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基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及動物實(shí)驗(yàn)探討補(bǔ)腎助孕方降低卵巢凋亡水平治療黃體功能不全的作用與機(jī)制

2022-04-26 00:48唐星冉周惠芳劉心媛楊曉田
中醫(yī)藥信息 2022年4期
關(guān)鍵詞:黃體孕酮靶點(diǎn)

唐星冉,周惠芳,劉心媛,楊曉田

(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,江蘇 南京 210046)

女性未避孕,性生活正常,與配偶同居1年而未孕者,稱為不孕癥[1]。隨著社會的發(fā)展,女性不孕癥的發(fā)病率逐年上升,被列為醫(yī)學(xué)界三大難治性疾病之一,黃體功能不全(luteal phase deficiency,LPD)是導(dǎo)致不孕癥的重要原因之一[2-4]。中醫(yī)并無“黃體功能不全”的病名,根據(jù)其臨床表現(xiàn)可歸為“月經(jīng)先期”“不孕癥”“胎漏”“胎動不安”等[1]。

補(bǔ)腎助孕方由淮山藥15 g,醋柴胡6 g,丹參10 g,菟絲子15 g,炒白芍10 g,山茱萸10 g等8味中藥組成,為周惠芳教授在國醫(yī)大師夏桂成的學(xué)術(shù)思想指導(dǎo)下,由經(jīng)驗(yàn)方進(jìn)一步凝練而成,治療腎虛肝郁所致的黃體功能不全性不孕癥、流產(chǎn)療效顯著,臨床總有效率達(dá)94.51%[5-6]。腎虛肝郁所致黃體功能不全臨床表現(xiàn)多具有“月經(jīng)先期”“痛經(jīng)”“腰膝酸軟”“心煩易怒”等癥。

課題組前期研究表明,補(bǔ)腎助孕方能夠通過調(diào)節(jié)垂體GnRH 受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)調(diào)節(jié)垂體促性腺激素的分泌水平;提高LPD 模型大鼠卵巢抗氧化能力,緩解卵巢氧化應(yīng)激壓力;促進(jìn)黃體毛細(xì)血管生成;顯著提高卵巢黃體細(xì)胞分泌E2、P 水平;改善子宮內(nèi)膜容受性等從而達(dá)到改善LPD 的目的[7-13]?;诖耍狙芯坎捎镁W(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法,對補(bǔ)腎助孕方治療LPD 的作用機(jī)制進(jìn)行預(yù)測,并采用動物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證部分靶點(diǎn)及信號通路,進(jìn)一步探究其作用機(jī)制。

BN(Brown Norway)大鼠是國際上公認(rèn)研究妊娠失敗和低生育力病因的獨(dú)特動物模型,其生殖功能障礙與黃體功能不全和循環(huán)孕酮水平低有關(guān)[14-16],因此本研究采用BN大鼠進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

SPF 級雌性BN 大鼠50 只,12 周齡,體質(zhì)量180~200 g,購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司,許可證號為SCXK(蘇2019-0005)。動物入室后飼養(yǎng)于SPF級屏障環(huán)境,使用許可證號為SYXK(蘇)2018-0049,動物自由飲水?dāng)z食,12 h/12 h晝夜循環(huán),室溫(23±3)℃,相對濕度40%~70%。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)已通過南京中醫(yī)藥大學(xué)動物倫理審核,批準(zhǔn)號為202005A040。

1.2 藥物

地屈孕酮(荷蘭蘇威制藥有限公司,規(guī)格10 mg/片,批號:362941)制成劑量為0.002 g/kg 的混懸液;補(bǔ)腎助孕方所用藥材經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室劉圣金副教授鑒定為正品,均符合2015年版《中華人民共和國藥典》的相關(guān)項(xiàng)要求,煎煮后使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將水提液分別濃縮至含生藥量為4.5、9.0、18.0 g/kg的補(bǔ)腎助孕方溶液,等效劑量為9.0 g/kg。

1.3 試劑

大鼠含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)內(nèi)參引物、大鼠含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶-7(cysteinyl aspartate specific proteinase-7,Caspase-7)內(nèi)參引物、大鼠含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶-9(cysteinyl aspartate specific proteinase-9,Caspase-9)內(nèi)參引物(批號:250109459);兔Bax 抗體、兔Bcl-2 抗體(英國Abcam 公司,批號分別為ab32503、ab196495);Total RNA Isolation Kit 組織總RNA 提取試劑盒、Master Mix(南京諾唯贊生物科技有限公司,批號分別為L/N 7E530C1、Q712-02/03);DEPC 水(上海翊圣生物科技有限公司);RIPA 裂解液(上海碧云天生物科技有限公司)。

1.4 儀器

Infinite M200 PRO 型微孔板檢測儀(瑞士Tecan 公司);MM400 型混合球磨儀(德國Retsch 公司);Quant Studio 7Flex 型實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Realtime PCR)儀(美國Thermo 公司);高速冷凍離心機(jī)(德國Eppendorf 公司);96 孔PCR 反應(yīng)板(美國Bio-Rad公司);超純水系統(tǒng)(美國Millipore公司)。

2 方法

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

2.1.1 補(bǔ)腎助孕方靶點(diǎn)、LPD 靶點(diǎn)、藥物與疾病潛在靶點(diǎn)預(yù)測

利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫及文獻(xiàn)檢索,收集補(bǔ)腎助孕方各個藥物活性成分。根據(jù)ADME 原則,篩選條件為口服生物利用度(oral bioavailability,OB)≥30%、類藥性(drug likeness,DL)≥0.18。數(shù)據(jù)庫未收錄藥物,文獻(xiàn)檢索后獲取其有效成分。運(yùn)用UniProt 數(shù)據(jù)庫將靶點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)化,限定物種為人源,作為補(bǔ)腎助孕方活性成分靶點(diǎn)。以“dysmenorrhea”“advanced menstruation”“sore and pain in loin and legs”“restlessness and irritability”為關(guān)鍵詞,分別在GeneCards、OMIM、DrugBank 3 個數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,重復(fù)靶點(diǎn)保留1個,建立LPD 靶點(diǎn)庫。借助Venny網(wǎng)站將補(bǔ)腎助孕方活性成分靶點(diǎn)與LPD 靶點(diǎn)取交集,得到共同靶點(diǎn),導(dǎo)入Cytoscape 軟件,構(gòu)建“補(bǔ)腎助孕方-活性成分-潛在靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。

2.1.2 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建、關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選

將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 數(shù)據(jù)庫,設(shè)定物種為人源,設(shè)置最小交互值為“high confidence >0.9”,其余保持默認(rèn),得到關(guān)鍵靶點(diǎn)的蛋白質(zhì)互作(protein-protein interaction,PPI)信息。保存TSV 文件,使用Cytoscape軟件中cytoHubba插件篩選治療的核心靶點(diǎn)。

2.1.3 GO、KEGG通路富集分析

將共同靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID 數(shù)據(jù)庫,物種選擇為人源,其余保持默認(rèn),進(jìn)行富集分析。結(jié)合課題組前期研究結(jié)果,選取Apoptosis信號通路進(jìn)行驗(yàn)證。

2.1.4 分子對接

通過TCMSP數(shù)據(jù)庫及PubChem數(shù)據(jù)庫得到補(bǔ)腎助孕方成分的3D結(jié)構(gòu)信息,同時通過PDB數(shù)據(jù)庫下載靶蛋白的3D結(jié)構(gòu),使用Autodock 軟件對小分子和靶蛋白進(jìn)行加氫、去電荷,借助PyMOL軟件插件找到對接活性位點(diǎn),即可在Autodock Vina 軟件將處理后的成分與靶蛋白進(jìn)行分子對接,最后通過PyMOL 軟件將對接結(jié)果進(jìn)行可視化。

2.2 動物實(shí)驗(yàn)

2.2.1 分組

將BN 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d 后,于每日上午9 時進(jìn)行大鼠陰道涂片,連續(xù)觀察2~3 個動情周期,了解大鼠動情周期變化情況,使用隨機(jī)數(shù)表法將大鼠分為模型組、地屈孕酮組和補(bǔ)腎助孕方低、中、高劑量組等5組,每組10只。

2.2.2 給藥

每日上午9 時對各組大鼠進(jìn)行陰道涂片,確認(rèn)大鼠進(jìn)入動情后期后,分別灌服地屈孕酮、中藥直至大鼠進(jìn)入下一個動情前期,持續(xù)給藥3 個動情周期。參考徐叔云主編《實(shí)驗(yàn)藥理方法學(xué)》,60 kg 成人與200 g 大鼠按體表面積折算的等效劑量比值為6.25,補(bǔ)腎助孕方臨床用量為86 g,補(bǔ)腎助孕方低、中、高劑量分別給予補(bǔ)腎助孕方溶液4.5、9.0、18.0 g/kg 灌胃,中劑量組為成人的等效劑量,低、高劑量組分別為成人等效劑量的0.5 倍和2 倍。地屈孕酮組給予地屈孕酮溶液0.002 g/kg灌胃,模型組給予等體積雙蒸水灌胃。

2.2.3 取材

各組大鼠末次給藥后禁食不禁水,予10%水合氯醛溶液3.5 mL/kg腹腔注射麻醉,腹主動脈采血后斷頸處死,迅速取出卵巢,液氮速凍后置-80 ℃冰箱備測。

2.3 觀察指標(biāo)

2.3.1 實(shí)時熒光定量PCR法檢測大鼠卵巢Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9 mRNA表達(dá)水平

使用諾唯贊試劑盒提取BN 大鼠卵巢組織總RNA,測定RNA 樣品濃度及純度,逆轉(zhuǎn)錄為c-DNA,置于-20 ℃冰箱。PubMed 基因數(shù)據(jù)庫中檢索大鼠Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9 mRNA 引 物序列,由上海生工公司設(shè)計(jì)、合成引物,序列見表1。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)為內(nèi)參,相同基因設(shè)3 個復(fù)孔、4 次平行實(shí)驗(yàn),得到各擴(kuò)增反應(yīng)的CT 值,使用QuantStudio 6&7 PCR System 及GraphPad Prism 8.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,采用2-ΔΔCt進(jìn)行相對定量。

表1 PCR引物序列

2.3.2 免疫組化檢測大鼠卵巢Bcl-2、Bax表達(dá)

大鼠卵巢組織切片,脫蠟、水化、抗原修復(fù),滴加3% H2O2室溫孵育10 min,山羊血清封閉,37 ℃孵育10 min,滴加一抗(1∶100),4 ℃孵育過夜,5 min PBS 沖洗3 次,二抗孵育30 min,滴加適量辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液(S-A/HRP),37 ℃孵育20 min,顯色劑顯色,封片后在顯微鏡下觀察。應(yīng)用Image pro-Plus圖像分析軟件測定積分光密度。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism 8.0 軟件進(jìn)行分析。定量資料以±s表示,多組間比較如符合正態(tài)分布且方差齊采用單因素方差(One-way ANOVA)分析,若不符合正態(tài)分布或方差不齊使用非參數(shù)檢驗(yàn)(Nonparametric tests),P <0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 補(bǔ)腎助孕方活性成分及靶點(diǎn)的篩選結(jié)果

根據(jù)TCMSP 數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果及文獻(xiàn)檢索,篩選后得到996個活性成分,去重后得到補(bǔ)腎助孕方146個成分,見表2。運(yùn)用Uniprot 標(biāo)準(zhǔn)化得到232 個潛在靶點(diǎn),從OMIM,DrugBank 及GeneCards3 個數(shù)據(jù)庫中共得到3 195 個疾病靶點(diǎn),將疾病與藥物交集靶點(diǎn)數(shù)為158個,見圖1。利用Cytoscape軟件構(gòu)建活性成分與靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò),見圖2。

圖1 補(bǔ)腎助孕方和黃體功能不全交集靶點(diǎn)韋恩圖

圖2 “補(bǔ)腎助孕方-活性成分-潛在靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)

表2 補(bǔ)腎助孕方活性成分信息

藥物靶點(diǎn)居前5 位的活性成分為槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、木樨草素、丹參酮Ⅱa,推測可能是治療LPD的核心活性成分。見表3。

表3 補(bǔ)腎助孕方活性成分及靶點(diǎn)數(shù)

3.2 富集分析

以“P ≤0.01”和“bejamini ≤0.001”作為篩選條件,得到GO 條目136 條,選取生物過程(biological process,BP)、細(xì)胞組分(cell composition,CC)、分子功能(molecular fuction,MF)的前10 條通路進(jìn)行展示,見圖3。BP 主要包括RNA 聚合酶Ⅱ啟動子轉(zhuǎn)錄的正向調(diào)控、凋亡過程的負(fù)調(diào)控、基因表達(dá)的正向調(diào)控、缺乏配體時的外部凋亡信號通路和對雌二醇反應(yīng)等。CC 主要包括細(xì)胞外空隙、膜筏、核漿、胞液和質(zhì)膜等。MF 主要包括酶結(jié)合位點(diǎn)、蛋白結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、配體門控離子通道活性和RNA 聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子活性等。說明補(bǔ)腎助孕方可能通過促進(jìn)細(xì)胞增殖、調(diào)控細(xì)胞凋亡、調(diào)控配體對雌二醇的反應(yīng)等治療LPD[13]。

圖3 GO功能富集分析

在KEGG通路富集分析結(jié)果經(jīng)篩選后共得到70條通路,對前20條信號通路進(jìn)行可視化處理,見圖4。其中縱坐標(biāo)代表富集的通路名稱,橫坐標(biāo)為每條通路上的基因數(shù)占共有靶點(diǎn)的比例。包括癌癥相關(guān)信號通路(pathways in cancer、Endometrial cancer)、HIF-1信號通路(HIF-1 signaling pathway)、PI3K/Akt信號通路(PI3K/Akt signaling pathway)、FoxO 信號通路(FoxO signaling pathway)、MAPK 信號通路(MAPK signaling pathway)、凋亡相關(guān)信號通路(apoptosis)、p53 信號通路(p53 signaling pathway)、NF-κb 信號通路(NF-kappa B signaling pathway)及細(xì)胞周期(cell cycle)等。表明補(bǔ)腎助孕方化學(xué)成分主要分布于多條代謝通路,通過它們之間的相互協(xié)調(diào)作用,發(fā)揮抗氧化應(yīng)激、抗凋亡、調(diào)控細(xì)胞周期等作用來治療LPD。KEGG凋亡信號通路見圖5。

圖4 KEGG通路富集分析

圖5 KEGG凋亡通路

3.3 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選

利用STRING 數(shù)據(jù)庫對補(bǔ)腎助孕方治療黃體功能不全(LPD)相關(guān)的158 個靶點(diǎn)進(jìn)行PPI 分析,見圖6。將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape 中進(jìn)行拓?fù)浞治?,?jì)算出度值(degree),介數(shù)中心性(betweenness centrality,BC),接近中心性(closeness cebtrality,CC),其中degree 中位數(shù)為9,BC 的中位數(shù)為0.01,CC 的中位數(shù)為0.38,篩選degree >9、且BC >0.01、且CC >0.38的靶點(diǎn)有36個,可能是補(bǔ)腎助孕方治療LPD 的關(guān)鍵蛋白,挑選前10位導(dǎo)入Cytoscape,繪制核心靶點(diǎn)圖,見圖7。其中多個蛋白,如JUN、STAT3、TP53、AKT1、MAPK1、TNF、FOS、MAPK14等與凋亡密切相關(guān)。

圖7 補(bǔ)腎助孕方治療黃體功能不全的核心靶點(diǎn)

3.4 分子對接

將5 個關(guān)鍵活性成分與凋亡相關(guān)靶蛋白進(jìn)行分子對接。一般以結(jié)合能≤-5.0 kcal/mol 作為篩選標(biāo)準(zhǔn)[17-20],各化合物與蛋白均能較好地結(jié)合。利用PyMOL 軟件選取關(guān)鍵活性成分和核心靶點(diǎn)蛋白結(jié)合最強(qiáng)的化合物進(jìn)行3D圖展示,見圖8。

圖8 分子對接模式圖

3.5 對BN大鼠卵巢 Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9 mRNA表達(dá)水平的影響

PCR 檢測結(jié)果表明,與模型組相比,地屈孕酮組Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9 mRNA 表達(dá)水平顯著下調(diào)(P<0.01);補(bǔ)腎助孕方低劑量組Caspase-3 mRNA 表達(dá)水平下調(diào)(P<0.05);補(bǔ)腎助孕方中劑量組Caspase-3、Caspase-9 mRNA 表達(dá)水平顯著下調(diào)(P<0.01);補(bǔ)腎助孕方高劑量組Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9 mRNA表達(dá)水平下調(diào)(P<0.01,P<0.05)。見表5。

表5 補(bǔ)腎助孕方對各組大鼠卵巢Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9 mRNA表達(dá)水平的影響(±s,n=3)

表5 補(bǔ)腎助孕方對各組大鼠卵巢Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9 mRNA表達(dá)水平的影響(±s,n=3)

注:與模型組比較,1)P <0.05,2)P <0.01。

組別模型組地屈孕酮組低劑量組中劑量組高劑量組劑量/g/kg—0.002 4.5 9.0 18.0 Caspase-3 1 0.30±0.192)0.38±0.351)0.24±0.142)0.21±0.172)Caspase-7 1 0.45±0.192)0.87±0.17 0.78±0.03 0.46±0.112)Caspase-9 1 0.47±0.232)0.83±0.01 0.56±0.102)0.70±0.011)

3.6 對BN大鼠卵巢Bcl-2、Bax表達(dá)水平的影響

免疫組化結(jié)果表明,與模型組相比,地屈孕酮組和補(bǔ)腎助孕方低、中、高劑量組Bcl-2 表達(dá)水平顯著上調(diào)(P<0.01);地屈孕酮組、補(bǔ)腎助孕方中劑量組Bax表達(dá)水平顯著下調(diào)(P<0.01)。見表6和圖9。

圖9 各組大鼠卵巢Bax/Bcl-2免疫組化圖(比例尺:50 μm)

表6 補(bǔ)腎助孕方對各組大鼠卵巢Bax、Bcl-2表達(dá)水平的影響(±s,n=3)

表6 補(bǔ)腎助孕方對各組大鼠卵巢Bax、Bcl-2表達(dá)水平的影響(±s,n=3)

注:與模型組比較,2)P <0.01。

組別模型組地屈孕酮組低劑量組中劑量組高劑量組劑量/g/kg—0.002 4.5 9.0 18.0 Bcl-2 0.002 0±0.000 7 0.011 0±0.004 12)0.002 6±0.000 32)0.010 3±0.002 92)0.007 2±0.001 62)Bax 0.013 3±0.0005 0.001 1±0.000 22)0.002 6±0.000 6 0.002 3±0.000 32)0.001 5±0.000 3

4 討論

黃體(corpus luteum,CL)是雌性哺乳動物卵巢中的暫時性分泌組織,由卵泡排卵后的泡膜細(xì)胞和顆粒細(xì)胞分化而成,其主要功能是分泌孕酮以維持妊娠及調(diào)節(jié)發(fā)情周期。研究顯示,黃體的結(jié)構(gòu)以自噬和凋亡兩種方式退化,凋亡是人類溶黃體的重要特征之一,形態(tài)學(xué)研究提示自噬促進(jìn)了黃體的溶解[21-23]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘發(fā)的未折疊反應(yīng)參與山羊黃體維持和退化過程,山羊晚期黃體中存在黃體細(xì)胞的凋亡[24]。部分學(xué)者認(rèn)為Fas 配體和Fas 系統(tǒng)是黃體細(xì)胞凋亡的主要機(jī)制[25]。黃體細(xì)胞凋亡是黃體退化的一個重要環(huán)節(jié),細(xì)胞凋亡的調(diào)控伴隨著黃體的維持和退化進(jìn)程[26]。因此,黃體功能不全的發(fā)生可能與黃體細(xì)胞過早凋亡相關(guān)。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究結(jié)果顯示,槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、木樨草素、丹參酮Ⅱa 等可能是治療LPD 的核心成分,分子對接結(jié)果也證明核心成分與凋亡相關(guān)靶點(diǎn)有良好的結(jié)合能力。槲皮素可抑制各種腫瘤細(xì)胞的增殖,與凋亡調(diào)節(jié)因子Bax 和Bcl-2 有關(guān),能調(diào)節(jié)Caspase[27-28];山柰酚呈現(xiàn)雌激素樣活性,其介導(dǎo)凋亡的主要途徑為改變細(xì)胞周期,同時山柰酚是最有效的活性氧自由基清除劑[29-31];β-谷甾醇可促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖,抑制凋亡,通過影響雌激素受體信號通路使GnRH分泌減少的狀況得到緩解,發(fā)揮抗衰老作用[32-33];木樨草素能夠顯著增加超氧化物歧化酶(SOD)活性,具有明顯的抗氧化作用,同時具有抗脂代謝紊亂及抗細(xì)胞凋亡作用[34];丹參酮具有抗氧化應(yīng)激、抑制細(xì)胞凋亡作用[35-37]。

同時,KEGG 通路富集結(jié)果提示,補(bǔ)腎助孕方治療LPD 的潛在治療靶點(diǎn)主要集中在PI3K/Akt、MAPK、凋亡、p53 等信號通路。其中PI3K/Akt、MAPK、p53 等均與凋亡信號通路相關(guān)。核心靶點(diǎn)中,JUN、STAT3、TP53、AKT1、MAPK1、MAPK14等多個蛋白靶點(diǎn)與凋亡密切相關(guān)。故本研究選取凋亡信號通路作為研究對象。

免疫組化結(jié)果表明,補(bǔ)腎助孕方各劑量組Bcl-2表達(dá)水平上調(diào);補(bǔ)腎助孕方中劑量組Bax 表達(dá)水平顯著下調(diào)。PCR 結(jié)果表明,補(bǔ)腎助孕方各劑量組Caspase-3 mRNA表達(dá)水平不同程度下調(diào);補(bǔ)腎助孕方高劑量組Caspase-7 mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào);補(bǔ)腎助孕方中、高劑量組Caspase-9 mRNA表達(dá)水平不同程度下調(diào)。表明補(bǔ)腎助孕方可能可以降低卵巢凋亡水平。

綜上所述,本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析及動物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎助孕方可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡信號通路,調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡信號通路上靶蛋白表達(dá),從而達(dá)到治療LPD的作用。

但本研究仍存在不足之處,篩選得到的成分僅考慮其活性,并未考慮到煎煮過程中可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生新物質(zhì)及活性成分入血情況。同時,分子對接及動物實(shí)驗(yàn)僅驗(yàn)證部分關(guān)鍵靶點(diǎn),在此基礎(chǔ)上,可進(jìn)一步通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其他靶點(diǎn)作用情況,從而更全面、深入、科學(xué)闡釋補(bǔ)腎助孕方作用機(jī)制。

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鳶尾素(Irisin):運(yùn)動誘導(dǎo)骨骼肌自噬的新靶點(diǎn)
基于系統(tǒng)藥理學(xué)探討莪術(shù)醇調(diào)控鐵死亡和細(xì)胞自噬的作用機(jī)制
維生素D受體或是糖尿病治療的新靶點(diǎn)
孕酮低可致不孕或流產(chǎn),它有3 種表現(xiàn)
孕酮聯(lián)合CA125對異位妊娠藥物保守治療結(jié)局的預(yù)測價值
黃體破裂 是一種什么???
警惕:小小“黃體”能要命!
你被“孕酮低”套路了嗎?
求“好孕”要重視孕酮值