童 星 張 咪

江蘇雪豹日化有限公司，江蘇無錫，214400

紫外線（UV）屬于太陽光中的不可見光，根據波長不同，可以分為UVA、UVB、UVC、UVD四種，其中對皮膚有危害的紫外線輻射主要是UVA和UVB。

當人體皮膚受到超過耐受量的UVA和UVB照射后，會促使細胞釋放多種炎癥介質，導致真皮毛細血管擴張充血、皮下組織水腫并激發(fā)炎癥，出現刺痛、紅斑、脫屑瘙癢等不適癥狀。此外，紫外線侵入皮膚后，還在表皮細胞內外產生大量氧自由基，造成角質形成細胞和成纖維細胞活動異常，引起皮膚光老化，使皮膚形成皺紋、失去彈性、色素改變等[1-2]。

在陽光強烈照射下，即使做了防曬工作，也無法完全避免紫外線的傷害，所以曬后對皮膚進行修復也尤為重要。目前，市場上的曬后修復產品多以植物提取物中的功效成分對曬后受損的細胞進行修復，如黃酮類化合物、苯丙素類化合物、多酚、類胡蘿卜素等，可以起到清除自由基、抑制黑色素生成與沉積、延緩老化等作用。

玫瑰茄花又名洛神花，含有花青素、多酚酸、有機酸、黃酮等成分，具有抗氧化、抗腫瘤、降血脂、降血壓等生物活性，黃瓊等研究發(fā)現，玫瑰茄多糖具有較好的還原能力，能夠有效清除?OH、O2-?和DPPH自由基[3]。金花葵是秋葵屬草本植物，具有抗氧化、鎮(zhèn)痛消炎、降血脂、免疫調節(jié)等藥理作用，研究發(fā)現其富含的黃酮類化合物具有較強的抗氧化活性和良好的抗炎作用，對酪氨酸酶活性也有一定的抑制作用[4]。本研究以玫瑰茄花提取物、金花葵提取物為主要修復成分，研制了一種曬后修復組合物，通過自由基清除效果測試、曬后修復效果測試、皮膚刺激試驗，對所研制樣品的曬后修復效果進行功效評價。

1 實驗試劑與設備

無水乙醇、鄰二氮菲、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硫酸亞鐵、30%過氧化氫，分析純，國藥集團化學試劑有限公司；DPPH，優(yōu)級純，Sigma；2,4-二硝基氯苯，99%，Aldrich；組氨酸ELISA試劑盒，上海一研生物科技有限公司。

電子天平，上海天美天平儀器有限公司；水浴恒溫振蕩器，常州市億能實驗儀器廠；旋轉蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；數控超聲機，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；實驗專用微波爐，南京杰全微波設備有限公司；紫外分光光度計，上海儀電分析儀器有限公司；真空冷凍干燥器，上海葉拓儀器儀表有限公司。

2 實驗方法

2.1 玫瑰茄提取物的制備

將玫瑰茄花自然干燥，碾磨成粉，加入一定量75%乙醇，使玫瑰茄花粉和乙醇的重量比為1:50，300W微波處理5min，再500W超聲提取15min，過濾收集提取液，真空冷凍干燥過夜。

2.2 金花葵提取物的制備

將金花葵自然干燥，碾磨成粉，加入一定量水，使金花葵粉和水的重量比為1:20，加熱回流提取1.5 h后，再加入5倍重量的水，加熱回流提取1 h，過濾，合并收集兩次提取液，真空冷凍干燥過夜。

2.3 曬后修復組合物的制備

配制不同配比的曬后修復組合物，各組分及含量見表1，將不同配方的曬后修復組合物溶于水，制成5%的水溶液（w/w），作為待測樣品。

表1 曬后修復組合物配方

2.4 曬后修復組合物自由基清除效果測試

2.4.1 羥自由基清除試驗

在具塞試管中，加入0.5 ml濃度為0.75 mmol/L的鄰二氮菲無水乙醇溶液，再分別加入2 ml濃度為0.2 mol/L的磷酸鹽緩沖液（pH=7.4）和1 ml待測樣品，充分混勻后加入0.5 ml濃度為0.75 mmol/L的FeSO4?7H2O溶液，再次混勻后加入0.5ml濃度為0.01%的H2O2（v/v），37℃水浴1h，測定536 nm處的吸光度值，按公式計算羥自由基清除率。

式中：Ax是待測樣品的吸光度值，Ab是以蒸餾水替代H2O2的損傷組的吸光度值，An是以蒸餾水為空白組的吸光度值。

2.4.2 DPPH自由基清除試驗

在比色皿中加入3 ml濃度為0.2 mmol/L的DPPH無水乙醇溶液，再加入1ml待測樣品混勻，室溫避光反應30 min，測定其在517 nm處的吸光度值，記為Ax；以3 ml無水乙醇和1 ml待測樣品作為空白對照，測定吸光度值，記為Ab；以3 ml DPPH無水乙醇溶液和1 ml無水乙醇溶液作為對照組，測定吸光度值，記為An，按公式計算DPPH自由基清除率。

2.5 曬后修復效果測試

選取體重300～350 g的SD大鼠，雌雄各半。將SD大鼠隨機分為空白組、模型組、實驗組，每組20只。試驗前24 h將大鼠背部去毛，面積約為3 cm×3 cm，除空白組外，其余各組用2,4-二硝基氯苯在大鼠背部皮膚造模，并用紫外線照射12 h，在造模成功后（皮膚表現為干燥、脫屑、燒灼、刺痛、腫脹、紅斑等癥狀）的0 h、8 h，實驗組取按配方1～8制備的待測樣品0.5 ml，涂抹大鼠背部的脫毛區(qū)，涂抹范圍約2.5 cm×2.5 cm，空白組、模型組用去離子水涂抹，每天給藥一次，連續(xù)給藥14 d，于第15天觀察各組大鼠背部皮膚情況，按照表2的評價標準進行記錄，并檢測各組大鼠樣品中的血清組氨酸（HIS）濃度。

表2 皮膚情況評價標準

2.6 多次皮膚刺激性試驗

選取體重2.5～3 kg的健康兔子，雌雄各半，試驗前將兔子背部脊柱兩側被毛剪掉，去毛范圍為3 cm×3 cm，涂抹面積2.5 cm×2.5 cm。取按配方1～8制備的樣品約0.5 ml，涂抹在兔子一側皮膚上，另一側以去離子水作為對照，每天涂抹1次，連續(xù)涂抹14 d。從第2天開始，每次涂抹前應剪毛，用水清除殘留受試物，1 h后觀察結果，按表3進行評分，對照區(qū)和試驗區(qū)同樣處理。按公式計算每天每只動物平均積分，以表4判定皮膚刺激強度。

表3 皮膚刺激反應評分

表4 皮膚刺激強度分級

3 實驗結果

3.1 自由基清除效果

由表5可見，按配方1～3制備的曬后修復組合物樣品均含有玫瑰茄花提取物、金花葵提取物，對羥自由基和DPPH自由基的清除率均在80%以上，配方4和配方5所制備樣品含單一的玫瑰茄花提取物或金花葵提取物，自由基清除率都低于50%，表明玫瑰茄花提取物和金花葵提取物具有一定的自由基清除效果，且兩者組合使用效果更強；配方6以等量的金縷梅提取物代替了金花葵提取物，自由基清除率都低于60%，表明金花葵提取物的自由基清除效果優(yōu)于金縷梅提取物；與配方1相比，配方7和配方8不含酪朊酸鈉，其所制備樣品的自由基清除率低于60%，表明酪朊酸鈉可以增強玫瑰茄花提取物和金花葵提取物的相容性，提高組合物的自由基清除效果。

表5 曬后修復組合物自由基清除效果

3.2 組合物曬后修復效果

由表6可見，配方1～3制備的曬后修復組合物樣品，涂抹在造模成功后0 h的受損皮膚上，可以顯著降低血清組氨酸（HIS）濃度，減輕炎癥反應，顯著改善受損皮膚的干燥、脫屑、腫脹、紅斑等癥狀；配方4～8制備所得組合物樣品對炎癥和皮膚情況也有一定的改善效果，但改善效果明顯低于配方1～3制備所得樣品。

表6 造模成功后0 h修復效果

由表7可見，配方1～3制備的曬后修復組合物樣品，涂抹在造模成功后8 h的受損皮膚上，仍然可以顯著降低HIS濃度，減輕炎癥反應，顯著改善受損皮膚的干燥、脫屑、腫脹、紅斑等癥狀；配方4～8制備所得組合物樣品，對HIS濃度沒有顯著的影響，對皮膚的改善效果也較差。

表7 造模成功后8 h修復效果

3.3 多次皮膚刺激試驗結果

由表8可見，配方1～3制備的曬后修復組合物樣品，在觀察期內，受試兔子皮膚未見紅斑、水腫等異常反應，未出現其他不良反應癥狀，表明所制備樣品對皮膚無刺激性；配方4～8所制備的樣品，在涂抹1 h后有輕度紅斑和水腫癥狀，24 h后可以消除。

表8 皮膚刺激試驗結果

4 結語

本研究研制了一種曬后修復組合物，以玫瑰茄花提取物、金花葵提取物和酪朊酸鈉為修復成分，通過自由基清除效果測試、曬后修復效果測試、皮膚刺激試驗，對所研制樣品的曬后修復效果進行相關功效評價。結果顯示，含玫瑰茄花提取物、金花葵提取物和酪朊酸鈉的5%組合物水溶液，對羥自由基和DPPH自由基的清除率均在80%以上；酪朊酸鈉與單一玫瑰茄花提取物或單一金花葵提取物的組合物，其5%組合物水溶液對羥自由基和DPPH自由基的清除率均低于50%，表明玫瑰茄花提取物和金花葵提取物具有一定的自由基清除效果，且兩者組合使用效果更強；當組合物中不含酪朊酸鈉時，其自由基清除率有所下降，表明酪朊酸鈉可以增強玫瑰茄花提取物和金花葵提取物的相容性，提高組合物的自由基清除效果；組合物中三者協(xié)同作用，在曬后8h使用仍具有顯著的修復效果，可以起到長效的抗炎、消腫、清除自由基作用，對皮膚無刺激，作為功效成分添加于曬后修復化妝品中，具有廣闊的應用前景。