)定[6]，對3批樣品進行了含量均勻度考察。取3個批號的樣品各10片，分別置于50 mL量瓶中，照“2.2”項下方法制備溶液，測定結(jié)果見表2。結(jié)果均符合規(guī)定。

表2 樣品含量均勻度測定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 經(jīng)HPLC-PDA全波長掃描，天麻素的λmax= 220 nm ，選定220 nm 作為檢測波長。

3.2 結(jié)果與意義 天麻素雜質(zhì)Ⅰ為天麻素氧化降解的標(biāo)志性雜質(zhì)，天麻素片中通常含有天麻素雜質(zhì)Ⅰ等化合物，在現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中所采用的220 nm的測定波長處亦有相當(dāng)強度的紫外吸收，使得現(xiàn)行測定方法專屬性不強，建議改用高效液相色譜法進行分析。

近年已有文獻[7-8]顯示，高效液相色譜法測定天麻素含量多采用乙腈-水組合，其中添加少量酸，經(jīng)試驗比較，本方法采用的流動相條件下天麻素出峰快，色譜行為好。

本文對采集到的3批樣品進行了含量均勻度測定，結(jié)果均符合規(guī)定，但數(shù)值較大，接近15.0的規(guī)定限度，提示存在關(guān)注本品質(zhì)量均一性的需要。因此，本文建議增設(shè)25 mg規(guī)格的天麻素片含量均勻度項目，以對天麻素片產(chǎn)品質(zhì)量進行更好的控制。