曹 明，曹麗敏，曹小燕，李象欽

(1 廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所，廣西桂林 541006；2 衡陽師范學(xué)院 生命科學(xué)與環(huán)境學(xué)院，湖南衡陽 421008；3 南岳山區(qū)生物資源保護與利用湖南省重點實驗室，湖南衡陽 421008)

吳茱萸屬(EuodiaJ. R. Forster et G. Forster)是蕓香科(Rutaceae)中種類較多的一個類群，其中不少種類有重要的藥用和經(jīng)濟價值。吳茱萸屬約150種，主要分布在亞洲、非洲東部以及大洋洲。中國有吳茱萸屬植物約20種5變種，除東北北部和西北少數(shù)省區(qū)不產(chǎn)外，各地均有分布[1]。

吳茱萸屬自建立以來，屬的范疇一直存在廣義吳茱萸屬(Euodias.l.)和狹義吳茱萸屬 (Euodias.s.)之爭。廣義觀點認(rèn)為吳茱萸屬既包括吳茱萸屬和四數(shù)花屬(TetradiumLour.)全部種類，還包括蜜茱萸屬(MelicopeJ. R. Forster et G. Forster)的少數(shù)種類[1-3]。狹義觀點認(rèn)為應(yīng)將吳茱萸屬、四數(shù)花屬和蜜茱萸屬獨立成屬，狹義吳茱萸屬僅包括分布于新幾內(nèi)亞、澳大利亞東北部向東至薩摩亞和紐埃的6個種[4-7]。此外，在種類劃分上，由于前人的分類工作有些是在缺少文獻、模式標(biāo)本、野外考察情況下完成的，種類劃分依據(jù)的性狀有連續(xù)交叉，難以區(qū)分，因此還存在一些疑難種待鑒定。

葉結(jié)構(gòu)特征分析最早被古植物學(xué)家應(yīng)用于葉化石研究，此后被廣泛應(yīng)用于現(xiàn)代植物葉的研究[8-13]。但到目前為止，尚未見有關(guān)國產(chǎn)吳茱萸屬葉結(jié)構(gòu)特征的研究報道。為此，本研究采納廣義吳茱萸屬觀點[1-3]，即在廣義吳茱萸屬框架內(nèi)采用葉結(jié)構(gòu)分析方法，對國產(chǎn)吳茱萸屬18種3變種的葉結(jié)構(gòu)特征進行了綜合分析，旨在通過尋找、發(fā)現(xiàn)有系統(tǒng)分類學(xué)意義的葉結(jié)構(gòu)性狀，為探討廣義吳茱萸屬植物的系統(tǒng)關(guān)系及種類區(qū)分提供資料。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

實驗材料全部采自中國科學(xué)院華南植物園標(biāo)本館(IBSC)和廣西植物研究所標(biāo)本館(IBK)，所用葉片均為臘葉標(biāo)本成熟葉片(表1)。

表1 實驗材料及憑證標(biāo)本

1.2 實驗方法

透明葉制作方法參考李浩敏[8]和謝淦等[14]：(1)5%氫氧化鈉溶液浸泡葉片，每2天換1次溶液，直至溶液無茶色出現(xiàn)，清水漂洗；(2)2%乙酸中和殘留堿，清水洗凈；(3)5%次氯酸鈉(NaHClO2)漂白脫色至白色或無色，清水漂洗；(4)250%水合氯醛[CCl3CH(OH)2]透明24 h；(5)用50%、65%、75%、85%、95%和100%梯度酒精脫水，1%番紅染色24 h；(6)葉片置于無水乙醇和二甲苯混合液(1∶1)中去除多余染料；(7)中性樹膠封片，Nikon SMZ1500體視顯微鏡下觀察拍照。

葉表面特征術(shù)語參照王宇飛等[15]，葉形態(tài)和結(jié)構(gòu)描述的術(shù)語主要參照謝淦等[14]和Hickey等[16-17]。

2 觀察結(jié)果

2.1 吳茱萸屬基本的葉形態(tài)特征

吳茱萸屬植物的葉及小葉均對生，單小葉、三小葉或奇數(shù)狀復(fù)葉；小葉的大小從30 cm×12 cm到4 cm×2 cm不等；小葉長橢圓形(圖版Ⅰ，1)、倒卵形(圖版Ⅰ，2)或卵狀披針形(圖版Ⅰ，3)，葉邊淺波狀(圖版Ⅰ，4)或全緣(圖版Ⅰ，5)，葉齒具腺體或無；葉面常有油點分布；葉基部寬度對稱或不對稱，先端漸尖(圖版Ⅰ，6)或鈍尖(圖版Ⅰ，3)。

圖版Ⅰ 吳茱萸屬葉結(jié)構(gòu)特征(標(biāo)尺=1 cm)

2.2 吳茱萸屬重要的葉結(jié)構(gòu)特征描述

本研究主要觀察了國產(chǎn)吳茱萸屬以下葉結(jié)構(gòu)特征：粗二級脈結(jié)構(gòu)(secondary vein)、三級脈結(jié)構(gòu)(intercostal tertiary vein fabric)、四級脈結(jié)構(gòu)(quaternary vein fabric)、五級脈結(jié)構(gòu)(quinternary vein fabric)、脈間區(qū)(areolation)和游離端小脈(freely ending veinlets)等6個參考值較大的葉結(jié)構(gòu)特征(表2)。

表2 吳茱萸屬的葉結(jié)構(gòu)特征

粗二級脈結(jié)構(gòu)：起源于主脈，從主脈直接分出來比主脈細(xì)的葉脈叫二級脈。二級脈均不達(dá)葉緣，有花環(huán)狀弓形脈和簡單弓形脈兩種類型?；ōh(huán)狀弓形脈：分支形成多組環(huán)狀結(jié)構(gòu)，環(huán)狀結(jié)構(gòu)上附有次級葉脈構(gòu)成的環(huán)(圖版Ⅱ，1)；簡單弓形脈：形成顯著弓形或環(huán)狀(圖版Ⅱ，2、3)。

三級脈結(jié)構(gòu)：比二級脈細(xì)的次級脈。除弱貫穿結(jié)構(gòu)外，其余均為不規(guī)則網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，三級脈以不同角度連結(jié)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。有自由分支(圖版Ⅲ，9)和不規(guī)則網(wǎng)狀(圖版Ⅱ， 4、5)2種類型。

四級脈結(jié)構(gòu)：由三級脈分支出來的更細(xì)一級的脈。有自由分支(圖版Ⅱ，4、5)和不規(guī)則網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)(圖版Ⅱ，6; 圖版Ⅲ，1-6)2種類型。

五級脈結(jié)構(gòu)：由四級脈分支出來的更細(xì)一級的脈。有不規(guī)則網(wǎng)狀(圖版Ⅱ，7-9)、自由分支(圖版Ⅱ，10)2種。前者五級脈與以他葉脈相連構(gòu)成多邊形且葉脈相交形成的角度高度變化，形成不規(guī)則網(wǎng)狀五級脈；后者五級脈自由分支并成為葉上呈現(xiàn)最細(xì)的脈序。

脈間區(qū)：脈間區(qū)是圍成葉肉組織的最小單元，從發(fā)育差到發(fā)育中等不等，發(fā)育中等的脈間區(qū)大小形狀不規(guī)則但邊比發(fā)育差的少(圖版Ⅱ，11；圖版Ⅲ，7、8)，發(fā)育差的脈間區(qū)由多條邊圍成不規(guī)則的形狀大小不一(圖版Ⅱ，12; 圖版Ⅲ，9、10)。

游離端小脈：除無腺吳萸(圖版Ⅱ，7)游離端小脈不分支或一個分支外，廣義吳茱萸屬其他種均表現(xiàn)為不均等分支(圖版Ⅲ，11、12)。不同種間游離端小脈分支性狀、結(jié)構(gòu)和數(shù)量上存在差異，可用作種間區(qū)別特征。

3 討 論

3.1 葉結(jié)構(gòu)特征的系統(tǒng)學(xué)意義

廣義吳茱萸屬(Euodias. l.)最早由J. R. Forster和G. Forster在1775年建立，其范疇幾經(jīng)變動。黃成就[1,3]采用廣義吳茱萸屬觀點修訂了國產(chǎn)吳茱萸屬。1981年，Hartley[4]將產(chǎn)于東亞的具羽狀復(fù)葉類群中部分種類從廣義吳茱萸屬中移出，歸并到四數(shù)花屬；2001年，Hartley[5]又將單葉和三葉的類群從廣義吳茱萸屬中移出，歸并到蜜茱萸屬，狹義吳茱萸屬僅包括分布于新幾內(nèi)亞、澳大利亞的6個種，這樣中國就不存在狹義吳茱萸屬植物。Poon等[18]的分子系統(tǒng)學(xué)研究結(jié)果表明廣義吳茱萸屬是一個多系的類群，并且支持Hartley[4-5]的分類處理。葉結(jié)構(gòu)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)廣義吳茱萸屬的二級脈有簡單弓形脈、花環(huán)狀弓形脈，三級脈有自由分支、不規(guī)則網(wǎng)狀，四級脈有自由分支、不規(guī)則網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)兩種類型，五級脈有不規(guī)則網(wǎng)狀、自由分支兩種。葉特征有不同程度的分化，表明廣義吳茱萸屬是一個多系的類群，葉結(jié)構(gòu)特征支持Hartley[4-5]、Poon等[18]的分類處理。此外，廣義吳茱萸屬的葉結(jié)構(gòu)有二級脈、三級脈、四級脈和五級脈等，依據(jù)Hickey[16-17]的觀點，一級、二級葉脈是較低等植物類群的特征葉脈，三級、四級及以上是較高等植物類群的特征葉脈。因此，從葉脈特征推斷，廣義吳茱萸屬可能是蕓香科中較高等的類群，至少是比花椒屬高等的類群[10]。

國產(chǎn)吳茱萸屬分組檢索表

囿于實驗材料的數(shù)量及地域，不能憑葉結(jié)構(gòu)特征對國產(chǎn)吳茱萸屬植物進行深入、系統(tǒng)全面的討論。不過，吳茱萸屬植物葉結(jié)構(gòu)性狀在不同類群間既有共性又有差異，依據(jù)葉結(jié)構(gòu)特征、結(jié)合外部形態(tài)學(xué)特征，做出國產(chǎn)吳茱萸屬的分組檢索表。

3.2 葉結(jié)構(gòu)特征在疑難種和近緣種鑒定方面的意義

目前吳茱萸植物分類鑒定中應(yīng)用最多的性狀是葉、花、果實的宏觀形態(tài)，但是有些宏觀性狀容易受環(huán)境的影響而發(fā)生比較大的變化，我們發(fā)現(xiàn)吳茱萸屬葉結(jié)構(gòu)特征可以為更準(zhǔn)確地鑒定一些疑難種和混淆種提供佐證。例如，云南吳萸和臭辣吳萸是1對近緣種，在形態(tài)上云南吳萸的葉軸、小葉柄及葉背脈均被長毛，臭辣吳萸僅葉背中脈兩側(cè)或脈腋被毛；在葉結(jié)構(gòu)特征上，云南吳萸的三級脈是不規(guī)則網(wǎng)狀(圖版Ⅱ，8)，而臭辣吳萸的三級脈是自由分支(圖版Ⅱ，9)，通過葉結(jié)構(gòu)特征可以比較容易將兩者區(qū)分開來。再如，原變種單葉吳萸與變種毛單葉吳萸之間的外部形態(tài)上比較相似，只是以前者的枝葉無毛、油點多而細(xì)小，后者的嫩枝、葉柄葉背密背毛及油點較密而且大相互區(qū)別；葉結(jié)構(gòu)特征上，原變種單葉吳萸的三級脈是自由分支(圖版Ⅲ，9)，變種毛單葉吳萸之間的三級脈是不規(guī)則網(wǎng)狀(圖版Ⅲ，10)，據(jù)此可以比較容易將兩者區(qū)分開來。

圖版Ⅱ 吳茱萸屬葉結(jié)構(gòu)特征[標(biāo)尺=500 μm (8)，其余=2 000 μm]

圖版Ⅲ 吳茱萸屬葉結(jié)構(gòu)特征[標(biāo)尺=1 000 μm (6,12)，其余= 2 000 μm]

上述例子表明吳茱萸屬種間葉結(jié)構(gòu)特征存在一些差異，這些差異可以為區(qū)分鑒定一些疑難種和近緣種提供幫助，不過吳茱萸屬種間葉結(jié)構(gòu)特征差異是一個連續(xù)穩(wěn)定的變異過程，葉結(jié)構(gòu)性狀并不足以區(qū)分中國產(chǎn)吳茱萸屬的所有種類，因此尚不能單憑葉結(jié)構(gòu)特征做出國產(chǎn)吳茱萸屬植物分種檢索表。

致謝:中國科學(xué)院華南植物園標(biāo)本館(IBSC)，廣西植物研究所標(biāo)本館(IBK)為實驗材料采集提供了便利，廣西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院梁士楚教授提供了觀察和照相的幫助，謹(jǐn)致謝意。