魏嘉億， 張 欽， 李樂(lè)謙， 黃小夏， 劉轉(zhuǎn)華， 孫毛毛，包俊穎， 陳紅宇， 郭曉華， 黃巧冰△

（1南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，廣東省醫(yī)學(xué)休克微循環(huán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510515；2南方醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510515）

膿毒癥（sepsis）是一種對(duì)感染的免疫反應(yīng)失調(diào)、導(dǎo)致器官功能障礙的嚴(yán)重疾病，相關(guān)死亡率為15%~20%［1］。雖然現(xiàn)代重癥監(jiān)護(hù)的引入已經(jīng)極大地提高了存活率，但依舊沒(méi)有針對(duì)膿毒癥的特效藥。肝臟因?yàn)閰⑴c炎癥產(chǎn)物（特別是腸源性的細(xì)菌和內(nèi)毒素）的清除，成為膿毒癥中最易受損的器官之一，其結(jié)構(gòu)、功能和代謝的變化對(duì)膿毒癥的發(fā)生發(fā)展有重大影響［2］。鐵死亡是依賴于鐵的脂質(zhì)過(guò)氧化和活性氧堆積導(dǎo)致的細(xì)胞死亡［3］，已有研究表明小鼠膿毒癥肝損傷過(guò)程中有鐵死亡的參與［4］，但發(fā)生機(jī)制尚未明了。

蘿卜硫素（sulforaphane，SFN）是一種異硫氰酸鹽，衍生于硫代葡萄糖苷，在蕓薹屬植物中含量豐富。已有研究證明SFN 具有抗氧化、抗炎和抑制癌細(xì)胞的作用，并在膿毒癥動(dòng)物模型中對(duì)心肌有保護(hù)效應(yīng)，改善腎和肺功能［5-10］，但SFN 是否對(duì)膿毒癥肝損傷有抑制作用尚不清楚。SFN是核因子E2相關(guān)因子 2（nuclear factor E2-related factor 2，Nrf2）的激動(dòng)劑，研究已表明Nrf2 既能通過(guò)調(diào)節(jié)胱氨酸/谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白xCT和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4抑制鐵死亡［11］，也可通過(guò)阻斷促炎細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄而抑制巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)［12］；而炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）可促進(jìn)肝臟鐵調(diào)素（hepcidin）基因HAMP（hepcidin antimicrobial peptide）的轉(zhuǎn)錄［13］。鐵調(diào)素可內(nèi)化降解肝細(xì)胞膜的鐵輸出蛋白1（ferroportin 1，F(xiàn)PN1），使鐵無(wú)法轉(zhuǎn)運(yùn)出肝細(xì)胞，可能導(dǎo)致肝細(xì)胞鐵超載［14］。因此，本研究假設(shè)SFN 可能通過(guò)激活巨噬細(xì)胞的Nrf2，減少I(mǎi)L-6 的生成，抑制肝鐵調(diào)素的轉(zhuǎn)錄激活，從而促進(jìn)肝細(xì)胞的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)，減輕鐵超載和鐵死亡。本項(xiàng)工作通過(guò)建立膿毒癥肝損傷的小鼠模型，探討SFN 對(duì)膿毒癥小鼠肝臟鐵死亡的抑制作用及其可能機(jī)制。

材料和方法

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)C57BL/6 小鼠，7~10 周齡，雄性，體重20~25 g，購(gòu)于南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證：SCXK（粵）2016-0041。飼養(yǎng)在恒溫24 ℃，相對(duì)濕度40%~70%，光照周期12 h/12 h 環(huán)境中，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前12 h禁食。

1.2 試劑 SFN 和去鐵胺（deferoxamine，DFO）購(gòu)自MedChemExpress；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）試劑盒購(gòu)自中國(guó)貝博公司；IL-6 ELISA 試劑盒購(gòu)自中國(guó)武漢華美公司；鐵調(diào)素ELISA試劑盒購(gòu)自武漢伊萊瑞特公司；還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；RNA 提取試劑購(gòu)自中國(guó)捷倍斯生物公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自南京諾唯贊公司；熒光定量PCR 試劑購(gòu)自東盛生物公司；PCR 引物購(gòu)自上海生工生物工程有限公司；抗Nrf2和FPN1抗體購(gòu)自愛(ài)博泰克生物公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 構(gòu)建動(dòng)物模型 通過(guò)盲腸結(jié)扎穿孔（cecal ligation and puncture，CLP）構(gòu)建膿毒癥小鼠模型［15］。小鼠在術(shù)前12 h禁食，用劑量為10 mg/kg·bw 的10%水合氯醛麻醉。麻醉后行小鼠腹部去毛、消毒，沿腹中線切口取出盲腸，3 號(hào)手術(shù)線結(jié)扎，21G 針穿孔，擠出糞便，將盲腸復(fù)位，逐層縫合腹壁肌肉和皮膚。假手術(shù)組只取出盲腸不結(jié)扎不穿孔，其余步驟同CLP組。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組和給藥 將小鼠隨機(jī)分成4組：假手術(shù)（sham）組、CLP組、CLP+SFN組和CLP+DFO組，每組4只。SFN和DFO分別溶于生理鹽水中，CLP+SFN組在術(shù)后立即腹腔注射0.5 mg/kg 的SFN，CLP+DFO組在術(shù)后立即腹腔注射100 mg/kg 的DFO，sham組和CLP組給予等體積的生理鹽水。觀察12 h 后，取血制備血清，并取肝組織，用預(yù)冷的PBS 洗滌后，置于-80 ℃保存，后續(xù)進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。

2.3 肝功能指標(biāo)檢測(cè) 按照ALT 和AST 試劑盒說(shuō)明書(shū)，取 5 μL 的小鼠血清和標(biāo)準(zhǔn)品，與 25 μL 試劑 I混勻，37 ℃反應(yīng)30 min；再加入25μL試劑Ⅱ，混勻后37 ℃反應(yīng)20 min；最后加入240μL試劑Ⅲ，室溫放置10 min 后，505 nm 波長(zhǎng)處測(cè)得血清和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度計(jì)算小鼠血清中ALT 和AST活性。

2.4 ELISA 檢測(cè)血清中IL-6 和鐵調(diào)素水平 按照ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清中IL-6 和鐵調(diào)素水平。取50 μL 的小鼠血清，樣品稀釋液定容至100μL。血清樣品和標(biāo)準(zhǔn)品液各取100μL 到酶標(biāo)板中，覆膜，37℃孵育90 min；甩盡液體，加入生物素化抗體工作液100 μL，覆膜，37 ℃孵育60 min；甩盡液體，洗滌后加入酶結(jié)合物工作液100 μL，覆膜，37 ℃孵育30 min；甩盡液體，洗滌后加入底物溶液，37 ℃避光30 min，加入終止液后，450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)得血清和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度得到小鼠血清中IL-6和鐵調(diào)素含量。

2.5 化學(xué)比色法檢測(cè)肝組織勻漿中NADPH 和MDA 含量 按照NADPH 和MDA 試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，檢測(cè)肝組織勻漿中NADPH 和MDA 含量。50 mg肝組織勻漿 12 000×g離心 10 min 后取上清。50 μL的上清和NADPH 標(biāo)準(zhǔn)品液各加入100μL 的G6PDH工作液，37 ℃避光孵育 10 min 后，加入 10 μL 顯色液，混勻，37 ℃避光孵育20 min，在450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度，根據(jù)吸光度計(jì)算肝組織中NADPH 含量。100 μL 的上清和MDA 標(biāo)準(zhǔn)品工作液中各加入200μL的MDA 檢測(cè)工作液，混勻后100℃加熱15 min；水浴冷卻至室溫，1 000×g室溫離心10 min；取200 μL上清至96 孔板中，532 nm 波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度，根據(jù)吸光度計(jì)算MDA含量。

2.6 肝組織RNA 提取與RT-qPCR 用TRIzol 提取肝組織總RNA。1 μg 總RNA 用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。引物序列如下：GAPDH 的上游引物序列為5＇-AGGTCGGTGTGAACGGATTTG-3＇，下游引物序 列 為 5＇-TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA-3＇；前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成酶2（prostaglandin-endoperoxide synthase 2，PTGS2）的上游引物序列為5＇-CTGCGCCTTTTCAAGGATGG-3＇，下 游 引 物 序 列 為 5＇-GGGGATACACCTCTCCACCA-3＇；HAMP 的上游引物序列為 5＇-GCACTCAGCACTCGGACC-3＇，下游引物序列為 5＇-CACACTGGGAATTGTTACAGC-3＇；IL-6 的上游引物序列為5＇-TCCAGTTGCCTTCTTGGGAC-3＇，下游引物序列為5＇-GTACTCCAGAAGACCAGAGG-3＇。擴(kuò)增程序?yàn)椋侯A(yù)變性 95 ℃ 30 s；95 ℃ 30 s，60 ℃30 s，40 個(gè)循環(huán)；熔解曲線 95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s。用 2-ΔΔCt法來(lái)計(jì)算 PTGS2、HAMP 和 IL-6的mRNA相對(duì)定量。

2.7 酸消化法檢測(cè)肝組織中的非血紅素鐵 依據(jù)文獻(xiàn)［16］，取肝臟左外葉的肝組織100 mg，用三氯乙酸+鹽酸（10%三氯乙酸在3 mol/L鹽酸中）消化48 h，溫度65 ℃~70 ℃。等體積樣品或鐵標(biāo)準(zhǔn)（5 mg/L）在200 μl BAT 緩沖液（0.2%巰基乙酸和0.02%4，7-二苯基-1，10-菲咯啉二磺酸鈉在50%飽和醋酸鈉溶液中）室溫下孵育10 min。535 nm 處測(cè)得樣品孔和標(biāo)準(zhǔn)品孔吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品孔吸光度計(jì)算樣品孔非血紅素鐵含量。

2.8 Western blot 檢測(cè)蛋白表達(dá) 取肝組織勻漿或RAW264.7 細(xì)胞裂解液，離心取上清，BCA 法測(cè)濃度，10%聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，抗FPN1 抗體（1∶800）和抗Nrf2 抗體（1∶1 000）孵育過(guò)夜，次日孵育Ⅱ抗后洗膜，超敏發(fā)光試劑顯影。

2.9 HE染色觀察肝組織 CLP術(shù)后12 h，取小鼠肝臟組織，用4%多聚甲醛固定后脫水、石蠟包埋并切片，脫蠟、水化后使用HE染色，光鏡下觀察肝組織形態(tài)學(xué)改變。

2.10 透射電子顯微鏡觀察肝組織 CLP術(shù)后12 h，取1 mm×1 mm×1 mm 小鼠肝臟組織浸泡在2.5%戊二醛中，經(jīng)常規(guī)脫水、滲透、包埋、切片，用醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛染色，在透射電鏡下觀察肝組織線粒體形態(tài)變化。

2.11 細(xì)胞培養(yǎng)和分組 將RAW264.7 細(xì)胞以每皿3×106個(gè)接種于35 mm 培養(yǎng)皿中，用含10%胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)液，于 37 ℃、含5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每?jī)扇論Q液，根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，當(dāng)每皿細(xì)胞數(shù)約9×106個(gè)時(shí)傳代。將傳代后的細(xì)胞分為3組，正常對(duì)照（control，Ctrl）組僅加入等量的完全培養(yǎng)基；脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激組用含終濃度 1 mg/L 的 LPS 培養(yǎng)液干預(yù) 4 h；LPS 和 SFN 共同刺激（LPS+SFN）組用含有終濃度1 mg/L 的LPS 和50μmol/L 的SFN 培養(yǎng)液干預(yù)4 h。4 h 后提取細(xì)胞蛋白或者固定細(xì)胞。

2.12 免疫熒光觀察細(xì)胞內(nèi)Nrf2 蛋白定位 細(xì)胞用PBS 洗3 遍，經(jīng)4%多聚甲醛固定，0.1%Triton X-100通透，2%牛血清白蛋白封閉，抗Nrf2 抗體（1∶500）孵育過(guò)夜，次日孵育Ⅱ抗，DAPI 染色，在熒光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)Nrf2熒光信號(hào)。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用GraphPad Prism 8.0 軟件處理數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示，多組間比較使用單因素方差分析（one-way ANOVA）。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 SFN對(duì)CLP小鼠肝功能和肝臟組織形態(tài)的影響

與 sham組相比，CLP組小鼠血清 ALT 和 AST 水平顯著升高（P＜0.05），肝組織中肝索結(jié)構(gòu)欠清晰，肝竇狹窄，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯；而與CLP組相比，CLP+SFN組血清ALT 和 AST 水平顯著降低（P＜0.05），肝組織中肝索結(jié)構(gòu)恢復(fù)，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，見(jiàn)圖1。

Figure 1. Effect of sulforaphane on hepatic function and morphology. A：serum ALT and AST activity；B：HE staining of liver tissue（scale bar=50 μm；yellow arrow：infiltrated inflammatory cells）. Mean±SD. n=4.*P＜0.05 vs sham group；#P＜0.05 vs CLP group.圖1 蘿卜硫素對(duì)肝功能和肝組織形態(tài)學(xué)的影響

2 SFN對(duì)CLP小鼠肝組織鐵代謝的影響

與sham組相比，CLP組小鼠肝組織中HAMP mRNA 水平顯著升高，F(xiàn)PN1 蛋白表達(dá)顯著減少，血清中鐵調(diào)素蛋白水平顯著升高，非血紅素鐵顯著增多（P＜0.05）；而與CLP組相比，CLP+SFN組肝組織中HAMP mRNA 水平顯著下降，F(xiàn)PN1 蛋白表達(dá)顯著增加，血清鐵調(diào)素水平顯著降低，非血紅素鐵含量顯著減少（P＜0.05），見(jiàn)圖2。

3 SFN對(duì)CLP誘導(dǎo)的肝組織鐵死亡的影響

與sham組相比，CLP組小鼠肝組織中NADPH 和MDA 含量顯著增加，PTGS2 mRNA 水平顯著升高（P＜0.05），線粒體形態(tài)縮小，嵴消失；給予鐵死亡抑制劑 DFO 后（CLP+DFO組），肝組織中 NADPH 和MDA 含量及PTGS2 mRNA 水平均顯著降低（P＜0.05），線粒體形態(tài)恢復(fù)；CLP+SFN組與 CLP組相比，NADPH 和 MDA 含量及 PTGS2 mRNA 水平也顯著降低（P＜0.05），而與CLP+DFO組相比則無(wú)顯著差異（P＞0.05），線粒體大小和嵴結(jié)構(gòu)恢復(fù)，見(jiàn)圖3。

4 SFN對(duì)Nrf2和IL-6的影響

與Ctrl組相比，給予LPS 刺激后RAW264.7細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核中Nrf2 蛋白表達(dá)均降低，定位胞核的Nrf2 顯著減少；而在LPS 刺激時(shí)同時(shí)給予SFN，胞質(zhì)和胞核中Nrf2 蛋白表達(dá)均顯著增加，以胞核Nrf2 蛋白表達(dá)的增加尤為顯著，定位胞核的Nrf2 也顯著恢復(fù)，見(jiàn)圖4。與sham組相比，CLP組小鼠肝組織Nrf2蛋白表達(dá)有減少趨勢(shì)，而肝組織IL-6 mRNA 和血清IL-6水平升高（P＜0.05）；給予SFN 后，CLP+SFN組小鼠肝組織IL-6 mRNA 和血清IL-6 水平顯著降低，見(jiàn)圖5。

Figure 2. Effect of sulforaphane（SFN）on iron metabolism in liver tissue. A：the level of HAMP mRNA in liver tissue；B：the content of serum hepcidin；C：the expression of FPN1 protein in liver tissue；D：non-heme iron content in liver tissue. Mean±SD. n=4.*P＜0.05 vs sham group；#P＜0.05 v s CLP group.圖2 蘿卜硫素對(duì)肝組織鐵代謝的影響

Figure 3. Effects of sulforaphane（SFN）on ferroptosis. A：NADPH content；B：MDA content；C：the level of PTGS2 mRNA；D：morphological changes of mitochondria（scale bar=500 nm；black arrow：the shrinkage of mitochondria；yellow arrow：the disappearance of mitochondrial cristae）. Mean±SD. n=4.*P＜0.05 vs sham group；#P＜0.05 vs CLP group.圖3 蘿卜硫素對(duì)鐵死亡的影響

Figure 4. Effects of sulforaphane（SFN）on Nrf2 expression and location in RAW264.7 cells. A：the level of Nrf2 protein expression in cytoplasm and nucleus；B：immunofluorescence of Nrf2 protein in RAW264.7 cells（scale bar=10 μm）. Mean±SD. n=4.*P＜0.05 vs control（Ctrl）group；#P＜0.05 vs LPS group.圖4 蘿卜硫素對(duì)巨噬細(xì)胞Nrf2表達(dá)和細(xì)胞定位的影響

Figure 5. Effects of sulforaphane（SFN）on Nrf2 and IL-6 expression in CLP mice. A：the level of Nrf2 protein in liver tissue；B：the level of IL-6 mRNA in liver tissue；C：the serum IL-6 content. Mean±SD. n=4.*P＜0.05 vs sham group；#P＜0.05 vs CLP group.圖5 蘿卜硫素對(duì)肝組織Nrf2蛋白和IL-6 mRNA水平及血清IL-6含量的影響

討 論

本研究使用經(jīng)典的CLP 方法制備小鼠的膿毒癥模型，在證實(shí)CLP 可介導(dǎo)肝損傷并導(dǎo)致肝組織發(fā)生鐵死亡的前提下，證明Nrf2 激動(dòng)劑SFN 減輕CLP 小鼠肝組織的鐵死亡。這一過(guò)程伴隨有IL-6 含量的減少和鐵調(diào)素mRNA 及蛋白水平的降低。本研究還證明SFN可增加巨噬細(xì)胞Nrf2的表達(dá)和核定位。

肝臟是膿毒癥發(fā)生過(guò)程中較早且易被損傷的靶器官［17］。本研究結(jié)果顯示小鼠CLP組肝組織有明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，血清ALT 和AST 水平升高，證實(shí)小鼠CLP術(shù)后12 h即可出現(xiàn)肝結(jié)構(gòu)和功能損傷。

研究揭示膿毒癥與鐵代謝失調(diào)有關(guān)系［18］，膿毒癥時(shí)由于紅細(xì)胞破壞等因素使肝細(xì)胞鐵來(lái)源增多，而IL-6 的釋放又促進(jìn)肝細(xì)胞分泌的鐵調(diào)素合成增加，導(dǎo)致跨膜的鐵輸出蛋白FPN 內(nèi)化、降解，使肝細(xì)胞鐵輸出減少，共同導(dǎo)致肝細(xì)胞鐵的蓄積［14，19-21］。本研究顯示CLP 小鼠肝臟組織中非血紅素鐵水平異常升高，證實(shí)了肝細(xì)胞中出現(xiàn)了鐵的蓄積和超載，并伴隨肝組織IL-6、HAMP mRNA 及鐵調(diào)素水平升高，F(xiàn)PN1 蛋白表達(dá)降低，提示CLP 小鼠肝細(xì)胞的鐵超載也與IL-6/鐵調(diào)素/FPN1信號(hào)通路的變化有關(guān)。

細(xì)胞鐵超載通過(guò)芬頓反應(yīng)促進(jìn)脂質(zhì)過(guò)氧化物反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生鐵死亡［22］。Wei等［4］的研究證明了膿毒癥時(shí)鐵死亡參與了小鼠肝損傷的發(fā)生。本研究中，CLP 小鼠肝組 織中鐵死 亡 的各項(xiàng)指 標(biāo)［23］如NADPH 和 MDA 含量 及 PTGS2 mRNA 水平等均 增加，肝細(xì)胞線粒體皺縮和嵴減少，證明此時(shí)小鼠確實(shí)發(fā)生了肝細(xì)胞的鐵死亡。

Nrf2 是鐵死亡中的一種負(fù)調(diào)節(jié)因子［24］。姚鵬等［25］的研究顯示，Nrf2 與大鼠膿毒癥相關(guān)性腦病中海馬神經(jīng)細(xì)胞的鐵死亡有關(guān)，膿毒癥大鼠中的Nrf2蛋白量比正常組減少。在細(xì)胞和動(dòng)物水平的研究顯示，Nrf2 可抑制 IL-6 和 IL-1β 的轉(zhuǎn)錄［12］。本研究結(jié)果顯示，LPS 刺激的巨噬細(xì)胞胞質(zhì)和胞核的Nrf2 含量均降低，核定位明顯減少，可能是導(dǎo)致IL-6 含量增多的原因之一；而激活Nrf2 可通過(guò)抑制IL-6 介導(dǎo)的鐵調(diào)素激活，從而減輕鐵死亡。

SFN 是一種從十字花科植物中提取出來(lái)的有機(jī)硫化合物，具有抗炎、抗腫瘤及抗氧化作用。已有研究證明在不同類型的膿毒癥動(dòng)物模型制備之前、立即以及術(shù)后給予SFN，對(duì)神經(jīng)、心、肺和腎功能都有不同程度的保護(hù)作用，且能提高存活率［7，8，10，26］。已有研究提示SFN 可作為激動(dòng)劑上調(diào)Nrf2 的表達(dá)［27］。本研究首次證明，CLP 模型制備后立即給予0.5 mg/kg 的 SFN［8］可顯著增加被 LPS 下調(diào)的巨噬細(xì)胞 Nrf2的蛋白含量，恢復(fù)并增加其核定位；也能降低CLP 小鼠血清IL-6 水平，使肝組織HAMP基因的轉(zhuǎn)錄減少，鐵調(diào)素含量降低，F(xiàn)PN1 蛋白表達(dá)增加，小鼠肝組織的鐵超載和鐵死亡被部分抑制，肝功能指標(biāo)有改善。這些結(jié)果提示SFN 可以通過(guò)上調(diào)Nrf2 而改善CLP 誘導(dǎo)的小鼠肝組織鐵代謝，并保護(hù)肝功能。值得注意的是，本研究CLP 小鼠肝組織總的Nrf2 含量降低并不顯著，除了組織中包含多種細(xì)胞等影響，也提示此時(shí)IL-6 的增多還有其它的激活因素。但給予Nrf2 激動(dòng)劑SFN 后，IL-6 的mRNA 和蛋白水平均明顯降低，說(shuō)明激活Nrf2 對(duì)IL-6 具有明顯的抑制作用，并因此而減輕肝細(xì)胞鐵死亡。

綜上所述，本研究的結(jié)果初步證明，Nrf2 激活劑SFN 可減輕CLP 引起的小鼠肝組織鐵死亡，保護(hù)肝功能；其作用機(jī)制可能是通過(guò)降低CLP 小鼠IL-6 的含量，抑制鐵調(diào)素的作用，促進(jìn)肝細(xì)胞鐵轉(zhuǎn)運(yùn)。本研究為臨床膿毒癥肝損傷的防治提供了參考資料。