劉艷春，梁 立，孟立寧，楊 曼，陳宏洋，韓愛勇，岳燕軍

食管鱗癌是消化道惡性腫瘤，流行病學(xué)調(diào)查顯示，食管鱗癌發(fā)病率及病死率與日俱增，已嚴重影響人民健康[1]。目前60%～70%的食管鱗癌患者確診時已達中晚期，失去了根治性手術(shù)的機會[2]。晚期食管鱗癌治療以放療或放療聯(lián)合化療為主，而不同個體對放化療的敏感度不同，因此患者預(yù)后也存在一定差異[3]。尋找敏感生物學(xué)標志物對晚期食管鱗癌患者的個體化治療具有重要意義[4]。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)是人體重要的細胞調(diào)控因子，參與調(diào)控多種病理生理過程[5]。研究顯示，TGF-β1信號通路上多位點與食管癌、胃癌等多種惡性腫瘤的易感性存在關(guān)聯(lián)[6]。本研究擬探究TGF-β1基因多態(tài)性與晚期食管鱗癌預(yù)后的相關(guān)性，旨在分析其預(yù)測晚期食管鱗癌預(yù)后的效果。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月—2020年6月我院收治的108例晚期食管鱗癌，其中男70例、女38例，年齡18～79(58.12±10.34)歲。納入標準：符合食管癌診斷標準[7]，經(jīng)內(nèi)鏡及組織病理學(xué)檢查確診為食管鱗癌；無手術(shù)指征，接受放療或放療聯(lián)合化療；年齡≥18歲，首次發(fā)病；預(yù)計生存時間≥3個月，卡氏功能狀態(tài)評分≥60分；獲得有效隨訪，臨床資料完整。排除標準：患有其他惡性腫瘤者；合并自身免疫性疾病者；伴嚴重肝、腎等臟器功能不全者；合并活動性消化道出血、嚴重腸道感染、休克者；未按治療方案規(guī)律治療及復(fù)查者。

1.2治療方法 108例接受單純放療者63例，放療聯(lián)合化療者45例。所有患者放療每周5次，每次劑量1.8 Gy或2.0 Gy，總劑量40.0～74.0 Gy。化療藥物為順鉑、紫杉醇或5-氟尿嘧啶，主要采用紫杉醇加順鉑化療方案：紫杉醇40～50 mg/m2、順鉑25～30 mg/m2，每周1次，共治療5～6周。

1.3TGF-β1基因型檢測 患者入院后收集外周血2 ml，使用聚合酶鏈式反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性檢測TGF-β1基因型。提取總DNA，擴增目的基因序列，上游引物序列5'-3'：CAGACTCTAGAGACTGTCAG；下游引物序列5'-3'：GTCACCAGAGAAAGAGGAC。PCR擴增反應(yīng)體系均為25 μl，其中含10×PCR Buffer 2.5 μl，2.5 mmol/L dNTPs 2.0 U，模板DNA為200 ng，TaqDNA聚合酶1.25 U，不足體積用滅菌雙蒸水補足至25 μl。置熱循環(huán)儀中94 ℃預(yù)變性5 min；再按下列程序循環(huán)35次，即94 ℃變性40 s、56 ℃退火1 min、72 ℃延伸1 min；末次循環(huán)后，72 ℃延伸5 min。酶切體系包括TGF-β1基因-509C/T位點擴增產(chǎn)物10 μl，用限制性內(nèi)切酶Bsu36Ⅰ6 U于37 ℃水浴酶切3 h。TGF-β 1基因-509C/T位點酶切產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳-溴乙啶染色法檢測，DNA標準物為DL-2000 Marker。

1.4研究方法 患者出院后每3個月門診隨訪1次，并行彩超或CT等檢查，隨訪時間12個月，記錄患者復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率和生存率。收集患者相關(guān)基線資料，分析影響晚期食管鱗癌患者預(yù)后的因素。

2 結(jié)果

2.1患者預(yù)后分析 108例隨訪期間死亡8例，局部進展9例，遠處轉(zhuǎn)移11例，共28例(25.93%)納入預(yù)后不良組；80例(74.07%)無進展生存，納入預(yù)后良好組。

2.2預(yù)后良好組和預(yù)后不良組基線資料比較 預(yù)后不良組年齡大于預(yù)后良好組,AJCC分期為Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)>2枚、TGF-β1 CT/TT基因型患者占比顯著高于預(yù)后良好組(P<0.05)，見表1。

表1 不同預(yù)后晚期食管鱗癌患者基線資料比較[例(%)]

2.3影響晚期食管鱗癌患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析 將晚期食管鱗癌患者預(yù)后不良作為因變量，將上述存在差異的單因素作為自變量，行多因素Logistic回歸分析，量化賦值見表2。結(jié)果顯示，年齡、AJCC分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)、TGF-β1基因型是晚期食管鱗癌患者預(yù)后的影響因素(P<0.05，P<0.01)。見表3。

表2 影響晚期食管鱗癌患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析量化賦值表

表3 影響晚期食管鱗癌患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析

3 討論

食管癌具有較高的病死率，患者預(yù)后一般較差，國內(nèi)食管癌病死率位居惡性腫瘤死因的第四位，病理類型以鱗癌為主[8-10]。放化療是治療晚期食管癌的主要方式，對改善患者預(yù)后具有重要意義[11]。但不同個體對放化療的敏感程度不同，因此患者預(yù)后也存在較大差異[12]。多項研究證實，單核苷酸多態(tài)性是影響個體間不同預(yù)后及放化療敏感性的重要遺傳學(xué)基礎(chǔ)[13]。研究顯示，TGF-β1基因多個單核苷酸位點與食管癌的易感性、患者生存時間及臨床分期密切相關(guān)[14]。

本研究結(jié)果顯示，預(yù)后不良組TGF-β1 CT/TT基因型患者占比顯著高于預(yù)后良好組，TGF-β1基因型為晚期食管鱗癌預(yù)后的影響因素。TGF-β1基因處于第19號染色體長臂上，具有多種生物學(xué)作用[15]。分子生物學(xué)研究顯示，TGF-β1基因第1外顯子多態(tài)性可使TGF-β1的正常轉(zhuǎn)錄和表達受限，進而影響相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸[16]。腫瘤細胞經(jīng)放射線照射后，TGF-β1基因表達會呈現(xiàn)升高趨勢，通過降低TGF-β1受體蛋白表達水平及放射線對核糖核酸的損傷修復(fù)，從而增加腫瘤細胞對放療的敏感性[17]。研究顯示，T等位基因為消化道腫瘤的遺傳易感基因，攜帶T等位基因的個體可促進TGF-β1的高度表達，對患者預(yù)后不利[18]。

本研究結(jié)果顯示，預(yù)后不良組年齡大于預(yù)后良好組,AJCC分期為Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)>2枚的患者占比顯著高于預(yù)后良好組，且年齡、AJCC分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)是晚期食管鱗癌患者預(yù)后的影響因素，與白文文等[19]研究結(jié)果相似。食管黏膜及黏膜下層含有豐富的毛細淋巴管網(wǎng)，因此食管癌患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險較高，羅何三等[20]研究顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)、轉(zhuǎn)移度及轉(zhuǎn)移區(qū)域數(shù)均是影響食管癌預(yù)后的重要因素。AJCC分期與腫瘤浸潤、分化、淋巴轉(zhuǎn)移等病理程度相關(guān)，是臨床治療方案選擇和預(yù)后判斷的重要依據(jù)。年齡對患者預(yù)后也會產(chǎn)生影響，老年患者常合并多種基礎(chǔ)疾病，機體代償能力較差，從而影響治療效果及預(yù)后。

綜上，TGF-β1基因多態(tài)性與晚期食管鱗癌患者預(yù)后密切相關(guān)，其中攜帶TGF-β1 CT、TT基因型患者會對預(yù)后產(chǎn)生影響，此外年齡、AJCC分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)也是晚期食管鱗癌患者預(yù)后的影響因素。