李玉立，江志杰，劉文杰，張光華

（北京市藥品檢驗(yàn)研究院·北京市疫苗檢驗(yàn)中心·國(guó)家藥品監(jiān)督管理局仿制藥研究與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室·中藥成分分析與生物評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102206）

無(wú)菌檢查法是針對(duì)無(wú)菌工藝產(chǎn)品和最終滅菌產(chǎn)品的無(wú)菌性而建立的檢查法，1936 年版《美國(guó)藥典》第十一章開始引用單個(gè)培養(yǎng)基的直接接種法進(jìn)行無(wú)菌檢查，1953年版《中國(guó)藥典》收載了“藥品的滅菌檢查法”［1］。鑒于《中國(guó)藥典》無(wú)菌檢查法與國(guó)際通用標(biāo)準(zhǔn)在檢查理念、培養(yǎng)體系、方法要求等諸多方面存在顯著差異，《中國(guó)藥典》于2015年版開始借鑒國(guó)外藥典先進(jìn)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，以新的控制理念為指導(dǎo)，在檢測(cè)范圍及環(huán)境要求、培養(yǎng)體系、方法適用性等方面作了較大修訂，逐步與國(guó)際通用標(biāo)準(zhǔn)一致［2］。2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》參考人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）協(xié)調(diào)案和相關(guān)國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合我國(guó)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)實(shí)際情況和技術(shù)進(jìn)步要求，進(jìn)一步細(xì)化了無(wú)菌檢查法的通用性和規(guī)范性要求，明確了環(huán)境監(jiān)控的范圍，修訂了培養(yǎng)基的保存和使用時(shí)限及無(wú)菌檢查法的關(guān)鍵操作步驟等［3-4］，從而使該版《中國(guó)藥典（四部）》的無(wú)菌檢查法［5］與ICH 協(xié)調(diào)案框架下的《美國(guó)藥典》《歐洲藥典》《英國(guó)藥典》《日本藥典》進(jìn)一步接軌。由于以上4 部國(guó)外藥典已通過(guò)ICH 完成協(xié)調(diào)，主要技術(shù)基本一致，因此，現(xiàn)僅以網(wǎng)絡(luò)最新（截至發(fā)稿時(shí)）版《美國(guó)藥典·國(guó)家處方集》（USP-NF2021）無(wú)菌檢查法所載內(nèi)容及要求為參考，并將2020年版《中國(guó)藥典（四部）》與之進(jìn)行比對(duì)，為相關(guān)從業(yè)人員無(wú)菌操作及質(zhì)量控制等工作提供借鑒。

1 USP-NF2021 無(wú)菌檢查法主要內(nèi)容

USP-NF2021 通則<71>無(wú)菌檢查法章節(jié)及主要內(nèi)容見表1，表中注1～注14 為與2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》存在差異的版塊，后續(xù)進(jìn)行詳細(xì)比對(duì)。

表1 USP-NF2021無(wú)菌檢查法主要內(nèi)容Tab.1 Main contents of sterility test methods in USP-NF2021

2 中美現(xiàn)行藥典比對(duì)

2.1 方法的差異

2020年版《中國(guó)藥典（四部）》與USP-NF2021無(wú)菌檢查法方法的差異見表2。

表2 中美現(xiàn)行藥典無(wú)菌檢查法方法差異Tab.2 Differences of sterility test methods between Chinese Pharmacopeia and United States Pharmacopeia

續(xù)表2 中美現(xiàn)行藥典無(wú)菌檢查法方法差異Continued Tab.2 Differences of sterility test methods between Chinese Pharmacopeia and United States Pharmacopeia

2.2 要求的差異

陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)：USP-NF2021 規(guī)定，在方法驗(yàn)證時(shí)進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)，常規(guī)檢驗(yàn)僅求陰性對(duì)照試驗(yàn)，未明確要求進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)；2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》要求每批次檢驗(yàn)時(shí)均需進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。USPNF2021 認(rèn)為，通過(guò)方法適用性試驗(yàn)即可確認(rèn)該產(chǎn)品無(wú)菌檢查方法符合要求，后續(xù)常規(guī)檢驗(yàn)中無(wú)須每批次進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照確認(rèn)，定期進(jìn)行確認(rèn)即可。2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》則規(guī)定，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行供試品的陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。通過(guò)對(duì)成品每次無(wú)菌檢驗(yàn)的陽(yáng)性試驗(yàn)的確認(rèn)，其作用相當(dāng)于一次現(xiàn)時(shí)的、小規(guī)模的培養(yǎng)基靈敏度檢查和方法適用性試驗(yàn)［1］，更有助于確認(rèn)試驗(yàn)條件的符合性和檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

方法適用性試驗(yàn)：USP - NF2021 要求，對(duì)于有抑菌性的供試品，沖洗不超過(guò)5 次，試驗(yàn)菌不生長(zhǎng)即認(rèn)為“不污染”，認(rèn)可供試品的抑菌性對(duì)試驗(yàn)菌的抑制作用。2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》則要求，對(duì)于有抑菌性的供試品，必須通過(guò)增加沖洗次數(shù)及加入中和劑等方法去除供試品的抑菌性，使對(duì)應(yīng)試驗(yàn)菌生長(zhǎng)。USP - NF2021 認(rèn)可供試品的抑菌性可抑制對(duì)應(yīng)試驗(yàn)菌，2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》則要求去除供試品的抑菌性以確保抑菌性對(duì)潛在其他敏感菌抑制，更注重全面的無(wú)菌狀態(tài)監(jiān)測(cè)。這種差異可能與國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥工業(yè)體系的成熟度相關(guān)，2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》的要求可以更全面地監(jiān)控產(chǎn)品真實(shí)無(wú)菌狀態(tài)。

小劑量注射劑無(wú)菌檢查［14］：USP - NF2021 不要求對(duì)小劑量注射劑進(jìn)行稀釋，而是直接進(jìn)行薄膜過(guò)濾培養(yǎng)。國(guó)內(nèi)對(duì)小劑量注射劑的無(wú)菌檢查均采用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液等進(jìn)行稀釋后進(jìn)行薄膜過(guò)濾培養(yǎng)。由于國(guó)外藥典常規(guī)檢驗(yàn)不進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照，每批樣品沖洗到2個(gè)薄膜上進(jìn)行培養(yǎng)，國(guó)內(nèi)每批樣品需進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)，每批樣品需沖洗到3個(gè)薄膜上進(jìn)行培養(yǎng)，為了確保每個(gè)薄膜樣品的一致性，需對(duì)小劑量注射劑進(jìn)行稀釋，以使3 個(gè)薄膜上的供試品具有較好的均一性，以確保陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

3 藥典無(wú)菌檢查法修訂建議

USP-NF2021與2020年版《中國(guó)藥典（四部）》的無(wú)菌檢查部分均未規(guī)定沖洗時(shí)的流速，基于長(zhǎng)期試驗(yàn)操作的經(jīng)驗(yàn)積累，過(guò)快的沖洗流速會(huì)損傷微生物，從而導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果不能反映供試品真實(shí)的無(wú)菌狀態(tài)。因此，建議未來(lái)修訂本國(guó)藥典時(shí)，增加對(duì)沖洗流速的相關(guān)要求，以更準(zhǔn)確地體現(xiàn)產(chǎn)品真實(shí)的無(wú)菌狀態(tài)。