李 露，包欣怡，陳智勇

（湖南農(nóng)業(yè)大學生物科學技術學院，長沙 410128）

0 引言

非洲紫羅蘭(Saintpantiaionantha)又名非洲堇，為苦苣苔科非洲紫羅蘭屬多年生常綠草本[1-2]。因花色艷麗、品種繁多、具有極高的觀賞價值，有“室內(nèi)花卉皇后”的美譽[3]。隨著非洲紫羅蘭市場占有率不斷提高，種苗需求也在日益增長。種苗的繁殖有扦插和組培快繁兩種方法[4]。采用組培快繁技術進行非洲紫羅蘭快速繁殖，可縮短繁育周期，獲得大量成株并保持其優(yōu)良性狀，是解決該矛盾的有效途徑之一[5]。

非洲紫羅蘭的組培快繁是一項技術性強，生產(chǎn)環(huán)節(jié)多的工作，降低成本是提高優(yōu)質(zhì)非洲紫羅蘭組培苗生產(chǎn)經(jīng)濟效益的重要因素。本實驗在前人的基礎上，優(yōu)選非洲紫羅蘭組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基組合，為其在組培過程中培養(yǎng)基配比提供參考與幫助。在一定程度上降低了生產(chǎn)成本，進一步提高非洲紫羅蘭組培快繁的效益，同時希望為其工業(yè)化育苗奠定技術基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗材料為新鮮非洲紫羅蘭(Saintpantia ionantha)帶芽莖段。

1.2 主要試劑

蔗糖、瓊脂、多種無機鹽、植物生長調(diào)節(jié)劑：6-BA（6-芐基腺嘌呤），NAA（α-萘乙酸），IBA（吲哚丁酸），IAA（吲哚乙酸），75%酒精，0.1%升汞，氫氧化鈉，鹽酸等。

1.3 培養(yǎng)基

（1）基本培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基，CC培養(yǎng)基，N6培養(yǎng)基，B5培養(yǎng)基。

以CC、N6、MS、B5作為基本培養(yǎng)基，將其無機大量、有機物、無機微量作為3個不同的影響因子，通過應用正交試驗設計，得到16個基本培養(yǎng)基組合（見表1）。

表1 16個基本培養(yǎng)基組合

（2）側(cè)芽誘導的最佳激素濃度配比。

如表2所示，設置16組。

表2 16組激素濃度配比

（3）側(cè)芽生根的最佳激素濃度配比

設置NAA、INA、IBA這3種激素的不同濃度配比，得到9種生根培養(yǎng)基配方（見表3）。

表3 非洲紫羅蘭側(cè)芽誘導激素配比

1.4 研究方法

（1）接種

以非洲紫羅蘭的帶腋芽莖段為外植體，先用洗滌劑清洗，洗凈外植體上的污漬，再用流水沖洗30～40 min后，用75%的酒精消毒30 s，然后用0.1%的升汞消毒6～10 min，再用無菌水沖洗4～5次。接種前先用無菌濾紙輕輕吸干材料表面的水分，然后無菌操作臺下用小刀將帶葉芽莖段切割成0.5 cm左右大小，分別接種在指定培養(yǎng)基上，每種培養(yǎng)基接種8瓶，每瓶接種2個。

（2）培養(yǎng)

將已接種的材料的三角瓶放入恒溫培養(yǎng)室，室內(nèi)溫度控制在26℃，光照強度1000～1500 Lx，光照時間12 h/天。接種后，每天觀察污染情況及成活狀況，并及時做好數(shù)據(jù)記錄。

2 結果與分析

2.1 非洲紫羅蘭組織培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基組合

30天后，在16種培養(yǎng)基中，對每種培養(yǎng)基選擇長勢較好的6瓶對側(cè)芽進行計數(shù)，并觀察其生長勢，只選擇已經(jīng)生長成型的側(cè)芽計數(shù)，僅為芽點不計數(shù)，舍去每種培養(yǎng)基中每瓶新生側(cè)芽個數(shù)的最大值與最小值求平均數(shù)，記錄結果見表4。

由表4可知，在以CC、N6、MS、B5等作為基本培養(yǎng)基，將其無機大量、有機物、無機微量作為3個不同的影響因子進行組合的16種培養(yǎng)基中，平均側(cè)芽增殖長勢最差的為6號培養(yǎng)基，即B5大量+B5微量+CC有機的組合，該培養(yǎng)基中的非洲紫羅蘭增殖倍數(shù)最低，為2.5倍，同時新生側(cè)芽顏色淡綠，葉片稀疏卷曲，許多未展開；平均側(cè)芽增殖長勢最好的為15號培養(yǎng)基，增殖倍數(shù)為6.13倍，即MS大量+CC微量+B5有機的培養(yǎng)基組合，該培養(yǎng)基中的非洲紫羅蘭不僅側(cè)芽增殖倍數(shù)最高，而且新生側(cè)芽顏色鮮綠，叢生芽緊密包裹聚集在一起，葉片舒展。

表4 不同培養(yǎng)基誘導側(cè)芽生長統(tǒng)計表

2.2 非洲紫羅蘭組織培養(yǎng)誘導側(cè)芽的最佳激素濃度配比

30天后，對每種培養(yǎng)基所誘導側(cè)芽進行計數(shù)，并觀察其生長勢，記錄結果見表5。

實驗結果表明：非洲紫羅蘭在16號培養(yǎng)基(6-BA3.0 mg/L+NAA1.0 mg/L)中側(cè)芽生長狀況最差，增殖倍數(shù)為1.6倍，新生側(cè)芽發(fā)黃，葉片稀少，并且出現(xiàn)稍許褐化現(xiàn)象；在5號培養(yǎng)基(6-BA1.0 mg/L)中生長情況最好，增殖倍數(shù)為6.6倍，新生側(cè)芽鮮綠，葉片濃密。

由表5可以看出，基本培養(yǎng)基相同時，非洲紫羅蘭在6-BA濃度在0.5～1.0 mg/L范圍時，側(cè)芽生長情況最好，新生側(cè)芽鮮綠，葉片濃密而平展；當6-BA濃度超過2.0 mg/L后，隨著濃度的增加，非洲紫羅蘭的長勢越差，并且葉片顏色逐漸變淡，甚至發(fā)黃。當NAA濃度小于0.1 mg/L時，對芽的增殖效果較好，超過0.5 mg/L后，濃度越高，非洲紫羅蘭的增殖效果越差，甚至濃度過高容易出現(xiàn)褐化現(xiàn)象。

表5 不同激素濃度誘導側(cè)芽生長統(tǒng)計表

2.3 非洲紫羅蘭組織培養(yǎng)側(cè)芽生根的最佳激素及濃度

60天后對9種不同激素濃度配比的培養(yǎng)基中的非洲紫羅蘭的生根數(shù)量進行統(tǒng)計，計算生根率并觀察生根情況，記錄結果見表6。

表6 不同激素種類與濃度誘導側(cè)芽生根統(tǒng)計表

根據(jù)結果可知，非洲紫羅蘭在1/2MS附加NAA 0.1～0.5 mg/L或IBA0.1 mg/L的培養(yǎng)基中生根率較高，根數(shù)多且生長旺，植株長勢良好，顏色鮮綠，葉片舒展，但在NAA濃度為0.5 mg/L時有稍許褐化現(xiàn)象。IAA在濃度0.1～0.5 mg/L也可誘導側(cè)芽生根，但生根率不高，并隨著濃度的升高而降低。

3 討論

非洲紫羅蘭現(xiàn)廣泛栽培于世界各地，已經(jīng)成為一種重要的室內(nèi)盆栽花卉，開花時可用來布置房間，不開花時也可以作為小型觀葉植物?？焖俜敝撤侵拮狭_蘭是提高經(jīng)濟效益的有效方法，采用組織培養(yǎng)方式繁殖，方法簡單經(jīng)濟，繁殖速度快，繁殖系數(shù)可達到6.625，大大降低了其生產(chǎn)成本，提高了經(jīng)濟效益。因此，組織培養(yǎng)作為非洲紫羅蘭的一項重要繁殖途徑，掌握其最佳繁殖條件就顯得尤為重要了。

在非洲紫羅蘭側(cè)芽誘導試驗中，以非洲紫羅蘭帶側(cè)芽的莖段為外植體，最佳基本培養(yǎng)基組合為MS大量+CC微量+B5有機+3%蔗糖+0.4%瓊脂。在這4種基本培養(yǎng)基中，MS大量較其他3種培養(yǎng)基銨、鎂和硝酸鹽的含量最高，同時含有較高的鉀和磷，這說明非洲紫羅蘭的生長過程中需要大量的氮和鎂，同時需要較多的鉀和磷，其中，營養(yǎng)素磷在植物生長過程中對芽的分化有很大的促進作用；CC微量較其他3種培養(yǎng)基鈣、錳、銅、鋅、鉬、氯等微量元素的含量都比較適中，說明非洲紫羅蘭的組培生長過程中，對這幾種微量元素的添加不易過高和過低；B5有機較其他3種培養(yǎng)基含有相對較多的VB1和VB2，同時不含甘氨酸，這說明，在組培過程中，非洲紫羅蘭生長所需的VB1和VB2應適中，同時不需要添加甘氨酸，甘氨酸對其生長可能會有一定的抑制作用[6-9]。

在以6-BA和NAA為激素進行濃度組合誘導側(cè)芽實驗中，發(fā)現(xiàn)側(cè)芽的生長在MS大量+CC微量+B5有機+0.5～1.0 mg/L 6-BA+0～0.1 mg/L NAA+3%蔗糖+0.4%瓊脂的培養(yǎng)基中，增殖效果最好。6-BA作為細胞分裂素，其主要生理作用是促進細胞分裂，促進非分化組織分化和側(cè)芽的生長，抑制或促進莖、葉的伸長和生長，也可以誘導愈傷組織發(fā)生[10]。其濃度在0.5～1.0 mg/L時可以很好的促進非洲紫羅蘭側(cè)芽的增殖，超過2.0 mg/L后，濃度越高，植株生長越差。NAA是植物生長素，能促進細胞分裂與擴大[11]，當培養(yǎng)基中加入少于0.1 mg/L的NAA時，非洲紫羅蘭側(cè)芽增殖效果最好，當NAA濃度大于0.5 mg/L后，濃度越高，側(cè)芽增殖越慢，并且隨著實驗的延長，極容易出現(xiàn)褐化現(xiàn)象[12]。

實驗同時使用不同濃度的NAA、IAA、IBA對非洲紫羅蘭的側(cè)芽進行誘導生根，這3種植物生長調(diào)節(jié)劑都能誘導植物生成不定根，是常用的生根劑。IAA可促進細胞伸長和細胞分化，IBA是生長素類似物，可促進細胞分裂，活性比IAA高[13]，在強光下會緩慢分解。在對非洲紫羅蘭不定根的誘導下發(fā)現(xiàn)，NAA誘導的不定根特點為多而短，但植株易褐化；IAA所誘導的不定根較長而粗，濃度高于0.5 mg/L后不定根數(shù)量較少，不易觀察；IBA所誘導的不定根較長而直，但根較細。不定根誘導效果最好為1/2MS+0.1 mg/L NAA+3%蔗糖+0.4%瓊脂和1/2MS+0.1 mg/L IAA+3%蔗糖+0.4%瓊脂的培養(yǎng)基。

4 結論

本實驗表明：以非洲紫羅蘭的帶腋芽莖段為外植體進行組織培養(yǎng)，最佳培養(yǎng)基組合為：MS大量+CC微量+B5有機+3%蔗糖+0.4%瓊脂；側(cè)芽的生長在MS大量+CC微量+B5有機+0.5～1.0 mg/L 6-BA+0～0.1 mg/L NAA+3%蔗糖+0.4%瓊脂的培養(yǎng)基中，增殖效果最好，新生側(cè)芽鮮綠，葉片濃密而平展；誘導生根適宜培養(yǎng)基為1/2MS附加0.1 mg/L NAA或0.1 mg/L IAA，生根率可達95%以上，根生長勢旺，同時植株生長顏色鮮艷、健壯。