何嘉雯, 溫家欣, 劉亞雄, 胡佳哲, 曹雅靜, 賴宇紅

(廣東省藥品檢驗所, 廣東 廣州 510663)

涼茶是兩廣地區(qū)流行的傳統(tǒng)飲料,一般認(rèn)為具有清熱解毒、祛濕消滯的功效。有不法商家受利益驅(qū)使,在涼茶中非法添加感冒藥、糖皮質(zhì)激素等以增強宣稱的功效,這種行為具有潛在的食品安全風(fēng)險,并嚴(yán)重影響市場秩序。若誤服含有解熱鎮(zhèn)痛藥的涼茶,可能掩蓋發(fā)熱、咽痛等癥狀,延誤疾病治療。另一方面,隨著監(jiān)管力度加大,涼茶非法添加藥物的種類不斷增加,不限于已知的以對乙酰氨基酚為代表的解熱鎮(zhèn)痛藥,涉及抗組胺藥、抗生素、平喘藥、鎮(zhèn)咳藥等,具有多樣性、復(fù)雜性和未知性。

目前,涼茶非法添加藥物的檢測方法有薄層色譜法[1]、酶聯(lián)免疫法[2]、高效液相色譜法[1,3,4]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[5-9]等。薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、液相色譜法靈敏度較低,檢測成分較少。液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法是非法添加檢測的經(jīng)典方法,被BJS 201713等現(xiàn)行補充檢驗方法采用。此類方法一般利用多反應(yīng)離子監(jiān)測模式進行靶向檢測,在新成分或未知成分識別上有一定的局限性。孫樹周等[5]發(fā)現(xiàn)的茶堿、噴托維林和胡佳哲等[6]發(fā)現(xiàn)的甲硝唑、紅霉素是補充檢驗方法外成分,超出標(biāo)準(zhǔn)范圍,在標(biāo)準(zhǔn)檢驗中不能被有效識別。此外,若同時檢測上述多種藥物,需采用多個方法,檢驗效率低。因此,三重四極桿質(zhì)譜的靶向檢測模式已不能滿足新形勢下涼茶非法添加藥物的檢驗需求,亟須建立一個覆蓋藥物盡量多的跨類別多成分高通量篩查方法。

靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜(Orbitrap HRMS)是近年研究熱點,具有高分辨率、高質(zhì)量精度優(yōu)勢,采集的質(zhì)譜信息豐富,可實現(xiàn)上百種藥物同時檢測和非靶向未知物篩查,在農(nóng)獸藥殘留、環(huán)境污染物、化妝品致敏物質(zhì)高通量篩查中已有較成熟的研究[10-18],但對涼茶非法添加藥物篩查的研究較少。劉桂聯(lián)等[9]利用Orbitrap HRMS快速篩查和確證涼茶中56種降脂、降壓類藥物,給出了示范性研究。然而非法添加藥物遠多于56種,現(xiàn)有研究仍未覆蓋涼茶高風(fēng)險添加藥物,未發(fā)揮高分辨質(zhì)譜的明顯優(yōu)勢。

參考其他領(lǐng)域的研究經(jīng)驗,結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫可以極大限度發(fā)揮高分辨質(zhì)譜在高通量分析中的優(yōu)勢。本文通過調(diào)研,針對性地選定解熱鎮(zhèn)痛、抗組胺、抗菌、消炎、減肥等167種非法添加高風(fēng)險藥物,建立高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫。優(yōu)化樣品前處理、色譜-質(zhì)譜條件,建立超高效液相色譜-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜快速篩查和確證涼茶中167種藥物的方法,實現(xiàn)了非法添加藥物的高通量、高精度篩查,突破當(dāng)前檢測局限,為打擊涼茶非法添加提供新的技術(shù)支撐。

1 儀器與方法

1.1 儀器與試劑

超高效液相色譜儀VANQUIVE Optiplex、四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜Q Exactive Orbitrap和TraceFinder 4.1軟件(美國Thermo Scientific公司);分析天平MS205DU(瑞士Mettler公司);超純水發(fā)生器Mili-Q Advantage A10(美國Millipore公司);超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

乙腈、甲醇(色譜純)購自美國Honeywell公司,甲酸、甲酸銨、乙酸銨、冰醋酸(色譜純)購自上海麥克林生化科技有限公司。167種藥物標(biāo)準(zhǔn)品包括解熱鎮(zhèn)痛藥22種(詳見表1中序號1～22)、抗菌藥物47種(23～69)、激素41種(70～110)、抗組胺藥物15種(111～125)、鎮(zhèn)咳平喘藥14種(126～139)、消化系統(tǒng)用藥13種(140～152)、減肥藥7種(153～159)和其他類8種(160～167),分別購自中國食品藥品檢定研究院、德國Dr. Ehrenstorfer公司和上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

245批涼茶樣品購自廣東省內(nèi)涼茶店,均為液體涼茶。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品10 mg,用甲醇溶解并定容至10 mL,不溶的標(biāo)準(zhǔn)品用冰醋酸或乙腈溶解后再用甲醇定容,配制成單標(biāo)準(zhǔn)儲備液,于-20 ℃冰箱保存。

取適量各單標(biāo)準(zhǔn)儲備液,用50%(v/v)甲醇水溶液配制成質(zhì)量濃度為100 ng/mL的數(shù)據(jù)庫采集用標(biāo)準(zhǔn)溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

分別取適量對乙酰氨基酚、土霉素、環(huán)丙沙星、磺胺間甲氧嘧啶、氯霉素、蘭索拉唑、紅霉素、地塞米松單標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用50%(v/v)甲醇水溶液配制成質(zhì)量濃度為10 ng/mL和50 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3 樣品溶液制備

取樣前搖勻樣品,稱取1 g,置于20 mL容量瓶中,加入適量50%(v/v)甲醇水溶液,超聲提取15 min。取出放冷,用50%(v/v)甲醇水溶液定容至20 mL, 0.22 μm濾膜過濾,待測。

1.4 分析條件

色譜柱:Waters XBridge BEH C18柱(100 mm×2.1 mm, 2.5 μm),柱溫40 ℃,流動相A 0.1%(v/v)甲酸水溶液,流動相B 0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液,流速0.3 mL/min。梯度洗脫程序:0～1.0 min, 5%B; 1.0～17.0 min, 5%B～95%B; 17.0～20.0 min, 95%B; 20.0～20.5 min, 95%B～5%B; 20.5～25.0 min, 5%B。進樣量5 μL。

噴霧電壓3.50 kV(正離子)和-3.20 kV(負離子),毛細管溫度320 ℃;管狀透鏡電壓50.0 V,輔助氣加熱溫度350 ℃,鞘氣流速4.55 L/min,輔助氣流速3 L/min。掃描類型為全掃描/數(shù)據(jù)依賴二級質(zhì)譜掃描(Full MS/dd-MS2),正、負離子同時轉(zhuǎn)換,關(guān)閉目標(biāo)離子列表(inclusion)。Full MS參數(shù):分辨率70 000,自動增益控制目標(biāo)離子數(shù)(AGC target)1.0×106,最大離子注入時間(IT)100 ms,掃描范圍m/z100～1 000。dd-MS2參數(shù):分辨率17 500, AGC target為2.0×105, IT為80 ms,循環(huán)次數(shù)(Loop count)5,歸一化碰撞能量(NEC)20%、40%和60%,開啟動態(tài)排除10 s。

1.5 質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫的建立

注入數(shù)據(jù)庫采集用標(biāo)準(zhǔn)溶液,按儀器分析條件采集每個藥物的質(zhì)譜圖,使用儀器工作站提取保留時間、母離子和碎片離子精確質(zhì)量數(shù)等數(shù)據(jù)。將數(shù)據(jù)導(dǎo)入TraceFinder軟件,編輯藥物化學(xué)信息,建立167種藥物的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫,主要信息見表1。

1.6 篩查確證方法

注入樣品溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控溶液,按儀器分析條件采集數(shù)據(jù)。將數(shù)據(jù)導(dǎo)入TraceFinder軟件,與數(shù)據(jù)庫中藥物的保留時間、母離子和碎片離子精確質(zhì)量數(shù)進行自動篩查匹配。當(dāng)滿足母離子精確質(zhì)量數(shù)偏差小于5×10-6(5 ppm),保留時間偏差小于20 s,至少一個碎片離子精確質(zhì)量數(shù)偏差小于5×10-6,可判斷為檢出。檢出成分的二級質(zhì)譜圖與數(shù)據(jù)庫收錄的標(biāo)準(zhǔn)品譜圖比對一致,可確證為同一物質(zhì)。若檢出地塞米松或倍他米松,需更換BJS 201713色譜條件進行區(qū)分?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)質(zhì)控溶液為隨行的質(zhì)量監(jiān)控,當(dāng)檢出限濃度的8種成分全部檢出時,儀器靈敏度和質(zhì)量軸穩(wěn)定,篩查結(jié)果可信度高。

2 結(jié)果與討論

2.1 數(shù)據(jù)庫成分的選擇

涼茶跨類別添加藥物的問題非常突出,根據(jù)宣稱的功效,可加入解熱鎮(zhèn)痛藥、抗菌藥物(抗生素)、糖皮質(zhì)激素、抗組胺藥物等,消化系統(tǒng)藥物和減肥藥也可能非法添加到?jīng)霾柚?。綜合考慮,本文針對性選擇了167種藥物建立高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫,基本覆蓋了常見陽性成分和非法添加高風(fēng)險藥物。偽麻黃堿和咖啡因是感冒復(fù)方制劑中常用的藥物,也是植物中自然存在的生物堿,其檢出難以判斷是否非法添加,因此不納入數(shù)據(jù)庫中。

2.2 樣品前處理的優(yōu)化

考察了水、50%(v/v)甲醇水溶液、70%(v/v)甲醇水溶液和甲醇作為提取溶劑對167種藥物的提取效果。結(jié)果表明,大部分脂溶性藥物不適宜采用水提取,其他3種提取溶液提取效果相當(dāng),但甲醇的體積分?jǐn)?shù)影響個別藥物的響應(yīng)和穩(wěn)定性。保留時間較小的嗎啡、對乙酰氨基酚在純甲醇中溶劑效應(yīng)明顯,峰形、響應(yīng)較差。拉唑類成分不穩(wěn)定,以蘭索拉唑為例,24 h內(nèi)在50%(v/v)甲醇水溶液、70%(v/v)甲醇水溶液和甲醇中分別降解15%、18%和23%,在50%(v/v)甲醇水溶液中穩(wěn)定性較好。因此,50%(v/v)甲醇水溶液作為提取溶劑可以兼顧盡量多成分的響應(yīng)和穩(wěn)定性。

比較了不同體積提取溶劑對涼茶中目標(biāo)成分的影響。1 g樣品中分別加入50%(v/v)甲醇水溶液5、10、20和50 mL進行提取,對乙酰氨基酚保留時間較小,受基質(zhì)干擾明顯,其色譜表現(xiàn)能有效反映樣品的干擾情況,故以對乙酰氨基酚為代表進行考察。結(jié)果顯示,提取體積為5 mL和10 mL時,樣品溶液顏色較深,離子流圖基線噪聲較大,干擾對乙酰氨基酚色譜峰;20 mL時,樣品溶液顏色淺,離子流圖基線相對平穩(wěn),對乙酰氨基酚色譜峰無明顯干擾;50 mL時,樣品溶液幾乎無色,離子流圖基線平穩(wěn),色譜峰無干擾。為獲得更高的靈敏度,實驗選擇提取溶劑體積為20 mL。

考察了超聲15 min、超聲30 min或振搖15 min的提取效果,3種提取方式無差異。

綜上,采用50%(v/v)甲醇水溶液20 mL超聲15 min作為提取方法。

2.3 色譜條件優(yōu)化

考察了藥物在Waters XBridge BEH C18(100 mm×2.1 mm, 2.5 μm)、Thermo Hypersil GOLD(100 mm×2.1 mm, 1.9 μm)和Phenomenex Kinetex C18(100 mm×2.1 mm, 2.6 μm)3款色譜柱上的色譜行為。四環(huán)素類藥物對色譜條件敏感,以土霉素為例進行說明。土霉素在Thermo Hypersil GOLD上柱拖尾明顯(見圖1a),在Phenomenex Kinetex C18柱和Waters XBridge BEH C18柱上峰形良好(見圖1b和1c),后者峰寬更窄,峰形更尖銳。因此,選擇整體表現(xiàn)更佳的Waters XBridge BEH C18柱作為方法推薦的色譜柱。

圖 1 土霉素在不同色譜條件下的色譜圖Fig. 1 Chromatograms of oxytetracycline under different chromatographic conditions a. column: Thermo Hypersil GOLD (100 mm×2.1 mm, 1.9 μm); mobile phase: 0.1% (v/v) formic acid aqueous solution and acetonitrile containing 0.1% (v/v) formic acid; b. column: Phenomenex Kinetex C18 (100 mm×2.1 mm, 2.6 μm); mobile phase: 0.1% (v/v) formic acid aqueous solution and acetonitrile containing 0.1% (v/v) formic acid; c. column: Waters XBridge BEH C18 (100 mm×2.1 mm, 2.5 μm); mobile phase: 0.1% (v/v) formic acid aqueous solution and acetonitrile containing 0.1% (v/v) formic acid; d. column: Waters XBridge BEH C18 (100 mm×2.1 mm, 2.5 μm); mobile phase: 0.01 mol/L ammonium acetate solution and acetonitrile; e. column: Waters XBridge BEH C18 (100 mm×2.1 mm, 2.5 μm); mobile phase: 0.01 mol/L ammonium formate solution and acetonitrile.

比較了0.1%(v/v)甲酸水溶液-0.1%(v/v)甲酸乙腈、0.01 mol/L乙酸銨-乙腈和0.01 mol/L甲酸銨-乙腈作為流動相時藥物的分離情況,繼續(xù)以土霉素為例進行說明。結(jié)果表明,當(dāng)流動相含甲酸時,土霉素峰形好、響應(yīng)強(見圖1b);但流動相含乙酸銨、甲酸銨時,土霉素色譜峰拖尾,響應(yīng)減弱,靈敏度變差(見圖1d和1e)。因此,選擇0.1%(v/v)甲酸水溶液-0.1%(v/v)甲酸乙腈作為流動相體系。

2.4 質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化

本方法篩查的藥物多達167個,優(yōu)化時需保證每個藥物被有效采集。Orbitrap質(zhì)譜參數(shù)中分辨率和最大駐留時間的設(shè)置相對固定,其他可調(diào)參數(shù)有TopN、動態(tài)排除功能。TopN代表一級質(zhì)譜響應(yīng)前N強的離子進行二級質(zhì)譜采集,由循環(huán)次數(shù)和每次二級質(zhì)譜采集的離子數(shù)(MSX count)決定,計算公式為N=Loop count×MSK count。當(dāng)MSK count默認(rèn)為1, Loop count設(shè)置為5時,能獲得數(shù)量較多、質(zhì)量較好的二級圖譜。動態(tài)排除是指強度占優(yōu)勢的離子做過二級質(zhì)譜后將其排除,避免重復(fù)采集,以多獲得不同質(zhì)荷比離子的二級圖譜。以本方法為例,對乙酰氨基酚、甲硝唑、氨基比林在涼茶中常見添加量為600～2 000 mg/kg,茶堿、可待因常見添加量為20～60 mg/kg,劑量至少相差10倍。上述成分保留時間在3.3～4.4 min,開啟動態(tài)排除前,對乙酰氨基酚等高添加量成分在響應(yīng)上占有優(yōu)勢,抑制了茶堿、可待因的采集。開啟后情況得到顯著改善,解決了劑量差異的干擾問題。

此外,張蓉等[10]認(rèn)為開啟目標(biāo)離子列表(inclusion)可以強制采集目標(biāo)質(zhì)量數(shù),增強檢測靈敏度。但考察發(fā)現(xiàn),當(dāng)列表化合物數(shù)量從50迅速增加到150時,二級質(zhì)譜的采集點數(shù)銳減,部分圖譜沒有達到峰頂采集的要求,圖譜質(zhì)量不佳,影響數(shù)據(jù)庫篩查的準(zhǔn)確性。因此,方法關(guān)閉inclusion列表。

2.5 同分異構(gòu)體的處理

167種藥物中有8組同分異構(gòu)體,分別是酮洛芬和芬布芬、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺對甲氧嘧啶、賽庚啶和萘替芬、潑尼松龍和可的松、倍他米松和地塞米松、甲基潑尼松龍醋酸酯和地索奈德、倍他米松醋酸酯和地塞米松醋酸酯和曲安奈德、多西環(huán)素和四環(huán)素。除地塞米松和倍他米松外,其余7組的保留時間或碎片離子有區(qū)別,篩查時同分異構(gòu)體間不會相互混淆。如酮洛芬(10.54 min,特征碎片離子m/z105.033 69、209.095 67)和芬布芬(10.93 min,特征碎片離子m/z237.091 29、181.064 83)的保留時間相近,但是特征離子不同。地塞米松和倍他米松為差向異構(gòu)體,在本方法條件下保留時間均為9.11 min,擁有相同的碎片離子m/z147.080、355.190、171.080、121.065,不能有效區(qū)分。經(jīng)考察,更換BJS 201713的色譜條件能有效分離兩種激素,可作為后續(xù)的確認(rèn)手段。

2.6 方法學(xué)驗證

2.6.1特異性

取陰性樣品溶液、加標(biāo)溶液進樣分析,記錄離子流圖和多級質(zhì)譜圖,進行數(shù)據(jù)庫篩查。結(jié)果顯示,陰性樣品中無目標(biāo)成分檢出,加標(biāo)樣品中均篩查出目標(biāo)成分,樣品基質(zhì)對篩查結(jié)果無干擾。

2.6.2檢出限

在陰性樣品中加入適量標(biāo)準(zhǔn)溶液,制得質(zhì)量濃度為10 ng/mL和50 ng/mL的加標(biāo)溶液,從低至高進樣確定各成分的檢出限,其中10 ng/mL對應(yīng)0.2 mg/kg的檢出限水平,50 ng/mL對應(yīng)1.0 mg/kg的檢出限水平。汪洋等[13]根據(jù)歐盟EC/657/2 002中質(zhì)譜分析方法鑒定點數(shù)的要求,認(rèn)為高分辨質(zhì)譜定性至少需要母離子和一個子離子。

基于這一原則,本方法判斷目標(biāo)成分檢出的參數(shù)指標(biāo)為樣品溶液中有與數(shù)據(jù)庫中藥物保留時間一致的色譜峰,并且母離子精確質(zhì)量數(shù)誤差小于5×10-6,至少有一個精確質(zhì)量數(shù)誤差小于5×10-6的碎片離子。當(dāng)保留時間、母離子和碎片離子3項指標(biāo)在數(shù)據(jù)庫篩查均滿足要求時,對應(yīng)的最低濃度為檢出限,結(jié)果見表1。本方法在0.2 mg/kg下可篩查出83種成分,1.0 mg/kg下可篩出167種成分,可滿足涼茶中多種非法添加藥物同時篩查的要求。

2.6.3線性關(guān)系

分別配制質(zhì)量濃度為10、20、30、50、80、100、200、300、500 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,考察各成分的線性關(guān)系。各成分按實際情況選取5個濃度點,以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x, ng/mL),以對應(yīng)母離子提取離子流圖中的色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)(y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見附表1(詳見http://www.chrom-China.com)。結(jié)果表明，各成分線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(r)大于0.99。

2.6.4回收率和精密度

以1倍、2倍和10倍檢出限濃度進行加標(biāo)試驗,采用單點法以母離子提取離子流圖中的色譜峰峰面積計算回收率,每個濃度水平測定6次,計算RSD。由于定量分析時僅參考母離子提取離子流圖,缺少碎片離子的特征性,培氟沙星、諾氟沙星、地氯雷他定、阿司咪唑和克林霉素受基質(zhì)干擾存在本底值,因此不宜采用本方法對以上成分進行定量。結(jié)果顯示,其余成分回收率為66.4%～118.1%, RSD為0.1%～16.1%(n=6),見附表1。將加標(biāo)溶液進行數(shù)據(jù)庫篩查,全部成分均匹配檢出,準(zhǔn)確率達到100%。

圖 2 金剛烷胺陽性樣品的色譜圖和質(zhì)譜圖Fig. 2 Chromatogram and mass spectra of amantadine in positive samples a. extract ion chromatogram of precursor ion; b. full MS profile; c. MS2 profile of sample; d. MS2 profile of standard.

以質(zhì)控溶液的8種代表成分考察基質(zhì)效應(yīng)?？疾旆椒榉謩e配制溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)曲線,以質(zhì)量濃度和峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,按基質(zhì)效應(yīng)系數(shù)=溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率/基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率,計算基質(zhì)效應(yīng)系數(shù)。結(jié)果表明,8種成分的基質(zhì)效應(yīng)系數(shù)為0.91～1.14,說明無明顯基質(zhì)效應(yīng)。

2.7 樣品測定

2.7.1篩查和確證結(jié)果

應(yīng)用本方法對245批涼茶進行篩查,檢出12批陽性樣品,檢出成分有對乙酰氨基酚、雙氯芬酸鈉、氯苯那敏、溴苯那敏、地塞米松醋酸酯、地塞米松、潑尼松醋酸酯、潑尼松、甲硝唑、紅霉素、環(huán)丙沙星、金剛烷胺和右美沙芬。其中金剛烷胺、右美沙芬、溴苯那敏、環(huán)丙沙星是新發(fā)現(xiàn)的補充檢驗標(biāo)準(zhǔn)外成分。

以金剛烷胺為例簡單說明本方法的篩查確證過程,陽性樣品中對應(yīng)的母離子提取離子流圖、一級質(zhì)譜圖和二級質(zhì)譜圖見圖2。數(shù)據(jù)庫中,金剛烷胺的保留時間5.46 min,理論母離子m/z152.143 38,特征碎片離子m/z135.116 94。在母離子提取離子流圖中可疑峰保留時間為5.49 min(見圖2a),與數(shù)據(jù)庫中收錄的保留時間一致,滿足保留時間要求。一級質(zhì)譜圖母離子精確質(zhì)量數(shù)實測值為m/z152.143 23,與理論值相比質(zhì)量偏差為-0.99×10-6(見圖2b),小于5×10-6,符合母離子質(zhì)量數(shù)要求。二級質(zhì)譜圖有一致的特征碎片離子(m/z135.116 9),且離子整體分布趨勢一致(見圖2c和2d),可確證為同一物質(zhì)。

圖 3 污染狀態(tài)下(a)對乙酰氨基酚的色譜圖 和(b)金剛烷胺的質(zhì)譜圖Fig. 3 (a) Chromatogram of acetaminophen and (b) mass spectrum of amantadine under contamination

2.7.2假陽性和假陰性分析

樣品初篩有14批可疑樣品,經(jīng)進樣序列分析、重新進樣,有2批對乙酰氨基酚假陽性,是連續(xù)進樣高濃度陽性樣品,儀器污染導(dǎo)致。高濃度交叉污染是非法添加藥物質(zhì)譜分析中的常見問題,要求檢驗人員警惕高含量陽性樣品后的弱陽性結(jié)果。

大批量分析時,污染積累會轉(zhuǎn)化為持續(xù)的本底污染。如圖3a所示，對乙酰氨基酚(母離子m/z152.070 61)持續(xù)污染后,其母離子提取離子流圖基線整體上移至相對豐度的20%,靈敏度變低,并干擾了質(zhì)量數(shù)相近的金剛烷胺(母離子m/z152.143 38)。當(dāng)對乙酰氨基酚和金剛烷胺響應(yīng)相當(dāng)時,應(yīng)產(chǎn)生m/z152.070 61通道和m/z152.143 38通道的提取質(zhì)譜圖;但當(dāng)本底存在對乙酰氨基酚污染且金剛烷胺響應(yīng)弱時,四極桿區(qū)分能力有限,僅獲得m/z152.070 61通道的提取質(zhì)譜圖,導(dǎo)致金剛烷胺的二級質(zhì)譜中出現(xiàn)對乙酰氨酚特征離子(m/z110.060 07)(對比圖見圖2c和3b),破壞碎片離子整體分布,造成誤判。

為方便檢驗人員及時發(fā)現(xiàn)問題,本方法引入標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控溶液隨行進樣的手段,對分析過程進行質(zhì)量控制。質(zhì)控溶液設(shè)置為檢出限濃度,包含了對乙酰氨基酚等8種正、負離子化合物,兼顧了常見的高濃度污染成分和不穩(wěn)定成分,有一定的代表性。本方法建立的質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫已錄入藥物信息,在無標(biāo)準(zhǔn)品情況下亦可以進行定性篩查。此時利用質(zhì)控溶液可以監(jiān)測靈敏度、質(zhì)量軸穩(wěn)定性和儀器狀態(tài),及時發(fā)現(xiàn)潛在的污染或降解,減少假陽性和假陰性,提高篩查結(jié)果的可信度。

3 結(jié)論

基于質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫,本文建立了超高效液相色譜-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜快速篩查和確證涼茶中167種非法添加藥物的方法,可在1 h內(nèi)完成樣品前處理、檢測和數(shù)據(jù)庫篩查分析,檢測效率高。方法應(yīng)用于實際樣品,有效檢出多種陽性成分,篩查準(zhǔn)確,靶向命中率高。本方法利用Orbitrap HRMS,以Full MS/dd-MS2模式采集的數(shù)據(jù)具有挖掘性,數(shù)據(jù)庫中非法添加藥物增加后,只需要將已有樣品數(shù)據(jù)進行新一輪篩查,即可完成新增成分的分析,不需要重新處理樣品或進行實驗,靈活應(yīng)對非法添加藥物復(fù)雜多變的特點。本方法快速、準(zhǔn)確,彌補了現(xiàn)時檢測方法的不足,為打擊涼茶非法添加藥物行為提供了新的技術(shù)支撐。