楊 洋，蘭 晶，王思寧，張竣琦，荀 洲，萬(wàn)玉秋，謝 芳

（1. 蘇州大學(xué)蘇州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇 蘇州 215123；2. 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外科，江蘇 蘇州215006；3. 蘇州大學(xué)蘇州醫(yī)學(xué)院病理與病理生理學(xué)系，江蘇 蘇州 215123）

目前，乳腺癌（breast cancer）是全球發(fā)病率最高的第一大癌，在女性癌癥患者中死亡率位居第一，嚴(yán)重危害著女性生命健康[1]。

免疫微環(huán)境是腫瘤細(xì)胞賴(lài)以生存的體內(nèi)環(huán)境，也是腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移以及生物治療失敗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。腫瘤免疫微環(huán)境中，既有參加抗腫瘤的免疫細(xì)胞及其所分泌的細(xì)胞因子；也有眾多的免疫抑制細(xì)胞、負(fù)性免疫分子及相關(guān)細(xì)胞因子。這些在維持腫瘤微環(huán)境、抑制腫瘤免疫、協(xié)助腫瘤細(xì)胞逃避免疫應(yīng)答中起著極為重要的作用。

調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（regulatory B cell, Breg）通過(guò)分泌細(xì)胞因子及其表達(dá)的免疫負(fù)性分子在腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮著重要作用，參與腫瘤的免疫逃逸進(jìn)程。本文將總結(jié)Breg與乳腺癌免疫微環(huán)境中浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞、腫瘤免疫抑制分子及細(xì)胞因子之間的相互關(guān)系，闡述其生物學(xué)作用，為乳腺癌的免疫治療發(fā)展提供新的方向。

1 Breg的分型

Breg最早在慢性腸炎小鼠中被發(fā)現(xiàn)，其作為一群高表達(dá)CD1d分子的B細(xì)胞亞群，通過(guò)分泌白細(xì)胞介素10（interleukin 10, IL-10）調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答[2]，被稱(chēng)為B10細(xì)胞。隨著研究的深入，更多的表型被確定，比如CD1dhiCD5+CD19hiBreg（B10細(xì)胞）[3]、CD21hiCD23hiCD24hiBreg（T2-MZP細(xì)胞）[4]、CD19+CD24hiCD38hiBreg（未成熟細(xì)胞）[5]等。雖然Breg在人或鼠中有不同表型，但其都能分泌高水平IL-10。還有學(xué)者[6]認(rèn)為Breg是“反應(yīng)性”亞群，即B細(xì)胞在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境刺激下分化而成。

2 Breg與細(xì)胞因子

B r e g 可抑制腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（tumor infiltrating lymphocyte, TIL），如CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及單核細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cell, DC）、NK細(xì)胞等[7]。進(jìn)一步研究[6]發(fā)現(xiàn)，Breg主要通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子，其中較為主要的是IL-10、IL-35及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β, TGF-β）來(lái)調(diào)控大部分免疫細(xì)胞的功能。除上述三種細(xì)胞因子外，亦有一群顆粒酶B（granzyme B, GrB）+Breg，通過(guò)分泌GrB抑制Th1和Th17細(xì)胞反應(yīng)，并通過(guò)降解TCR ζ鏈來(lái)減少CD4+T細(xì)胞增殖[8-9]。

IL-10+Breg作為最早被報(bào)道、研究最為全面的Breg亞群，已發(fā)現(xiàn)其可以通過(guò)分泌IL-10抑制Th1、Th17和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)，并將初始CD4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為T(mén)reg群[6,10]。近年有報(bào)道[11]顯示IL-10在乳腺癌組織中高表達(dá)并與IL-18呈正相關(guān)，其又與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，表明它們可能協(xié)同促進(jìn)乳腺癌的發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。IL-10在乳腺癌中的作用具有雙重性，其既可通過(guò)促進(jìn)CD4+T細(xì)胞活化和增殖，從而促進(jìn)干擾素-γ（interferon-gamma,IFN-γ）分泌并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡，又可抑制抗原呈遞細(xì)胞的作用，從而使腫瘤細(xì)胞得以存活[12]。目前IL-10在乳腺癌中的作用雖有一定爭(zhēng)議，但其促進(jìn)腫瘤和抑制腫瘤的特性是已被證實(shí)的，因此針對(duì)IL-10激動(dòng)劑和拮抗劑可能可以通過(guò)不同的機(jī)制對(duì)乳腺癌產(chǎn)生治療作用[13]。

作為IL-12家族中能夠調(diào)控免疫應(yīng)答的獨(dú)特細(xì)胞因子，IL-35可以通過(guò)控制腫瘤微環(huán)境內(nèi)的免疫細(xì)胞（T細(xì)胞、B細(xì)胞、DC、巨噬細(xì)胞等）活性來(lái)調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)展進(jìn)程，其作為宿主免疫反應(yīng)和腫瘤生長(zhǎng)的重要介質(zhì)，具有特異性免疫抑制活性，通過(guò)調(diào)節(jié)局部炎癥反應(yīng)和抗腫瘤免疫發(fā)揮作用[14-15]。在乳腺癌中，IL-35的表達(dá)水平與腫瘤分期及預(yù)后有顯著關(guān)系，TIL中IL-35表達(dá)水平與臨床病理特征及不良預(yù)后顯著相關(guān)，高血漿IL-35水平還與TNM分期和陽(yáng)性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[16]。

TGF-β是一類(lèi)基因高度保守的信號(hào)分子，其主要通過(guò)與其對(duì)應(yīng)受體形成受體復(fù)合物激活下游SMAD依賴(lài)性轉(zhuǎn)錄事件進(jìn)而促進(jìn)癌癥的轉(zhuǎn)變[17-18]。近年來(lái)，多項(xiàng)研究證明TGF-β通過(guò)不同方式促進(jìn)腫瘤發(fā)展。SenGupta等[19]研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β與生長(zhǎng)調(diào)節(jié)性癌基因（growth-regulated oncogene, GRO）趨化因子組合發(fā)生作用，協(xié)調(diào)募集中性粒細(xì)胞至三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer, TNBC），促進(jìn)乳腺癌腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。Zhao等[20]發(fā)現(xiàn)TGF-β通過(guò)上調(diào)表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor, EGFR）表達(dá)反式激活EGFR信號(hào)傳導(dǎo)，并促進(jìn)乳腺癌的遷移和侵襲。

3 Breg與腫瘤浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞

近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)Breg與叉頭/翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3（forkhead box protein 3, Foxp3）+Treg細(xì)胞的分化關(guān)系極為密切，二者通過(guò)多種機(jī)制共同抑制免疫反應(yīng)。研究[21-23]還顯示，Breg分泌的多種細(xì)胞因子（IL-10、IL-35、TGF-β）具有誘導(dǎo)Treg分化發(fā)育的作用。Olkhanud等[23]最早報(bào)告了一群主要通過(guò)分泌TGF-β以誘導(dǎo)Foxp3+Treg產(chǎn)生及促進(jìn)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的獨(dú)特Breg亞群，稱(chēng)之為腫瘤誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（tumor-evoked Breg, tBreg）。此外，Guan等[24]研究發(fā)現(xiàn)Breg表面表達(dá)的免疫調(diào)節(jié)分子[程序性死亡配體1（programmed death ligand-1, PDL1）]亦可介導(dǎo)Treg在乳腺癌發(fā)展中的促進(jìn)作用。Ishigami等[25]研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌TIL中CD25+Breg和IL-10+Breg數(shù)量與Foxp3+Treg數(shù)量密切相關(guān)，表明Breg可能會(huì)誘導(dǎo)TIL中的Treg對(duì)抗腫瘤免疫并促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

亦有研究[26]顯示，CD1d+Breg可誘導(dǎo)恒定自然殺傷T細(xì)胞（invariant nature killer T, iNKT）細(xì)胞的分化和抑制能力；而同源iNKT細(xì)胞有助于脾臟中CD1d+CD5+IL-10+B細(xì)胞的擴(kuò)增[27]，表明Breg與iNKT細(xì)胞可能具有一定的相互促進(jìn)作用。

4 Breg與免疫抑制分子

在對(duì)乳腺癌患者局部組織中的細(xì)胞毒性T細(xì)胞（cytotoxic T cell， CTL）進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，部分病例中CTL表面高表達(dá)程序性死亡受體1（programmed death receptor-1, PD-1）、T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白-3（T-cell immunoglobulin and mucin-domain containing molecule-3, TIM-3）、T細(xì)胞免疫球蛋白和ITIM域（T cell immunoglobulin and ITIM domain protein, TIGIT）等負(fù)性共刺激分子，最終轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)能或衰竭狀態(tài)。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，PD-1/PD-L1、TIM-3、TIGIT等負(fù)性共刺激分子通過(guò)與其配體結(jié)合導(dǎo)致乳腺癌免疫微環(huán)境中的免疫細(xì)胞發(fā)生“衰竭”，抑制患者的免疫應(yīng)答。PD-1在腫瘤免疫中負(fù)向調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，其與PD-L1結(jié)合，通過(guò)抑制CTL活化與功能以及減少炎癥細(xì)胞因子分泌等方式聯(lián)合抑制宿主的抗腫瘤免疫[28]。在此前的研究[29]中已經(jīng)證實(shí)，乳腺癌細(xì)胞株表達(dá)的PD-L1會(huì)刺激CD19+B細(xì)胞分化為CD19+CD24+CD38+Breg亞型，這群細(xì)胞可分泌IL-10參與免疫抑制，且在高濃度PD-L1的刺激下分泌IL-10的水平顯著升高，進(jìn)一步說(shuō)明了PD-L1與Breg對(duì)乳腺癌免疫微環(huán)境的聯(lián)合作用。

TIM-3是一種在多種免疫細(xì)胞上表達(dá)的免疫檢查點(diǎn)分子，通過(guò)與其配體接觸可以減少細(xì)胞增殖，減少有效細(xì)胞因子的產(chǎn)生并促進(jìn)效應(yīng)T細(xì)胞的凋亡[30]。Cheng等[31]發(fā)現(xiàn)下調(diào)TIM-3的表達(dá)可顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，而上調(diào)TIM-3可以增強(qiáng)細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，因而TIM-3可能是乳腺癌預(yù)防和治療的有效新靶點(diǎn)。

TIGIT作為一種Ⅰ型跨膜蛋白，可在癌癥免疫周期的多個(gè)步驟中抑制免疫細(xì)胞反應(yīng)[32]。TIGIT+Breg被報(bào)道可以高效表達(dá)多種免疫調(diào)節(jié)分子，包括IL-10、PD-L1、TGF-β1和GrB，以及表面CD39/73和TIM-1，并且可以抑制DC的成熟，其作為免疫治療的新興靶點(diǎn)未來(lái)可期[33]。

關(guān)于Breg與PD-1/PD-L1的關(guān)系研究較多。Khan等[34]的研究表明PD-L1hiBreg能夠明顯抑制濾泡輔助性T細(xì)胞（follicular helper T cells, Tfh）的擴(kuò)增和分化并抑制自身免疫性疾病，是體液免疫的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。在近期的研究[35]中發(fā)現(xiàn)，來(lái)自乳腺癌的可溶性PD-L1（sPD-L1）可以進(jìn)入腫瘤微環(huán)境或釋放至血液中，上調(diào)CD19+B細(xì)胞上CD24、CD38的表達(dá)并促進(jìn)Breg分泌IL-10。關(guān)于TIM-1+Breg、TIGIT+Breg對(duì)于介導(dǎo)免疫抑制和誘導(dǎo)免疫耐受的意義也多有報(bào)道，表明Breg通過(guò)分子信號(hào)抑制免疫的作用十分重要[36-37]。Breg亦可以通過(guò)表面表達(dá)TIM-1與TIM-1抗體連接等途徑，感知凋亡細(xì)胞的水平并進(jìn)行自我維持和擴(kuò)增[37]。

5 結(jié)語(yǔ)

Breg是繼調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell,Treg）之后在腫瘤免疫中發(fā)現(xiàn)的又一抑制性免疫細(xì)胞亞群，其在腫瘤微環(huán)境中對(duì)于腫瘤免疫逃避發(fā)揮著重要作用。然而，目前針對(duì)Breg在乳腺癌免疫微環(huán)境中具體作用機(jī)制的研究及其與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展之間關(guān)系的報(bào)道較少且不夠全面。因此，將Breg作為乳腺癌免疫治療的靶點(diǎn)困難重重。但我們相信，隨著人們對(duì)Breg進(jìn)行進(jìn)一步深入研究，其對(duì)于乳腺癌免疫治療的意義將逐漸涌現(xiàn)，未來(lái)有望成為乳腺癌免疫治療又一新興策略。