支 芳，林星鎮(zhèn)，吳星星

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬洪都中醫(yī)院，江西 南昌 330000；2.南昌市進(jìn)賢縣七里衛(wèi)生院，江西 南昌 331713)

肩袖損傷多因肩袖的退變、撞擊、供血原因等原因造成[1]，其中肌腱腱性損傷是最常見(jiàn)的原因[2]，其臨床表現(xiàn)為肩關(guān)節(jié)的疼痛和功能障礙[3-4]，給患者造成長(zhǎng)期痛苦[5-7]。 肌腱組織中Ⅰ型、Ⅲ型膠原纖維的表達(dá)調(diào)控細(xì)胞基質(zhì)重塑[8]，可作為評(píng)判肌腱損傷患者恢復(fù)狀況的重要指標(biāo)，對(duì)評(píng)價(jià)肌腱受損及修復(fù)程度有重要意義[9]。富血小板血漿(PRP)是近年來(lái)新興的再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域技術(shù)[10-11]，因含大量生長(zhǎng)因子，成為修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的新方向。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究腱性組織細(xì)胞基質(zhì)中Ⅰ型、Ⅲ 膠原表達(dá)，探討PRP通過(guò)調(diào)控細(xì)胞基質(zhì)重塑修復(fù)肩袖損傷腱性的效應(yīng)機(jī)制，為PRP治療肩袖損傷腱性修復(fù)機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1一般資料:實(shí)驗(yàn)符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組造模成功大白兔6只不予處理(空白組)；實(shí)驗(yàn)組取造模成功大白兔6只給予1 ml PRP關(guān)節(jié)腔注射，8周后檢查；PRP+組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMP)-1組取造模成功大白兔6只給予PRP(0.5 ml)+TIMP-1(0.5 ml)關(guān)節(jié)腔注射，8周后檢查。本次研究經(jīng)過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2藥物選擇:選用Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白高效抑制劑TIMP-1，抑制Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白的合成和分泌。

1.3免疫染色檢測(cè)Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白的情況:采集的肩袖肌腱組織樣品以10%甲醛固定，常規(guī)石蠟組織包埋，切片行HE染色，使用免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)法，將酶標(biāo)記的抗體與肌腱組織作用，然后加入酶底物，再對(duì)組織內(nèi)Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白的進(jìn)行檢測(cè)。

1.4MRI掃描:對(duì)兔肩關(guān)節(jié)進(jìn)行MRI掃描。使用2 ml/kg的10%水合氯醛于耳緣靜脈麻醉后使用3.0T磁共振成像(MRI)掃描系統(tǒng)對(duì)經(jīng)過(guò)治療的肩袖組織進(jìn)行掃描。獲取矢狀位和冠狀位T1加權(quán)和T2加權(quán)的質(zhì)子密度圖像。通過(guò)計(jì)算得到該層面的平均信號(hào)強(qiáng)度以及肌腱損傷百分比。

2 結(jié)果

2.1免疫組化染色檢測(cè)Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白:Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白在PRP+TIMP-1組中陽(yáng)性面積占比最多，PRP+TIMP-1效果明顯優(yōu)于空白和單獨(dú)使用PRP。見(jiàn)表1。

表1 Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白染色各組陽(yáng)性面積占比

2.2MRI掃描肩袖損傷修復(fù)情況：平均信號(hào)強(qiáng)度、肌腱損傷百分比在PRP+TIMP-1組中分別占比最高及最低，見(jiàn)表2。

表2 MRI掃描平均信號(hào)強(qiáng)度和肌腱損傷

3 討論

肩袖損傷是臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病[12-14]。肩袖損傷大多因肩袖的退變、創(chuàng)傷、撞擊、供血等多種原因造成，其中肩袖肌腱腱性損傷是最常見(jiàn)的原因，其主要臨床表現(xiàn)為肩關(guān)節(jié)的疼痛和功能障礙[15-17]。臨床研究表明，PRP可促進(jìn)組織修復(fù)。PRP技術(shù)是近年來(lái)新興的再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域技術(shù)[18]，因含大量生長(zhǎng)因子，成為修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的新方向[19]。

本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ⅰ型、Ⅲ膠原蛋白在PRP+TIMP-1組的表達(dá)是最明顯的，而且Ⅰ型、Ⅲ型膠原纖維是肌腱組織所含膠原的主要類型。Ⅰ型膠原的含量可占到整個(gè)肌腱組織膠原的 95%以上，占肌腱組織干重的65%～80%，Ⅲ型膠原含量則低于3%。Ⅲ型膠原的含量與肌腱受損程度呈正相關(guān)，而Ⅰ型膠原含量與其呈負(fù)相關(guān)。因此，肌腱組織中Ⅰ型、Ⅲ型膠原纖維的表達(dá)調(diào)控細(xì)胞基質(zhì)重塑，可作為評(píng)判肌腱損傷患者恢復(fù)狀況的重要指標(biāo)，對(duì)評(píng)價(jià)肌腱受損及修復(fù)程度具有重要意義。通過(guò)MRI掃描發(fā)現(xiàn)，使用PRP+TIMP-1肌腱受損情況得到明顯改善，可以觀察到修復(fù)非常有效。

總之，PRP能夠調(diào)控基質(zhì)重塑促進(jìn)兔肩袖損傷模型肌腱修復(fù)，為治療肩袖損傷提供新的非手術(shù)治療方法，同時(shí)也為PRP治療肩袖損傷腱性修復(fù)機(jī)制進(jìn)一步奠定基礎(chǔ)。