酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)于1971年建立，因其具有簡單、高效、靈敏、特異、穩(wěn)定、試劑成本低等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)診斷和研究、食品安全檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)及生態(tài)學(xué)、植物資源等生命科學(xué)領(lǐng)域

。在醫(yī)學(xué)研究及臨床診斷方面，ELISA技術(shù)主要用于多種病原微生物所引起的感染性疾病的免疫診斷；同時(shí)，因其檢測(cè)的高效性，也常用于血清流行病學(xué)調(diào)查。其主要技術(shù)類型包括雙抗原(抗體)夾心法、間接法、競爭法、捕獲法、生物素-親和素等。

村民謝傳寶家里，香菇菌棒碼成垛，每個(gè)菌棒都長滿白色菌絲?！霸龠^一個(gè)月，這些菌棒就能進(jìn)棚出菇了?！敝x傳寶說，他與老伴有三個(gè)收入來源：一是種香菇，每年能收獲4000袋；二是販香菇，農(nóng)閑時(shí)到外地收購，送回村里轉(zhuǎn)賣；三是老伴有空就到加工廠打短工。夫婦二人四季不閑，一年收入10萬元以上。

1 ELISA常規(guī)臨床診斷應(yīng)用

ELISA在臨床常規(guī)的測(cè)定項(xiàng)目主要包括以下4類。

1.1 抗原及其抗體檢測(cè) ELISA在感染性疾病檢測(cè)中具有突出的優(yōu)勢(shì)，在病毒檢測(cè)方面應(yīng)用較廣，如肝炎病毒、艾滋病毒、巨細(xì)胞病毒、皰疹病毒、風(fēng)疹病毒、流感病毒、麻疹病毒、SARS冠狀病毒、柯薩奇病毒、輪狀病毒、登革病毒、人乳頭瘤病毒、新型冠狀病毒等；在細(xì)菌檢測(cè)方面包括結(jié)核分支桿菌、幽門螺桿菌、布氏桿菌、軍團(tuán)菌等；在其他類型病原體檢測(cè)方面包括梅毒螺旋體、弓形蟲、沙眼衣原體、肺炎支原體等。ELISA在免疫性疾病方面，可進(jìn)行自身免疫病抗體的測(cè)定以及對(duì)過敏的診斷，如檢測(cè)風(fēng)濕系列抗體、紅斑性狼瘡抗體、各種過敏原的抗體、甲狀腺球蛋白抗體、抗胰島素抗體、抗精子抗體、抗卵巢抗體、抗腎小球基底膜抗體等。

1.2 特種蛋白的檢測(cè) 各種免疫球蛋白、循環(huán)免疫復(fù)合物、細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素家族(IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IL-11、IL-13等)及腫瘤壞死因子(TNF-α、TNF-β)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)等。腫瘤標(biāo)志物，如常規(guī)體檢腫瘤二項(xiàng)(甲胎蛋白、癌胚抗原)；消化道相關(guān)腫瘤標(biāo)志物如CA199、CA242、CA724等；肺癌相關(guān)標(biāo)志物如神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)、細(xì)胞角蛋白19片斷(CYFRA211)等；男性腫瘤標(biāo)志物如前列腺特異性抗原(PSA)；女性腫瘤如卵巢癌標(biāo)志物CA125、乳腺癌標(biāo)志物CA153等。

2.6 內(nèi)分泌及代謝性疾病 孫立山等

建立定量酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中胰高血糖素樣肽1(GLP-1)，通過識(shí)別各種形式GLP-1單克隆抗體，能夠一次檢測(cè)糖耐量受損(IGT)及2型糖尿病(T2DM)患者體內(nèi)4種形式的GLP-1，無論是否具有活性，檢測(cè)結(jié)果都能較客觀地反映體內(nèi)GLP-1的分泌狀況。該檢測(cè)方法的穩(wěn)定性和精密度較好，對(duì)指導(dǎo)臨床個(gè)體化治療具有重要意義。

2.2 呼吸系統(tǒng)疾病 研究發(fā)現(xiàn)IL-18 和IL-33(ELISA檢測(cè))兩種炎癥因子可能參與了呼吸道合胞病毒(RSV)致毛細(xì)支氣管炎和反復(fù)喘息的發(fā)病機(jī)制，且其水平與呼出氣一氧化氮(FeNO)水平有相關(guān)性

。有學(xué)者

證實(shí)在輔助診斷肺炎支原體感染方面酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法優(yōu)于冷凝集試驗(yàn)。李榮娟

應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清脂阿拉伯甘露糖抗體(LAM-IgG)水平，證實(shí)對(duì)早期肺結(jié)核的鑒別診斷具有一定的臨床價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn)

血清TNF-α、IL-8和嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)水平(采用ELISA法檢測(cè))升高與支氣管哮喘(Bronchial asthma，BA)發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)，進(jìn)一步了解其網(wǎng)絡(luò)作用機(jī)制將對(duì)免疫治療及開發(fā)新的治療靶點(diǎn)和方法提供新思路。

2 ELISA臨床應(yīng)用新進(jìn)展

近年來通過研究者不斷摸索和實(shí)踐，ELISA的應(yīng)用在很多方面取得新的進(jìn)展。

2.10 腫瘤 有研究采用酶聯(lián)免疫吸附法分別檢測(cè)肺腺癌患者和健康體檢者血漿中p62的表達(dá)情況，提示p62 高表達(dá)與肺腺癌患者不良預(yù)后有關(guān)

。吳火友等

研究乙酰肝素酶(HPSE)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在結(jié)直腸癌患者血清中的表達(dá)情況(均采用ELISA檢測(cè))，認(rèn)為聯(lián)合檢測(cè)HPSE和VEGF能夠提高結(jié)直腸癌診斷水平，可成為結(jié)直腸癌患者篩查、判斷預(yù)后及指導(dǎo)治療的指標(biāo)。

1.4 血液中藥物濃度的檢測(cè) 如抗癲癇藥物、抗哮喘藥物、治療心臟病類藥物、抗生素等。這些以ELISA為依托建立的檢測(cè)方法為維護(hù)人們的健康與安全提供了便捷有效的途徑

。

通過以上分析，可知接收機(jī)鏈路的絕對(duì)時(shí)延和時(shí)延波動(dòng)由通道中帶寬最窄濾波器決定的，因此在實(shí)際設(shè)計(jì)中要減小電路的絕對(duì)時(shí)延與時(shí)延波動(dòng)，應(yīng)滿足以下設(shè)計(jì)原則和措施：

2.4 循環(huán)系統(tǒng)疾病 高麗

應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)ST段抬高性急性心肌梗死患者血漿和肽素濃度，認(rèn)為該指標(biāo)檢測(cè)價(jià)值高，能夠?yàn)榕R床診斷及預(yù)后判斷提供有效依據(jù)。

2.3 消化系統(tǒng)疾病 研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充牛乳鐵蛋白，可抑制腸道組織IL-1β和IL-6炎性因子的表達(dá)，對(duì)腸道組織有一定的保護(hù)作用

，而這兩個(gè)指標(biāo)均利用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)。

2.5 泌尿系統(tǒng)疾病 運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)特發(fā)性膜性腎病患者血清抗M型磷脂酶A2受體(PLA2R)抗體，可作為評(píng)價(jià)臨床療效的敏感性血清學(xué)指標(biāo)

。周冉等

發(fā)現(xiàn)血清及尿中性粒細(xì)胞膠原酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)和胱抑素C在新生兒缺血缺氧性腎損傷的診斷中有重要意義，其指標(biāo)的升高與腎臟損害程度密切相關(guān)。

治療組在治療之前JOA評(píng)分,P>0.05,差異不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在治療之后,治療組的JOA評(píng)分要好于對(duì)照組,P<0.05,說明差異具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.3 非肽類激素的檢測(cè) 如雌二醇、皮質(zhì)醇等。

2.7 肌肉、骨骼及結(jié)締組織疾病 代鳳雷等

采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)早期膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜組織中的S100A12、IL-1β、Galectin-3水平，證實(shí)這三種炎性細(xì)胞因子均與早期膝骨關(guān)節(jié)炎密切相關(guān)，為臨床早期診斷膝骨關(guān)節(jié)炎提供理論依據(jù)，同時(shí)明確Galectin-3在該病病情進(jìn)展中持續(xù)表達(dá)。

2.9 婦產(chǎn)科疾病 有學(xué)者

探討產(chǎn)婦血清抗心磷脂抗體(ACA)和抗β2- 糖蛋白1(β2-GPl)抗體(ELISA檢測(cè))與不良妊娠結(jié)局的關(guān)系，證實(shí)血清ACA各亞型及抗β2-GPl各亞型抗體檢測(cè)可用于評(píng)估不良妊娠結(jié)局。研究發(fā)現(xiàn)脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(LP-PLA2)水平的升高可能與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生有關(guān)，母血中LP-PLA2水平的變化(用ELISA檢測(cè))有可能作為疾病的監(jiān)測(cè)指標(biāo)

。

2.8 神經(jīng)系統(tǒng)及精神疾病 研究表明，重癥顱腦損傷病人體內(nèi)存在顯著的炎性反應(yīng)與凝血機(jī)制紊亂，二者各指標(biāo)間存在一定相關(guān)性，與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)

。黃成兵等

采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)無抽搐電休克治療前后首發(fā)性精神分裂癥患者血清腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)水平，證實(shí)BDNF可作為臨床療效指標(biāo)。

Boosting算法也是一種基于數(shù)據(jù)集重抽樣算法，與Bagging算法主要區(qū)別在于需要?jiǎng)討B(tài)調(diào)整訓(xùn)練樣本中各數(shù)據(jù)權(quán)重，每一次迭代增加不能正確學(xué)習(xí)樣本權(quán)重，降低能正確學(xué)習(xí)樣本權(quán)重，從而提升在整個(gè)訓(xùn)練樣本數(shù)據(jù)集上的學(xué)習(xí)正確率?；舅惴ㄈ缦隆?/p>

2.1 感染性疾病 有學(xué)者

建立并驗(yàn)證間接酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法用于定量檢測(cè)大鼠血清中抗埃博拉病毒雙特異性抗體(MBS77E)濃度，并進(jìn)行大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究，為MBS77E的臨床研究提供了支持。該學(xué)者進(jìn)一步

建立食蟹猴血清中抗西尼羅河病毒單抗MIL94的間接ELISA定量測(cè)定法，同時(shí)進(jìn)行食蟹猴體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)初步研究。

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件系統(tǒng)分析相關(guān)數(shù)據(jù);兩組患兒治療2個(gè)月一般診療數(shù)據(jù)變化情況其中計(jì)量資料用(±s)表示,并用t檢驗(yàn);兩組患兒并發(fā)癥發(fā)生情況其計(jì)數(shù)資料用(n,%)表示,并用X2檢驗(yàn);P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.11 其他疾病 研究發(fā)現(xiàn)

，臍血Eotaxin高表達(dá)水平(運(yùn)用ELISA檢測(cè))是影響嬰兒濕疹患病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，臍血Eotaxin水平對(duì)嬰兒濕疹的發(fā)生有一定的預(yù)測(cè)作用。

她是一位“被蒙住了雙眼的女子。在樹上，手持一支長長的樹枝，各種各樣代表不同身份職業(yè)的東西從上面落下——諸如權(quán)杖、書籍、冠冕、珠寶、武器等”（圖 4，F(xiàn)ortuna A）；另一個(gè)方案中，她是“坐在一個(gè)球體上的，被賦予了一對(duì)翅膀的女子”（Fortuna B）；還可以是“頭頂天球（Globo Celeste）手持豐饒角（Cornucopia）的女子”（Fortuna C）。

3 ELISA存在的不足與對(duì)策

3.1 在感染性疾病方面 基層血站主要是依靠酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法對(duì)血液進(jìn)行篩查，可在一定程度上檢出HBsAg、HCV、HIV，但仍存在部分弱陽性及灰區(qū)標(biāo)本，具有局限性

。對(duì)策：針對(duì)酶免檢測(cè)陰性標(biāo)本、弱陽性及灰區(qū)標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)，可檢出假陰性標(biāo)本，減少不確定性。在基層血站對(duì)無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本進(jìn)行篩查時(shí)，采用酶免檢測(cè)與核酸檢測(cè)平行篩查可提高血液篩查準(zhǔn)確性，減少血液傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)，有利于保障臨床輸血安全性。在用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法及膠體金免疫層析法檢測(cè)血清2019-nCoVIgM時(shí)，發(fā)現(xiàn)中高水平IgM型類風(fēng)濕因子易造成假陽性結(jié)果，針對(duì)陽性樣本進(jìn)行尿素解離有利于降低假陽性的發(fā)生概率

。筆者認(rèn)為針對(duì)實(shí)驗(yàn)室日常采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)各類肝炎病毒、艾滋病、梅毒等出現(xiàn)的陽性結(jié)果，要進(jìn)行復(fù)查，需采用另外一種方法(免疫化學(xué)發(fā)光法或膠體金免疫層析法)或另外一個(gè)廠家的ELISA試劑盒進(jìn)一步驗(yàn)證，結(jié)果一致后方可發(fā)送檢驗(yàn)報(bào)告。

3.2 試劑盒及操作方面 目前，我國自行研制的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法試劑盒存在一些問題，如研發(fā)的種類少、有的廠家試劑靈敏度低、不穩(wěn)定、重現(xiàn)性低。另外，在ELISA臨床應(yīng)用過程中，對(duì)于一些檢測(cè)的生物學(xué)樣本，可能存在個(gè)別干擾實(shí)驗(yàn)的因素，如筆者在健康體檢人群中，曾發(fā)現(xiàn)個(gè)別溶血標(biāo)本導(dǎo)致乙肝表面抗原呈現(xiàn)假陽性結(jié)果；此外，實(shí)驗(yàn)過程中影響因素較多，如試劑加入量、檢測(cè)時(shí)間、檢測(cè)溫度等沒有嚴(yán)格按試劑說明書執(zhí)行，檢測(cè)結(jié)果可能會(huì)出現(xiàn)假陰性情況，還可能會(huì)出現(xiàn)弱陽性及灰區(qū)。對(duì)策：試劑廠家增強(qiáng)自身研發(fā)能力和水平，增加檢測(cè)試劑盒種類、數(shù)量，提高檢測(cè)所需抗體和包被抗原的特異性，最大限度避免假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性；加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室人員技術(shù)培訓(xùn)，加入樣本及試劑量要精準(zhǔn)、洗液不能混用，加入量適當(dāng)，避免洗成“花板”，在限定時(shí)間內(nèi)使用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果。近年來，采用全自動(dòng)酶免分析儀和酶標(biāo)板快速孵育器相結(jié)合，能夠優(yōu)化操作流程，縮短檢測(cè)時(shí)間，提高工作效率

。

3.3 應(yīng)用范圍方面 有的試劑半衰期長，應(yīng)用范圍僅限于小的實(shí)驗(yàn)室診斷，限制了酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法的應(yīng)用，遠(yuǎn)不能滿足臨床分析的需求。對(duì)策：ELISA技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)在于優(yōu)化抗體制備和標(biāo)記技術(shù)，以及研發(fā)一些新的免疫分析方法等，研究者應(yīng)在提高免疫診斷的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值等基礎(chǔ)上力求創(chuàng)新，聚焦生命科學(xué)和環(huán)境科學(xué)發(fā)展的前沿領(lǐng)域，拓展能夠分析針對(duì)生命過程和環(huán)境毒理有重要內(nèi)源性和外源性物質(zhì)的新方法，促進(jìn)生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)的研究和發(fā)展，以期更好地促進(jìn)其在醫(yī)學(xué)上的研發(fā)，以便更精準(zhǔn)的服務(wù)于臨床。

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