趙芳，李文香，武利勇，崔沙沙，武俠均，邢騫文，李研東

（河北省獸藥飼料工作總站，河北 石家莊 050035）

1 黃曲霉毒素的危害

近日， 一則女子肺部感染黃曲霉菌的新聞沖上熱搜， 起因竟是因秋收時(shí)接觸發(fā)霉玉米所致，其罪魁禍?zhǔn)拙褪屈S曲霉菌。 黃曲霉菌并不可怕，通過常規(guī)的殺菌方式均可消除，但由其產(chǎn)生的黃曲霉毒素， 卻是已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性最強(qiáng)的一種， 對(duì)包括人和若干動(dòng)物具有強(qiáng)烈的毒性， 其毒性作用主要是對(duì)肝臟造成不可逆的損傷。

黃曲霉毒素（Aflatoxin 簡(jiǎn)寫為AFB）是已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性最強(qiáng)的一種， 是二氫呋喃氧雜萘鄰?fù)难苌铩?主要存在于土壤、堅(jiān)果、特別是花生和核桃中，在玉米、大豆、稻谷、牛奶、奶制品、食用油等食品中會(huì)有黃曲霉毒素檢出，一般以熱帶和亞熱帶等南方高溫、高濕地區(qū)受污染最為嚴(yán)重。 黃曲霉毒素耐熱，一般烹調(diào)加工溫度下難以破壞。 黃曲霉毒素主要有B1、B2、G1、G2、M1、M2，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部、國(guó)家質(zhì)檢總局和市場(chǎng)監(jiān)督管理局的監(jiān)管中， 都規(guī)定黃曲霉毒素是相關(guān)食品的必檢項(xiàng)目之一。 黃曲霉毒素M1 和M2 主要存在于動(dòng)物性食品中，最常見的是鮮乳及乳制品中， 另外食用過量黃曲霉菌污染飼料的動(dòng)物，其腎臟、肝臟、蛋、肉中也可能檢出黃曲霉毒素殘留， 人如果食用含有大量黃曲霉毒素的食品則可能誘發(fā)病變，因此，黃曲霉毒素嚴(yán)重危害畜產(chǎn)品安全， 是行業(yè)重點(diǎn)監(jiān)控的風(fēng)險(xiǎn)因素之一。 考慮到黃曲霉毒素的強(qiáng)毒性和致癌性，應(yīng)該盡可能減少黃曲霉毒素的攝入。 但是，由于目前尚無法做到完全去除黃曲霉毒素， 只能將其控制在一個(gè)比較安全的水平，將對(duì)人和動(dòng)物的危害可能降至最低。

2 黃曲霉毒素的產(chǎn)生原因

黃曲霉毒素的產(chǎn)生與許多因素有關(guān)，條件適合細(xì)菌繁殖的時(shí)候，正常的飼料或食品就會(huì)被黃曲霉毒素污染，對(duì)動(dòng)物機(jī)體和人類產(chǎn)生一定程度的危害。

首先，要感染產(chǎn)毒的微生物。黃曲霉毒素已被證明是由曲霉屬，黃曲霉群中的黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的。其次，要有可產(chǎn)生毒素的基質(zhì)。黃曲霉毒素可污染多種食物， 如糧食、油料、水果、調(diào)味品、乳和乳制品、蔬菜、肉類等。在我國(guó)以玉米、花生和花生油污染最嚴(yán)重，其次是大米。 谷物中感染黃曲霉毒素的幾率相對(duì)較高，而飼料原料主要以玉米、大豆等植物源飼料為主， 所以動(dòng)物源性食品安全檢測(cè)中對(duì)黃曲霉毒素的關(guān)注程度也相對(duì)較高。 第三，產(chǎn)生黃曲霉毒素的環(huán)境條件。 黃曲霉生長(zhǎng)的適應(yīng)溫度范圍一般是12℃～42℃，最適溫度33℃，黃曲霉產(chǎn)毒的適應(yīng)溫度一般在24℃～28℃；適應(yīng)的最低生長(zhǎng)水分活度為0.78，最適為0.93～0.98。 因此，潮濕高溫的環(huán)境更易產(chǎn)生黃曲霉毒素的污染， 南方較北方多見，夏季較冬季多見。

3 黃曲霉毒素的檢測(cè)

如何確定食品和飼料中是否含有黃曲霉毒素，所含有的黃曲霉毒素是否在安全范圍之內(nèi)，這就需要對(duì)現(xiàn)有的監(jiān)測(cè)情況和方法進(jìn)行敘述。本文參考《GB 2761-2017 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》《GB 5009.22-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B 族和G 族的測(cè)定》《GB 31653-2021 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素污染控制規(guī)范》《GB/T 30955-2014飼料中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法》等，對(duì)飼料、畜產(chǎn)品、乳制品、食品中黃曲霉檢測(cè)方法進(jìn)行概述。

現(xiàn)行有效的黃曲霉毒素的檢測(cè)方法主要有膠體金檢測(cè)法、酶聯(lián)免疫法、熒光免疫法等以抗原抗體反應(yīng)為基礎(chǔ)的免疫學(xué)檢測(cè)方法， 常用于黃曲霉毒素的快速檢測(cè)和篩選篩查。 而精確定量的檢測(cè)方法主要以液相色譜、 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜等基于高端檢測(cè)設(shè)備為基礎(chǔ)的儀器檢測(cè)方法。 本文以液相色譜法為代表對(duì)檢測(cè)流程進(jìn)行簡(jiǎn)單介紹。

3.1 樣品預(yù)處理

稱取5 克玉米試樣(精確至0.01 克)于50 毫升離心管中， 加入20.0 毫升甲醇-水溶液(70+30)，渦旋混勻，用均質(zhì)器10000 轉(zhuǎn)/分鐘上下震蕩均質(zhì)3 分鐘，在6000 轉(zhuǎn)/分鐘下離心20 分鐘。準(zhǔn)確移取4 毫升上述上清液，加入10 毫升超純水，混勻，待凈化。

3.2 加標(biāo)樣品

待凈化液中加入50 微升的10 納克/毫升黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)工作液，樣品的加標(biāo)濃度為0.5 納克/克。

3.3 SPE 凈化

通過SPE 固相萃取小柱去除樣品中不需要的成分和對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響的因素。 把雜質(zhì)對(duì)樣品的影響降到可接受的范圍之內(nèi)， 以滿足前處理過程的需求。 收集樣品到收集瓶中，用超純水定容至1.0 毫升，用0.22 微米濾膜過濾，待檢測(cè)。

3.4 高效液相色譜-熒光檢測(cè)條件

色譜柱：C18，柱長(zhǎng)150 毫米，內(nèi)徑4.6 毫米，粒徑5 微米，或性能相當(dāng)者；流動(dòng)相：超純水：甲醇+乙腈（50+50）=68∶32；流速：1.0 毫升/分鐘；柱后衍生：光衍生；熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)360 納米， 發(fā)射波長(zhǎng)440 納米； 柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20 微升。

圖1 A 黃曲霉毒素B 族標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 B 空白樣品色譜圖

3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在黃曲霉毒素B1 和B2 的出峰時(shí)間處沒有峰，說明該樣品中沒有黃曲霉毒素B1 和B2 檢出。

加標(biāo)樣品的色譜圖。 通過色譜峰面積和標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積對(duì)比計(jì)算出樣品中含有的黃曲霉毒素的含量。 如果毒素含量超過標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的定量限，即可判定為含有黃曲霉毒素。

4 預(yù)防

黃曲霉毒素污染的食物，通過高溫蒸煮或一般的加工手段很難去除， 因此在日常生活中，不要吃發(fā)生霉變的食物，尤其是發(fā)霉的玉米、 花生、 干果等， 這類食品極易發(fā)生黃曲霉超標(biāo)甚至中毒的事件。 同時(shí)梅雨季節(jié)，收取玉米、花生等農(nóng)作物的過程中盡量避免直接接觸發(fā)霉的作物或者種子， 要注意收取和加工的環(huán)境通風(fēng)， 盡量站在上風(fēng)口， 同時(shí)做好個(gè)人防護(hù)（如戴密閉性較好的口罩）。購(gòu)買乳品、 零食等食物時(shí)盡量選擇正規(guī)渠道的產(chǎn)品， 注意觀察保質(zhì)日期，觀察食物有無霉變。

圖3 C 加標(biāo)樣品色譜圖