趙紅霞，王應強，姚志龍，龔秀芳，王長峰

（隴東學院農林科技學院，甘肅慶陽 745000）

蘋果（Malus domesticaBorkh.）是世界四大水果之一，在世界各地廣泛栽培[1]。因其品種繁多并含有豐富的營養(yǎng)物質而受到廣大消費者的青睞，被稱為“水果之王”。有研究證明，蘋果果實中的多酚類物質在抗氧化、抗腫瘤、預防和治療心血管疾病等方面具有積極作用。目前，國內主栽蘋果品種結構單一，‘富士’一枝獨秀，比例過大，國內育成的品種占比甚少；除此之外，國內蘋果生產以紅色為主，黃色品種栽植較少。目前生產上的黃色品種主要有‘金冠’和‘王林’，品種結構比例失調。但是‘金冠’果面易形成銹斑，導致果皮粗糙，嚴重影響商品品質，成為制約其發(fā)展的主要因素?！趿帧麄€大，豐產，極耐貯藏，但果皮厚韌、果點大，成為其品種推廣和應用的主要障礙[2]。

‘瑞雪’蘋果是西北農林科技大學以‘富士’芽變優(yōu)系‘秦富1 號’為母本，‘粉紅女士’為父本雜交選育而成的黃色晚熟品種[3]，具有豐產、大果、味美等特點，富含蘋果酸、礦物質和鈣，品質優(yōu)于其他同類型的蘋果，深受消費者喜歡[4]?！鹧O果是繼‘秦冠’蘋果以來在果樹育種領域的又一重大成果，目前研究主要集中在引種[5]、栽培[6]、與其他蘋果香氣差異性[7-8]及套袋對果實品質的影響[9-11]等方面，而針對采收期及不同采收期的果實在貯藏期間品質變化規(guī)律的報道較少。

合適的采收期關乎蘋果的產量、品質及貯藏特性，本研究擬選用不同采收期（盛花期后155、161、168、175 d采摘）的‘瑞雪’蘋果經過150 d 的低溫貯藏，通過對其果實外觀指標（硬度、單果質量和失重率等）和各項生物化學指標（可溶性固形物含量、有機酸含量、維生素C 含量、過氧化物酶活性、細胞膜滲透率和淀粉圈染色圖譜等）的分析了解果實貯藏期間的品質性狀變化情況，探討‘瑞雪’蘋果的最佳采收期及貯藏特性，為生產者提供理論支持指導。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

‘瑞雪’蘋果采摘于甘肅省慶陽市居立農業(yè)公司蘋果種植基地；鹽酸、鄰苯三酚、鐵氰化鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉等試劑，均為分析純,北京索萊寶科技有限公司。

1.1.2 儀器與設備

H0059 型低溫冰箱，杭州綠博儀器有限公司；GT-ATC-水果糖度計，上海力辰邦西儀器科技有限公司；7200 型紫外可見分光光度計，尤尼柯（上海）儀器有限公司；TDL-40B 低速臺式離心機，梅特勒-托利多國際貿易（上海）有限公司；GY-1 指針式水果硬度計，北京佳航博創(chuàng)科技有限公司；DDSJ-308F 型電導率儀，上海儀分科學儀器有限公司。

1.2 試驗方法

試驗樣品‘瑞雪’蘋果分別在盛花期后155、161、168、175d 采摘，每次采摘后的蘋果立即運回實驗室在0 ℃預冷處理。處理后的蘋果，挑選大小相近、著色均勻、無病蟲害和機械損傷的蘋果，按照6～8 個蘋果為一組，隨機分成11 組，裝入聚乙烯塑料袋中，低溫（0 ℃）貯藏。貯藏期間每15 d 取一組測定指標，實驗重復兩次。

1.3 測定指標與方法

（1）硬度

用指針式硬度計測定。

（2）出汁率

通過榨取蘋果果肉果汁后稱量法測定計算。

（3）可溶性固形物含量

用手持糖度計進行測定。

（4）失重率

參考謝季云等[12]的方法進行測定。

（5）有機酸含量

參照GB/T 5009.157—2016 中的酸堿滴定法測定。稱取3 g 果肉研磨成勻漿后移至50 mL 容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，靜置30 min 后，提取濾液為待測液，用0.1 mol/L的NaOH 溶液滴定至溶液初顯粉色且30 s內不褪色為終點，計算可滴定酸含量（以蘋果酸計）。

（6）維生素C 含量

參照2,6-二氯靛酚滴定法[13]進行測定。

（7）細胞膜滲透率

蘋果去皮，制成厚3～4 mm、大小均勻的組織圓片，準確稱取2 g，放入盛有20 mL 蒸餾水的試管中，置于真空干燥器中抽真空10 min，壓力控制在0.04～0.06 MPa，抽出細胞間隙空氣。緩慢放入空氣，水滲入細胞間隙，組織圓片變成透明狀后間歇振蕩30 min，插入電導儀測定外滲液的電導值。測定之后，將試管放入水浴鍋中煮沸5min殺死組織。冷卻至室溫后，再次測定外滲液的電導值。根據公式（1）計算細胞膜滲透率。

式中，L1、L2分別為組織殺死前后外滲液的電導值，μs/cm。

（8）過氧化物酶活性

運用愈創(chuàng)木酚法[14]進行測定，根據式（2）計算得出。

式中，ΔA470為反應時間內吸光值的變化；W為植物樣品鮮質量，g；V為提取酶液的總體積，mL；POD 活性以每分鐘內A470變化0.01 為1 個過氧化物酶活性單位（U）。Vt為所用酶液的體積，mL；t為反應時間，2 min。

（9）淀粉圈染色圖譜

將不同成熟度蘋果沿果實中部橫切，將果實切面浸入深5 mm 的碘-碘化鉀溶液中2 min，取出后拍照，選取典型的淀粉圈染色圖譜分析[15]。

1.4 數(shù)據處理

數(shù)據運用Microsoft Office Excel 2010 統(tǒng)計實驗結果，結果表示為均值±SD，均值之間的顯著性采用Duncan’s Multiple Range test 進行分析，當P＜0.05 時認為均值間存在統(tǒng)計學上的顯著差異。

2 結果與分析

2.1 不同采收期對‘瑞雪’蘋果低溫貯藏期間果實硬度的影響

果實硬度過低會導致果實貯藏性和商用品質降低[16]；而在果實的后熟過程中，果實軟化由果膠水解導致的細胞間聚合的喪失而引起[17]。圖1 顯示了不同采收期‘瑞雪’蘋果在低溫貯藏期間果實硬度的變化。由圖可知，不同采收期的‘瑞雪’蘋果硬度在低溫貯藏期間均呈顯著下降趨勢（P＜0.05），在同一貯藏時間，采收期越晚的果實其硬度越低；盛花期后155、161、168、175 d 采收的蘋果，貯藏期間其硬度分別由采摘初期的11.0、10.5、9.5、9.1 kg/cm2降為7.4、7.1、6.2、5.8 kg/cm2，降幅分別為32.7%、32.4%、34.4%和36.3%。

圖1 不同采收期對‘瑞雪’蘋果果實硬度的影響Fig.1 Effect of different harvest time on fruit hardness of ‘Ruixue’ apple

2.2 不同采收期對‘瑞雪’蘋果低溫貯藏期間出汁率的影響

圖2 顯示了不同采收期‘瑞雪’蘋果在低溫貯藏期間果實出汁率的變化。由圖2 可知，隨著貯藏時間的延長，各個采收期采收的果實出汁率均呈下降趨勢，并且采收期越晚，果實的出汁率較高。盛花期后155 d 采摘的蘋果果實最初出汁率為74.8%，隨著貯藏時間的延長，出汁率逐漸下降至47.7%；盛花期后161 d 采摘的蘋果果實出汁率由最初為75.8%逐漸下降至48.9%；盛花期后168 d和175 d 采摘的蘋果果實出汁率分別由最初的78.5%和79.4%下降至44.3%和44.5%；4 種不同時期采摘的蘋果果實的出汁率分別下降了36.2%、35.4%、43.6%和46.4%?？梢?，采收期越晚，出汁率下降幅度越大。

圖2 不同采收期對‘瑞雪’蘋果果實出汁率的影響Fig.2 Effect of different harvest time on juice yield of ‘Ruixue’ apple

2.3 不同采收期對‘瑞雪’蘋果低溫貯藏期間失重率的影響

果實水分含量是反映果實品質的重要指標，大量失水將會導致果實皺縮，直接影響果實外觀品質和口感。據調查，導致果實失重的主要原因有水分喪失及果實呼吸消耗[12]。圖3 顯示了不同采收期‘瑞雪’蘋果在低溫貯藏期間果實失重率的變化，由圖可知，隨著貯藏時間的延長，各個采收期采收的果實失重率均隨著貯藏時間的延長而增加，在同一貯藏期，盛花期后155 d 和161 d采摘的果實失重率總體大于盛花期后168 d 和175 d 采摘的果實；在貯藏的前90 d，盛花期后168 d 采摘的果實失重率大于盛花期后175 d 采摘的，在貯藏后期失重率呈現(xiàn)出相反的趨勢。盛花期后155 d 采摘的果實在整個貯藏期間失重率最高，其中在貯藏150 d 時達到最大值（3.77%），而盛花期后168 d 采摘的果實在貯藏末期失重率最低，為2.43%，為盛花期后155 d 后采摘果實的64.4%，結果表明，采摘期越早的蘋果，果實失重率越高，后期采收的蘋果在貯藏過程中失重率較低。

圖3 不同采收期對‘瑞雪’蘋果果實失重率的影響Fig.3 Effect of different harvest time on weight loss rate of ‘Ruixue’ apple

2.4 不同采收期對‘瑞雪’蘋果低溫貯藏期間可溶性固形物含量的影響

圖4 顯示了不同采收期‘瑞雪’蘋果在低溫貯藏期間果實可溶性固形物含量的變化。由圖可知，隨著貯藏時間的延長，各個采收期采收的果實可溶性固形物含量先呈上升趨勢，當達到最大峰值之后開始下降；在同一貯藏期，采收期越晚的蘋果在貯藏前期可溶性固形物含量越高，并且其達到最大值時所需的貯藏時間越短。盛花期后155 d 和161 d 采摘的果實在貯藏90 d 時，可溶性固形物含量達到最大值，分別為13.8%和14.6%。盛花期后168 d 和175 d 采摘的果實分別在貯藏75 d 和60 d 時可溶性固形物含量達到最大值，分別為14.7%和15%。此后，隨著貯藏期的延長，盛花期后168 d 采摘的蘋果具有最高的可溶性固形物含量，盛花期后155 d 采摘的蘋果具有最低的可溶性固形物含量。

圖4 不同采收期對‘瑞雪’蘋果果實可溶性固形物含量的影響Fig.4 Effect of different harvest time on soluble solid content of ‘Ruixue’ apple

2.5 不同采收期對‘瑞雪’蘋果低溫貯藏期間有機酸含量的影響

早期采收的果實有機酸含量都比后期采收的含量高。蘋果中所含的有機酸為蘋果酸，在貯藏期間蘋果酸的消耗明顯增加，主要是因為蘋果酸和糖作為主要的呼吸底物而被消耗[18]。圖5（見下頁）顯示了不同采收期‘瑞雪’蘋果在低溫貯藏期間果實有機酸含量的變化。由圖可知，各個采收期的蘋果有機酸含量隨著貯藏時間的延長，均呈下降趨勢。盛花期后155 d 采收的蘋果，最初有機酸含量最高，為0.48%，盛花期后175 d 采收的蘋果有機酸含量最低，為0.25%。盛花期后155 d 采摘的果實在貯藏15 d 時有機酸含量未發(fā)生變化，15 d 后持續(xù)下降，且下降幅度較大；盛花期后161 d 采收的蘋果貯藏60 d時，其有機酸含量稍微增大，60 d 后出現(xiàn)下降。盛花期后168 d 采收的蘋果在貯藏15 d 時，有機酸含量較剛采收時有所升高，含量為0.31%，之后至試驗結束，呈平緩下降趨勢。盛花期后161 d 采收的蘋果有機酸含量自開始貯藏至150 d，其含量都呈平緩下降趨勢。

圖5 不同采收期對‘瑞雪’蘋果果實有機酸含量的影響Fig.5 Effect of different harvest time on organic acid content of ‘Ruixue’apple

2.6 不同采收期對‘瑞雪’蘋果低溫貯藏期間維生素C 含量的影響

圖6 顯示了不同采收期‘瑞雪’蘋果在低溫貯藏期間果實維生素C 含量的變化。由圖可知，隨著貯藏時間的延長，各個采收期采收的果實維生素C 含量均呈下降趨勢。盛花期后175 d 采摘的果實維生素C 含量最高，為9.96 mg/100 g，盛花期后155 d 采摘的果實維生素C 含量最低，為9.84 mg/100 g。隨著貯藏時間的延長，維生素C的含量逐漸下降，其中在貯藏150 d 后，盛花期后175 d采摘的果實維生素C 含量達到5.50 mg/100 g，下降了42.8%，而盛花期后155 d、168 d 和175 d 采摘的果實果實維生素C 含量分別達到4.76、4.70、4.40 mg/100 g，下降率分別為51.6%、52.7%和55.8%。

圖6 不同采收期對‘瑞雪’蘋果果實維生素C 含量的影響Fig.6 Effect of different harvest time on vitamin C content of ‘Ruixue’apple

2.7 不同采收期對‘瑞雪’蘋果低溫貯藏期間細胞膜滲透率的影響

果蔬采后伴隨著后熟衰老過程，保持細胞膜結構完整性能夠增加果實的耐貯性，常用細胞膜滲透率表示細胞在貯藏過程中完整性的變化[17]。圖7 顯示了不同采收期‘瑞雪’蘋果在低溫貯藏期間果實細胞膜滲透率的變化。由圖可知，各個采收期的蘋果果實細胞膜滲透率均隨貯藏時間的延長，呈現(xiàn)上升趨勢。盛花期后155 d 采收的蘋果細胞膜滲透率由最初的73.3%上升至94.5%。盛花期后161 d 采收的蘋果在貯藏30 d 時，其細胞膜滲透率變化較小，為64.3%，30 d 后呈快速上升趨勢。盛花期后175 d 采收的蘋果在貯藏105 d 之前變化幅度較小，105 d 后上升較快，表明果實已基本處于完全衰老的狀態(tài)。不同采收期采收的蘋果果實在低溫貯藏150 d 后，細胞膜滲透率均達到90%以上，其中盛花期后168 d 和175 d 果實細胞膜滲透率達到98%以上，說明果實處于完全衰老狀態(tài)。

圖7 不同采收期對‘瑞雪’蘋果果實細胞膜滲透率的影響Fig.7 Effect of different harvest time on membrance permeability of ‘Ruixue’ apple

2.8 不同采收期對‘瑞雪’蘋果低溫貯藏期間過氧化物酶活性的影響

各個采收期的蘋果剛采收時過氧化物酶活性較低，隨著貯藏時間的延長，過氧化物酶的活性都呈上升趨勢。貯藏前期果實的過氧化物酶活性小幅上升，是果實后熟所導致的，貯藏后期明顯的酶活性高峰代表果實的衰老[19]。圖8 顯示了不同采收期‘瑞雪’蘋果在低溫貯藏期間果實過氧化物酶活性的變化，由圖可知，盛花期后168 d 采收的蘋果在貯藏30 d 和120 d 時酶活性達到最大值，分別為7.41 U/(g·min)和10.1 U/(g·min)，盛花期后161 d 采收的果實在貯藏過程中其過氧化物酶活性值較大，說明較晚采收的果實更易衰老。

圖8 不同采收期對‘瑞雪’蘋果果實過氧化物酶活性的影響Fig.8 Effect of different harvest time on fruit peroxidase activity of ‘Ruixue’ apple

2.9 不同采收期對‘瑞雪’蘋果低溫貯藏期間淀粉圈染色圖譜的影響

當蘋果表面顏色為黑色時，有淀粉存在，當顏色為蘋果果肉本身的顏色時，表明淀粉已被水解，淀粉含量越少表明果實成熟度越高[15]。圖9 分別為盛花期后155、161、168、175 d 采收的‘瑞雪’蘋果貯藏150 d 過程中果實切面經碘液染色后的淀粉圈染色圖譜。由圖9 可知，蘋果在剛采收時其淀粉含量最多，隨著貯藏時間的延長，淀粉逐漸被水解，果肉染色的顏色逐漸變淺，貯藏150 d 以后，染色顏色基本為果肉本身顏色，表明蘋果果實內部已經完全成熟。盛花期后155、161 d 采收的蘋果在貯藏120 d 后果實內部基本完全成熟，盛花期后168 d 采收的蘋果在貯藏90 d 以后果實基本成熟，盛花期后175 d 采收的蘋果在貯藏60 d 后果實基本達到完全成熟狀態(tài)。

圖9 不同采收期‘瑞雪’蘋果果實在貯藏期間的淀粉圈染色圖譜Fig.9 Starch staining of ‘Ruixue’ apple at different harvest stages during storage

3 結論

本研究結果表明，采收期和貯藏時間對‘瑞雪’蘋果果實的貯藏品質影響顯著。隨著貯藏時間的延長，各個采收期‘瑞雪’蘋果果實的部分指標呈下降趨勢，導致貯藏品質降低，如果實硬度、有機酸、出汁率和VC 含量都降低，失重率增加，這個變化與細胞膜滲透率變大和過氧化物酶活性逐漸升高密切相關。但貯藏中期可溶性固形物含量達最大值，預示著貯藏品質的提高，并伴隨著淀粉圈的逐漸消失，表明‘瑞雪’蘋果果實經歷了一個后熟過程。不同采收期的蘋果呈現(xiàn)出不同的成熟時間，盛花期后155 d 和161 d 采收的蘋果分別在貯藏120 d 后果實內部基本完全成熟，盛花期后168 d 和175 d 采收的蘋果分別在貯藏90 d 和60 d 后果實基本達到成熟狀態(tài)。本研究可為‘瑞雪’蘋果的貯藏保鮮提供理論參考。