屈 云，賀蘇皖，朱成林，趙燕英，陳 娟，劉 驥，刀筱芳，唐俊妮*

（1 西南民族大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 成都 610041 2 青藏高原動物遺傳資源保護(hù)與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 成都 610041）

細(xì)菌的應(yīng)激反應(yīng)是指細(xì)菌對外界環(huán)境脅迫表現(xiàn)出的各種特定的、高度調(diào)節(jié)的適應(yīng)性反應(yīng)[1]。這些反應(yīng)?？梢员Ｗo(hù)細(xì)菌不受環(huán)境脅迫影響，還可能改變細(xì)菌，特別是致病菌對抗生素的耐受性[2]。從食品安全的角度來看，傳統(tǒng)食品保鮮和滅菌方法主要依賴于對微生物施加物理或化學(xué)壓力來限制其生長和存活，常通過加熱和冷凍，調(diào)節(jié)酸、堿值，鹽濃度脅迫，清潔劑和消毒劑等的使用對食物攜帶的微生物施加壓力。通常這一系列壓力脅迫不一定起到對微生物完全的致死作用，亞致死條件可能會誘導(dǎo)細(xì)菌發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致其抵抗力或抗性增加[3]。不斷暴發(fā)的由致病菌引起的食品安全事件，引起人們對這些環(huán)境脅迫下微生物的亞致死、失活以及相關(guān)脅迫耐受的重視[4]。

作為食品污染的主要致病菌之一的金黃色葡萄球菌（StapHylococcus aureus，縮寫S.aureus），特別是被稱為“超級細(xì)菌”的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 （Methicillin-resistant StapHylococcus aureus，MRSA），可引起人和動物各種急、慢性感染[5]。2017年世界衛(wèi)生組織將其列為對人類健康最具威脅的12 種細(xì)菌之一[6]。金黃色葡萄球菌的毒力與抗性均促進(jìn)其在全球范圍內(nèi)的流行與感染。MRSA 對甲氧西林耐藥性取決于獲得性遺傳決定因子mecA，其編碼青霉素結(jié)合蛋白PBP2a，導(dǎo)致MRSA 幾乎對所有β-內(nèi)酰胺抗生素耐受。即使在高濃度抗生素的存在下，這些外來PBP 的表達(dá)也能發(fā)揮作用，使得細(xì)胞能夠繼續(xù)完成細(xì)胞壁的生物合成[7]。值得關(guān)注的是，這些獲得性因子具有在細(xì)菌中誘導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)的能力，在應(yīng)激反應(yīng)下，MRSA 菌株mecA 的轉(zhuǎn)錄和PBP2a 的產(chǎn)生增加[8-9]。本文研究兩株不同基因背景MRSA 菌株，在不同脅迫條件下生長及其對菌株抗性和毒力基因表達(dá)的影響，以期為食品加工過程不同環(huán)境中菌株生長及毒力和耐藥性變化提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）培養(yǎng)基、7.5%氯化鈉肉湯、Baird-Parker 瓊脂培養(yǎng)基、胰酪胨大豆肉湯（TSB）培養(yǎng)基，青島高科園海博生物技術(shù)有限公司；1%亞碲酸鉀卵黃增菌液，青島日水生物技術(shù)有限公司；過氧乙酸（15%），成都科龍化工試劑廠；次氯酸鈉（有效氯5.5%），成都科隆化學(xué)品有限公司；新潔爾滅（有效氯5%），南昌白云藥業(yè)有限公司；氫氧化鈉、濃鹽酸、氯化鈉，成都市科龍化工試劑廠；Spin Column Bacteria Total RNA Purification Kit 試劑盒、2X SG Fast qPCR Master Mix 試劑盒、M-MuLV First Strand cDNA Synthesis Kit 試劑盒，生工生物工程股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

CFX96 熒光定量PCR、BioSpec-nano230V 核酸測定，美國Bio-Rad；5840R 型冷凍離心機(jī)，德國Eppendorf 公司；MOF-4086S 低溫冰箱，日本三洋公司；HZQ-F160 全溫振蕩培養(yǎng)箱，江蘇太倉市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；隔水式恒溫培養(yǎng)箱 GHP-908，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；潔凈通風(fēng)工作臺，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司。

1.3 菌株來源

以本實(shí)驗(yàn)室在2017年9月-2018年6月分離于成都市豬肉樣本中的MRSA6 與MRSA18 菌株作為研究對象，MRSA6 攜帶的背景基因?yàn)椋耗退?基 因（tetM、ermB、mecA、norA、aac6’/apH2’’），耐消毒劑基因（qacG），腸毒素基因（sei、seo、seu、sen、sem）；MRSA18 攜帶的背景基因?yàn)椋耗退幓颍╡rmB、mecA、norA、aac6’/apH2’’），不攜帶耐消毒劑基因和腸毒素基因。所有試驗(yàn)參考菌株均由本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.4 方法

1.4.1 最小抑菌濃度（MIC）的測定 將純化的菌株接種到TSB 培養(yǎng)基中，37 ℃振蕩培養(yǎng)18～24 h，采用文獻(xiàn)報(bào)道方法提取菌株DNA[10]，對菌株攜帶的背景基因情況進(jìn)一步進(jìn)行PCR 擴(kuò)增確認(rèn)。兩株MRSA 菌株對3 種不同消毒劑的最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）測定參考美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）[11]指南，采用營養(yǎng)肉湯稀釋法配制菌懸液。具體操作為：取過夜培養(yǎng)后濃度為1×108CFU/mL 的菌液50 μL 分別加入到4.5 mL 的TSB 的試管中，另加入450 μL 稀釋后消毒劑。設(shè)置陽性對照組為50 μL 菌液＋4.5 mL TSB＋450 μL 去離子水；陰性對照組為：去離子水50 μL＋4.5 mL TSB＋450 μL 過氧乙酸。37 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)18～24 h。根據(jù)消毒劑推薦使用濃度用去離子水配置消毒劑濃度梯度分別為過氧乙酸：0.0038%，0.0075%，0.015%，0.03%；次氯酸鈉（按有效氯計(jì)算）：0.0425%，0.085%，0.17%，0.34%；新潔爾滅（按有效氯計(jì)算）：0.0000625%，0.000125%，0.00025%，0.0005%，0.001%的受試液。結(jié)果判定：陽性對照組由清澈透明變渾濁，陰性對照依舊清澈，試驗(yàn)組中無菌生長對應(yīng)的最低消毒劑濃度即為受試MRSA 菌株對該種消毒劑的MIC。

挑取單菌落于Baird-Parker 瓊脂平板上純化培養(yǎng)后接入TSB 培養(yǎng)液中37 ℃，150 r/min 過夜培養(yǎng)后再次以1%比例接種到新的TSB 培養(yǎng)液中，37 ℃恒溫培養(yǎng)留作原始菌液備用。

1.4.2 不同脅迫條件對菌株生長的影響 模擬食品加工過程中常遇到的脅迫環(huán)境，觀察MRSA 的生長變化趨勢。

高低溫脅迫：取30 支試管設(shè)置5 個試驗(yàn)組，每組設(shè)置3 個平行，分別加入MRSA6 與MRSA18菌液各2 mL，一組置于4 ℃冰箱中，低溫脅迫24 h。另4 組分別放入45，50，55，60 ℃水浴處理30 min，同時取原始菌液2 mL 作為對照，平板稀釋涂布，測定活菌數(shù)。

酸堿脅迫：同樣設(shè)置5 個試驗(yàn)組，每組設(shè)置3個平行，分別加入MRSA6 與MRSA18 菌液各2 mL，6 000 r/min 離心5 min，去上清液，每組分別加入使用HCl 或NaOH 將pH 值調(diào)為2，4，6，8，10的TSB 培養(yǎng)基，混勻，室溫靜置培養(yǎng)1 h，同時取原始菌液（pH 7.2）2 mL 作為對照，平板稀釋涂布，測定活菌數(shù)。

高滲透壓脅迫：取24 支試管設(shè)置4 個試驗(yàn)組，每組設(shè)置3 個平行，分別加入MRSA6 與MRSA18 菌液各2 mL，同上條件離心，去上清，分別向TSB 培養(yǎng)基加入體積分?jǐn)?shù)為0.75%，25%，30%，35%的氯化鈉模擬高滲透壓環(huán)境，0.75%鹽濃度為對照組，室溫靜置培養(yǎng)1 h。平板稀釋涂布，測定活菌數(shù)。

1.4.3 脅迫處理對MRSA 抗性基因及毒力基因表達(dá)影響

1.4.3.1 脅迫處理 消毒劑脅迫處理：取18 支無菌試管設(shè)置3 個試驗(yàn)組，每組設(shè)置3 個平行，分別加入MRSA6 與MRSA18 菌液各4.5 mL。再向每組分別加入過氧乙酸、次氯酸鈉或新潔爾溶液，使其終濃度為1/2 MIC，37 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后，收集菌體。對照組3 個平行為4.5 mL TSB 菌液＋500 μL 去離子水。

低溫脅迫處理：取MRSA6 與MRSA18 菌液各5 mL，低溫脅迫24 h，收集菌體。

酸脅迫處理：取MRSA6 與MRSA18 菌液各5 mL，6 000 r/min、離心5 min，吸去上清液后加入等體積用1 mol/L 的HCl 溶液調(diào)節(jié)成pH 4 的TSB培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，收集菌體。

堿脅迫處理：取MRSA6 與MRSA18 菌液各5 mL，6 000 r/min、離心5 min，吸去上清液后加入等量1 mol/L 的NaOH 溶液調(diào)節(jié)至pH 10 的TSB 培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，收集菌體。

MRSA 的高滲透壓脅迫：取MRSA6 與MRSA18 菌液各5 mL，6 000 r/min、離心5 min，吸去上清液后加入等體積NaCl 體積分?jǐn)?shù)為20%的TSB 培養(yǎng)基，模擬MRSA 在食品加工過程中可能遇到的高滲透壓環(huán)境，37 ℃培養(yǎng)24 h，收集菌體。

1.4.3.2 提取細(xì)菌總RNA 按照試劑盒說明書，使用細(xì)菌總RNA 抽提試劑盒提取脅迫前后細(xì)菌的總RNA，收集所得的RNA 溶液于-80 ℃保存，防止其降解。

1.4.3.3 反轉(zhuǎn)錄第一條鏈的合成 采用核酸濃度測定儀測定核酸濃度，A260/A280比值評估核酸純度，再按照試劑盒提供的M-MuLV 第一條cDNA鏈合成試劑盒操作方法配制對應(yīng)的體系，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，-80 ℃保存。

1.4.3.4 相關(guān)基因的表達(dá)量檢測 按照2X SG Fast qPCR Master Mix（SYBR Green）試劑盒操作說明，測定MRSA 菌株脅迫前后相關(guān)的表達(dá)量。反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃，3 min；95 ℃，5 s；60 ℃，30 s；72℃，30 s，40 個循環(huán)。相關(guān)引物序列見表1。

表1 引物序列Table 1 Primmer sequences

（續(xù)表1）

1.4.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 脅迫處理前后菌株生長計(jì)數(shù)結(jié)果換算成菌株生長對數(shù)值加以分析，數(shù)據(jù)采用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理，采用Microsoft Excel 繪制圖表。相關(guān)基因表達(dá)量檢測通過脅迫前后對應(yīng)的Ct 值，以金黃色葡萄球菌16S rRNA 為內(nèi)參基因進(jìn)行歸一化，并通過2-△△Ct法計(jì)算目的基因的相對表達(dá)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 3 種消毒劑對MRSA 的最小抑菌濃度

選取食品加工環(huán)節(jié)及工廠環(huán)境中3 種常見的消毒劑：過氧乙酸、次氯酸鈉和新潔爾滅測定其對菌株的最小抑菌濃度，3 種消毒劑對MRSA6 和MRSA18 的MIC 值無差異，并且測定結(jié)果均遠(yuǎn)小于消毒劑推薦使用濃度，結(jié)果詳見表2。

表2 消毒劑對MRSA 的最小抑菌濃度Table 2 The minimum inhibitory concentration （MIC）value of disinfectant

2.2 不同脅迫環(huán)境對菌株生長影響

2.2.1 溫度對MRSA 生存狀況的影響 分別在4℃低溫環(huán)境以及45，50，55，60 ℃高溫水浴環(huán)境對MRSA 進(jìn)行脅迫，并與常溫（37 ℃）培養(yǎng)下MRSA菌株的生長情況作對照。結(jié)果如圖1所示，在經(jīng)過5 h 的4 ℃低溫脅迫后，MRSA6 菌株生長對數(shù)值為9.1，與之前（9.127）相比無明顯差異（P＞0.05）；MRSA18 在脅迫后出現(xiàn)增殖現(xiàn)象，生長對數(shù)值從8次方（8.727）達(dá)到了9.014，差異明顯（P＜0.05）。在45 ℃的脅迫環(huán)境下，MRSA6 的生長對數(shù)值為8.991，MRSA18 的生長對數(shù)值為8.952，差異不明顯（P＞0.05）；在50 ℃時，MRSA6 的生長對數(shù)值為8.885，MRSA18 生長對數(shù)值為8.881，差異不明顯（P＞0.05）；在55 ℃時，兩菌株生長均受到抑制，出現(xiàn)顯著變化（P＜0.05）；60 ℃脅迫30 min 后，菌株存活率均為0，達(dá)到了殺菌效果。

圖1 低溫及高溫脅迫對MRSA 菌株生長的影響Fig.1 Effects of low temperature and high temperature stress on the growth of MRSA strains

2.2.2 酸堿脅迫對MRSA 菌株的影響 以pH 2，4，6，8，10 模擬MRSA 在食品加工過程中可能遇到的酸堿環(huán)境，與在普通培養(yǎng)基環(huán)境（pH 7.2）下生長的菌株作比較。結(jié)果如圖2所示。在pH 值為2 的低酸環(huán)境，菌株均不能生長，在pH 值為4 時，菌株生長對數(shù)值無明顯變化（P＞0.05），但在pH 6的脅迫環(huán)境下，MRSA 6 的生長出現(xiàn)了降低，但仍在9 次方以上。在pH 值為8 時，菌株生長趨勢無明顯變化（P＞0.05）。在pH 10 的環(huán)境下脅迫1 h后，MRSA18 出現(xiàn)增長，生長對數(shù)值為9.008（P＜0.05），而MRSA6 生長趨勢保持不變。除pH 2 外，弱酸和弱堿對MRSA 的生長影響不大。

圖2 酸堿脅迫對MRSA 菌株生長的影響Fig.2 The effect of acid-base stress on the growth of MRSA strains

2.2.3 高鹽濃度環(huán)境對MRSA 生長的影響 本研究以鹽體積分?jǐn)?shù)分別為25%，30%，35%的培養(yǎng)環(huán)境模擬NRSA 在食品加工過程中可能碰到的高滲透壓環(huán)境，觀察高壓脅迫可能對其生長造成的影響。并以普通培養(yǎng)環(huán)境 （鹽體積分?jǐn)?shù)0.75%下MRSA 的生長對數(shù)值為參考。在鹽體積分?jǐn)?shù)為25%和30%的環(huán)境下脅迫1 h 觀察到MRSA 生長對數(shù)值下降，維持在109與108存活，脅迫后與脅迫前的存活率不存在顯著差異（P＞0.05）。但在鹽體積分?jǐn)?shù)為35%的環(huán)境作用下，MRSA6 的生長對數(shù)值從109下降為108.758，MRSA18 為108.591，兩株菌的生長對數(shù)值均有所下降，且差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果表明MRSA 對氯化鈉的耐受度較高。

2.3 脅迫處理對MRSA 抗性基因表達(dá)影響

熒光定量PCR 檢測不同脅迫條件前后MRSA6 與MRSA18 攜帶抗性基因的表達(dá)差異，結(jié)果如圖4所示。經(jīng)過新潔爾滅脅迫后MRSA6 和MRSA18 的mecA 基因表達(dá)水平增加（P＜0.05），且經(jīng)過低濃度酸（pH 4）脅迫的MRSA6 菌株mecA基因的表達(dá)也出現(xiàn)上調(diào)。經(jīng)過氧乙酸以及新潔爾滅脅迫后，MRSA6 的qacG 基因表達(dá)上升（P＜0.05）。但低溫脅迫及過氧乙酸脅迫后MRSA6 菌株的抗性基因表達(dá)無明顯變化，除新潔爾滅刺激作用外的所有脅迫方式均對MRSA18 的mecA 基因表達(dá)產(chǎn)生抑制作用。

圖3 高鹽脅迫對MRSA 菌株生長的影響Fig.3 The effect of high salt stress on the growth of MRSA strain

圖4 不同脅迫條件下兩株MRSA 菌株抗性基因相對表達(dá)量Fig.4 Relative expression of resistance genes of two MRSA strains under different stress conditions

經(jīng)過氧乙酸脅迫作用后，MRSA6 菌株的norA、ermB 和tetM 基因分子表達(dá)水平明顯上調(diào)（P＜0.05），次氯酸鈉脅迫后，MRSA6 的各耐藥基因表達(dá)量均明顯減?。≒＜0.05），新潔爾滅刺激下，MRSA6 的norA 及aac6’/apH2’’基因表達(dá)水平上調(diào)，但tetM 和ermB 影響不大。冷脅迫和高滲透壓對耐藥基因的表達(dá)起抑制作用，MRSA6 的ermB 基因在堿環(huán)境下表達(dá)有所上升。MRSA18 在新潔爾滅脅迫刺激下，norA 和ermB 基因表達(dá)上升，其它基因表達(dá)均受脅迫環(huán)境抑制。

2.4 不同脅迫環(huán)境對菌株腸毒素基因表達(dá)影響

脅迫對MRSA6 攜帶的5 種腸毒素基因表達(dá)的影響結(jié)果見圖5，結(jié)果表明：除sen 在脅迫環(huán)境下表達(dá)水平無明顯變化外，其它腸毒素基因在新潔爾滅脅迫環(huán)境下均出現(xiàn)表達(dá)水平上調(diào)（P＜0.05），低溫脅迫對5 種腸毒素基因的表達(dá)影響不大，在高滲透壓影響下，所有的腸毒素基因表達(dá)均被抑制，顯著下降（P＜0.05），其它環(huán)境脅迫對MRSA 的腸毒素基因分子表達(dá)水平均有不同程度抑制作用。

圖5 不同脅迫下MRSA6 菌株腸毒素基因相對表達(dá)量Fig.5 Relative expression of enterotoxin gene in MRSA6 strain under different stress

3 討論

食品加工環(huán)境中亞損傷細(xì)菌仍然具有生物活性，在一定的條件下能夠修復(fù)并增殖，為食品安全保障帶來隱患[19-20]。本研究以MRSA 菌株作為研究對象，通過模擬不同脅迫條件對金黃色葡萄球菌的生長及毒力和抗性基因表達(dá)影響，為食品加工過程病原菌的控制提供參考。

首先，采用食品加工過程常使用的3 種消毒劑過氧乙酸、次氯酸鈉和新潔爾滅，測定MRSA 菌株對消毒劑的MIC 值，檢測結(jié)果均小于消毒劑推薦使用濃度，說明正確規(guī)范使用消毒劑可有效殺滅MRSA 菌株。在本研究中，0.03%的過氧乙酸可以充分抑制MRSA 菌株生長。張友平等[21]采用0.2%的過氧乙酸濃度擦拭MRSA 1 min 后，其存活率為0。說明過氧乙酸能夠有效殺滅MRSA 菌株，并且其使用濃度和作用時間成反比，結(jié)合本研究結(jié)果也可適當(dāng)延長作用時間降低過氧乙酸使用濃度達(dá)到有效殺菌抑菌效果。季銨鹽類消毒劑較小濃度可起到較好殺菌作用，兩株MRSA 菌株（qac+和qac-） 對季銨鹽類消毒劑新潔爾滅的MIC 值測定結(jié)果均為5 μg/mL。Seier-Petersen 等[22]檢測出苯扎溴安對MRSA 的MIC 為1～8 μg/mL，與本研究檢測結(jié)果相符。由于細(xì)菌攜帶qac 基因家族可表達(dá)多種外排泵，使細(xì)菌對季銨化合物的敏感性降低[23]。但本研究中，兩株MRSA 菌株（qac+和qac-）對新潔爾滅的MIC 值一致，推測編碼季銨鹽類抗性的耐消毒劑基因?qū)Ρ硇陀绊懸蕾囉诙喾N因素，其抗性機(jī)制還需深入探討。

金黃色葡萄球菌對低溫具有良好的適應(yīng)性[2]。本研究中，低溫脅迫后，兩株菌株生長均不受影響。隨著溫度的升高，MRSA18 在45 ℃及50 ℃出現(xiàn)短暫增殖，但在55 ℃和60 ℃時明顯被抑制。有研究表明，金黃色葡萄球菌在45 ℃處理一段時間后，對極端環(huán)境的耐受能力會增長[24]。猜測MRSA18 也可能對苛刻環(huán)境表現(xiàn)出一定的應(yīng)激反應(yīng)。受試菌株對氯化鈉的耐受性較高，在鹽體積分?jǐn)?shù)35%情況下依舊可存活。該濃度下，MRSA 的生長對數(shù)值雖明顯下降但其生長被抑制程度不高。pH 2 的酸環(huán)境中MRSA 基本不生長。但堿性環(huán)境有可能促進(jìn)MRSA 的生長，pH 4、pH 6 和pH 8時，菌株生長趨勢差異不大，當(dāng)pH 值到達(dá)10 時，MRSA18 出現(xiàn)了明顯的增殖。目前關(guān)于金黃色葡萄球菌對于堿的耐受性的報(bào)道較少，有研究表明，金黃色葡萄球菌對鹽和堿性pH 值環(huán)境具有高耐受性主要是由于在質(zhì)膜中發(fā)現(xiàn)反向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性，可從細(xì)胞質(zhì)中除去有毒陽離子，并使金黃色葡萄球菌在不同的脅迫條件下存活[25]。關(guān)于在堿性環(huán)境下細(xì)菌的增殖機(jī)制尚未明確，仍需進(jìn)一步的研究和探討。

MRSA 具有特有的mecA 基因，存在于移動遺傳元件葡萄球菌染色體盒mec（SCCmec）上。mecA基因的表達(dá)主要由調(diào)控因子MecI （DNA 結(jié)合阻遏蛋白）和MecR1（信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子）調(diào)控[26]。新潔爾滅作為一種陽離子季銨鹽類消毒劑，其主要作用機(jī)制是通過改變菌體菌膜的通透性，使菌體破裂，蛋白質(zhì)變性從而起到殺菌效果[27]，這種與β-內(nèi)酰胺類抗生素殺菌模式相似的消毒劑脅迫可能是本研究中mecA 基因表達(dá)上升的主要原因。也可能是陽離子對mecR1 蛋白的表達(dá)產(chǎn)生影響，介導(dǎo)了mecA 的表達(dá)與轉(zhuǎn)錄。同時，MRSA6 菌株的qacG抗性基因表達(dá)也顯示出明顯的升高，猜測這兩種外排機(jī)制相似的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)可能會發(fā)生相互作用。過氧乙酸作為一種廣譜、高效的滅菌劑，在過氧化氫的協(xié)助下可順利通過細(xì)菌通透性屏障，進(jìn)而使細(xì)菌的RNA、DNA 和蛋白質(zhì)等物質(zhì)破壞漏出，致細(xì)菌死亡。Chang 等[28]的研究發(fā)現(xiàn)，金黃色葡萄球菌暴露在過氧乙酸亞致死劑量后，誘導(dǎo)許多毒力基因的表達(dá)，提示金黃色葡萄球菌的毒力可能會發(fā)生變化以響應(yīng)過氧乙酸的刺激。本研究發(fā)現(xiàn)，在過氧乙酸1/2MIC 的脅迫下，MRSA6 的norA、ermB及tetM 基因表達(dá)水平均顯著上調(diào)，說明過氧乙酸可能對MRSA 外排因子調(diào)控存在影響，但菌株MRSA18 并沒有表現(xiàn)出上述現(xiàn)象，具體機(jī)制尚不明確，仍需進(jìn)一步追蹤研究。編碼抵抗喹諾酮外排蛋白質(zhì)的norA 基因，編碼抗四環(huán)素跨膜蛋白tetM基因等與qac 基因互為功能合作伙伴[29]，推測MRSA6 在新潔爾滅及堿性環(huán)境刺激下，耐藥基因的表達(dá)水平上升的原因可能是各種外排蛋白泵共同參與結(jié)果。

在腸毒素基因分子表達(dá)檢測中，除sen 外，大部分的腸毒素基因在新潔爾滅刺激下表現(xiàn)出表達(dá)量相對上升的現(xiàn)象。結(jié)合之前報(bào)道中金黃色葡萄球菌在抗生素作用下毒力水平會發(fā)生改變[30]，推測腸毒素基因與耐藥基因外排蛋白等機(jī)制之間可能也存在相互聯(lián)系。本研究表明不同的消毒劑亞抑制脅迫對菌株的毒力及抗性基因的表達(dá)有促進(jìn)也有抑制。新潔爾滅對MRSA 菌株的毒力及抗性基因幾乎都有促進(jìn)作用。綜上，本研究揭示了食品加工過程中常規(guī)脅迫處理方式對MRSA 的生長及相關(guān)基因表達(dá)的影響，為食品行業(yè)病原菌的控制提供理論依據(jù)。