胃癌是除肝癌和肺癌外的第三大致命性癌癥，屬于胃部惡性腫瘤，病毒感染、飲酒史、性別、年齡等均可能是其發(fā)病的危險(xiǎn)因素

。因多數(shù)患者晚期才被確診，因此致使患者預(yù)后不佳現(xiàn)象嚴(yán)重，5年存活率僅約30%，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤程度均是其危險(xiǎn)致死因素

。所以，尋找疾病和預(yù)后監(jiān)查標(biāo)志物對患者生命健康十分重要。已有研究表明，非編碼RNA(non-coding RNA，ncRNA)能夠通過調(diào)節(jié)基因表達(dá)來參與癌癥的發(fā)生和侵襲，而長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是其中的一部分，在腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡中具有重要作用

。唐氏綜合征關(guān)鍵區(qū)域8(Down syndrome critical region 8，DSCR8)已被發(fā)現(xiàn)在黑色素瘤和子宮癌中表達(dá)失調(diào)

。有研究報(bào)道稱，在卵巢癌中DSCR8表達(dá)增加，其可通過下調(diào)miR-98-5p表達(dá)來激活STAT3/HIF-1α途徑，以此促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生

。信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)和微小RNA-98-5p(microRNA-98-5p，miR-98-5p)已被大量研究表明參與胃癌的增殖、侵襲及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

。目前關(guān)于DSCR8在胃癌中的表達(dá)以及與患者預(yù)后的關(guān)系還未得到探究，因此本研究通過檢測lncRNA DSCR8、STAT3、miR-98-5p在胃癌患者胃癌組織中的表達(dá)情況，對DSCR8在胃癌中的作用機(jī)制與患者預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行探討，以期為胃癌的治療靶點(diǎn)提供新的研究方向。

1 資料與方法

選取2013年8月至2015年6月185例我院已確診收治的胃癌患者手術(shù)切除胃癌組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本，男90例，女95例；年齡32～79歲，其中<60歲102例，≥60歲83例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移96例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移89例；腫瘤低、高分化程度分別為75例、110例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期70例，Ⅲ～Ⅳ期115例。

其他藝術(shù)文化形式也是服裝面料再造設(shè)計(jì)的靈感，其中最明顯的技術(shù)繪畫藝術(shù)和建筑藝術(shù)。例如中國水墨畫，留白是中國水墨畫的特點(diǎn)，使人感受到空靈之美。正在服裝面料再造設(shè)計(jì)當(dāng)中利用水墨畫的表現(xiàn)手法，可以呈現(xiàn)出不同的魅力。服裝設(shè)計(jì)師借鑒各種文化藝術(shù)形式，并且在服裝面料再造設(shè)計(jì)當(dāng)中巧妙地利用，可以吸引消費(fèi)者的注意。

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者經(jīng)鏡檢、活檢等手段檢查確診，臨床資料完整；全部患者均進(jìn)行手術(shù)切除治療，術(shù)前未進(jìn)行其他輔助性治療；術(shù)前檢查未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重侵犯周圍器官；排除標(biāo)準(zhǔn)：胃癌患者在近期進(jìn)行過化療或手術(shù)等治療；未患其他免疫系統(tǒng)疾病；患者具有其他腫瘤病發(fā)史。本研究通過我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批號：LL-AF-20131018-02)，經(jīng)患者和家屬知情并簽署同意書。

實(shí)驗(yàn)所用主要儀器：SIGMA希格瑪臺式高速離心機(jī)3K15(貨號：V118926)購自南京貝登醫(yī)療股份有限公司；Bio-Rad伯樂熒光定量PCR儀CFX Connect(貨號：CFX Connect)購自南京貝登醫(yī)療股份有限公司；BioTek全自動(dòng)酶標(biāo)儀(貨號：26262060)購自北京安麥格貿(mào)易有限公司。

實(shí)驗(yàn)所用主要試劑：即用型熒光定量PCR試劑盒(貨號：XY-TE-0731)購自上海烜雅生物科技有限公司；QIAGEN反轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號：205311)購自上?？泼羯锟萍加邢薰?；TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、Biorab TaqMan miRNA定量PCR試劑盒(貨號：MT0006、MTTXXXXX-GIW)購自北京百奧萊博科技有限公司。

為了提高模型的準(zhǔn)確度，Embedding 層使用的是經(jīng)過Word2vec在無標(biāo)簽數(shù)據(jù)上進(jìn)行聚類訓(xùn)練后的詞向量模型。

1.3.1 樣品采集及保存：在手術(shù)中獲取胃癌組織和癌旁組織樣本，取用生理鹽水清理組織樣本至-80 ℃冰箱待用。

1.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測各樣本中DSCR8、STAT3、miR-98-5p的表達(dá)：用液氮將組織樣本在研缽中進(jìn)行研磨，加入Trizol或RNAiso for small RNA提取總mRNA及總miRNA后以此為模板，使用mRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒及TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以此為模板，使用qRT-PCR試劑盒及Biorab TaqMan miRNA定量PCR試劑盒分別檢測STAT3、DSCR8、miR-98-5p在各樣本中的表達(dá)水平。以U6為內(nèi)參對miR-98-5p進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，以GAPDH為內(nèi)參對DSCR8及STAT3進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，使用2

分析二者表達(dá)水平。用軟件Oligo 7和Primer 3.0設(shè)計(jì)引物(見表1)，送生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

經(jīng)過5年隨訪后，185例胃癌患者55例生存、130例死亡，總生存率為29.73%。DSCR8高表達(dá)組和低表達(dá)組生存率分別為19.35%、40.22%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-rank值為11.952，

=0.001)(見圖1D)。

將胃癌患者以DSCR8表達(dá)水平平均數(shù)1.38為標(biāo)準(zhǔn),分為高、低表達(dá)組，≥1.38為高表達(dá)組(

=93)，<1

38為低表達(dá)組(

=92)。由表2可知，胃癌組織中DSCR8的表達(dá)水平在性別、年齡、分化程度間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

>0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小和TNM分期中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0.05)。

與癌旁組織相比，胃癌組織中DSCR8的表達(dá)水平顯著增加(0.91±0.24

1.38±0.43)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

=12

982,

=0.000)。

2 結(jié)果

Sheep hurry toward winter-pasture, it will heavily snow in the winter.

對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤大小、DSCR8表達(dá)進(jìn)行單因素Cox生存回歸分析，發(fā)現(xiàn)以上4個(gè)因素均對胃癌患者預(yù)后生存有影響(

<0.05)。多因素分析發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤大小、DSCR8表達(dá)均是影響胃癌患者預(yù)后生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(

<0.05)(見表4)。

在胃癌組織中，DSCR8與STAT3呈顯著正相關(guān)(

=0

484，

=0.000)，而與miR-98-5p呈顯著負(fù)相關(guān)(

=-0

487，

=0.000)(見圖1B～1C)。

中國的茶葉在國際茶葉銷售市場上的認(rèn)可度普遍偏低，西方發(fā)達(dá)國家對我國出口的茶葉標(biāo)準(zhǔn)尤為嚴(yán)苛。江西出口茶葉缺乏自有知名品牌，這不僅影響出口貿(mào)易的收益，也不利于出口茶葉的國際競爭力的提高，更不利于對外貿(mào)易的持續(xù)發(fā)展。

對出院患者進(jìn)行為期5年的隨訪，截止時(shí)間為死亡時(shí)間或截至2020年6月，以電話或復(fù)查形式記錄患者預(yù)后情況。

聲發(fā)射能量是指事件信號檢波包絡(luò)線下的面積，它可以反映事件的相對能量和強(qiáng)度。將實(shí)驗(yàn)中兩類傳感器采集的信號繪制成能量-時(shí)間-軸向力關(guān)系曲線，對比兩種傳感器的特點(diǎn)。通過對所有試件的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，每組試件的數(shù)據(jù)呈現(xiàn)出相同的規(guī)律，限于篇幅本文只選取了部分試樣的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果作為代表。

與癌旁組織相比，胃癌組織中STAT3的表達(dá)水平顯著增加，而miR-98-5p的表達(dá)水平則顯著降低(

<0.05)；二者在胃癌組織中呈顯著負(fù)相關(guān)(

=-0

477，

=0.000)(見表3、圖1A)。

3 討論

胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的一種癌癥，具有高發(fā)病、高死亡、預(yù)后差的特點(diǎn)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生命健康，因此，有必要繼續(xù)為尋找其腫瘤診斷標(biāo)志物、治療靶點(diǎn)以及研究其發(fā)生機(jī)制而不懈努力

。盡管隨著醫(yī)療手段的不斷完善和科技的進(jìn)步，患者治愈率有所增加，但其5年生存率仍不容樂觀，而且因患者多為晚期確診，胃癌患者常表現(xiàn)為預(yù)后不良，因此，找到胃癌的診斷標(biāo)志物以及關(guān)注患者預(yù)后至關(guān)重要

。本研究通過檢測lncRNA DSCR8、STAT3、miR-98-5p在胃癌患者組織中的表達(dá)，對DSCR8在疾病中的作用機(jī)制及其與預(yù)后的相關(guān)性進(jìn)行探討，以期為胃癌的治療靶點(diǎn)和預(yù)后檢測等相關(guān)研究提供新的依據(jù)。

在美國的體制下，國家立法機(jī)關(guān)、行政機(jī)關(guān)以及司法機(jī)關(guān)等公共機(jī)構(gòu)有其各自的能力范圍。在管理人工智能方面，沒有哪一個(gè)機(jī)構(gòu)具有壟斷地位，需要不同機(jī)構(gòu)發(fā)揮各自職能，相互協(xié)調(diào)配合，以取得更好效果[24] 。

研究已證實(shí),lncRNA在癌癥的診斷和治療中起重要作用，能夠參與轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平的基因調(diào)節(jié)

。有報(bào)道稱,lncRNA在參與調(diào)節(jié)miRNA的表達(dá)過程中起到競爭性內(nèi)源性核糖核酸(ceRNA)的作用，而ceRNA模式已被發(fā)現(xiàn)參與調(diào)節(jié)各種癌癥的發(fā)生發(fā)展

。

lncRNA DSCR8已被發(fā)現(xiàn)在肝癌細(xì)胞系中過度表達(dá)，其通過DSCR8/miR-485-5p/FZD7軸激活Wnt/β-catenin信號通路以此促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和細(xì)胞周期，而抑制DSCR8表達(dá)則具有相反作用

。研究發(fā)現(xiàn)，DSCR8在卵巢癌中表達(dá)顯著增加，可通過miR-3192-5p/YY1軸促進(jìn)癌癥的進(jìn)展，而DSCR8表達(dá)沉默則能抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、遷移且促進(jìn)細(xì)胞凋亡

。Dong等

研究報(bào)道稱，高表達(dá)的DSCR8在卵巢癌中可下調(diào)miR-98-5p表達(dá)，以此來激活STAT3/HIF-1α途徑從而促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生，調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和凋亡。miR-98-5p已被發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，還能促進(jìn)其凋亡，其表達(dá)下調(diào)可緩解癌癥進(jìn)展。該研究還發(fā)現(xiàn)，miR-98-5p在不同胃癌細(xì)胞系中表達(dá)水平均顯著降低，上調(diào)miR-98-5p表達(dá)可抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化從而抑制胃癌細(xì)胞的侵襲

。STAT3激活可促進(jìn)癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生并抑制細(xì)胞分化，還有研究發(fā)現(xiàn)，STAT3在胃癌組織中轉(zhuǎn)錄及翻譯水平顯著高于正常組織

。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與癌旁組織相比，胃癌組織中DSCR8、STAT3的表達(dá)水平顯著增加，而miR-98-5p的表達(dá)水平則顯著降低；STAT3與miR-98-5p的表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)；DSCR8與STAT3呈顯著正相關(guān)，與miR-98-5p呈顯著負(fù)相關(guān)。該結(jié)果表明DSCR8可能通過調(diào)節(jié)STAT3與miR-98-5p的表達(dá)參與胃癌的發(fā)展。

有研究表明，DSCR8與肝癌患者的腫瘤大小、TNM分期等臨床病理參數(shù)及5年預(yù)后生存情況密切相關(guān)

。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DSCR8表達(dá)與胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小和TNM分期有關(guān)。與DSCR8表達(dá)組相比，DSCR8低表達(dá)組預(yù)后生存率較高。且多因素分析發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤大小、DSCR8表達(dá)均是影響預(yù)后生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。以上結(jié)果表明DSCR8可作為胃癌患者預(yù)后的評判指標(biāo)，預(yù)測患者預(yù)后情況。

綜上所述，DSCR8在胃癌組織中呈高表達(dá)，且與胃癌患者的臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān)，提示高表達(dá)的DSCR8可能通過抑制miR-98-5p表達(dá)以及促進(jìn)STAT3表達(dá)參與到胃癌的發(fā)生過程中。本研究為胃癌發(fā)生機(jī)制提供了新的依據(jù)，對胃癌的靶向檢測、治療及預(yù)后具有重要參考價(jià)值。

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