苗明三彭孟凡劉思哲張媛鑫劉思琪石 琪羅茂麗

(河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,鄭州 450046)

動物模型通過實(shí)驗(yàn)動物,模擬醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)等科學(xué)研究,是醫(yī)藥生物技術(shù)和健康產(chǎn)品研發(fā)中應(yīng)用的與人類疾病、功能紊亂發(fā)生機(jī)制和臨床表現(xiàn)高度相似的生物樣本。 動物模型是我國醫(yī)療健康與生物科技產(chǎn)業(yè)中不可替代的核心生物資源,在疾病預(yù)防、藥物篩選、毒副作用探究與規(guī)避、發(fā)病機(jī)制解析等方面具有重要作用。 近年來,已建立多種動物模型用于相應(yīng)疾病的研究,并廣泛應(yīng)用于中醫(yī)藥領(lǐng)域。 現(xiàn)今,用于中醫(yī)藥研究的動物模型基本有3 種,即中醫(yī)證候動物模型、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)動物模型、病證結(jié)合動物模型3 大類。 又有學(xué)者將用于中醫(yī)藥研究的動物模型總結(jié)為“基于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論復(fù)制的病理模型”、“傳統(tǒng)病因動物模型”和“在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論疾病模型基礎(chǔ)上根據(jù)中醫(yī)藥理論施加中醫(yī)的干預(yù)因素復(fù)制的證候模型”3 大類[1]。 動物模型構(gòu)建成功與否影響中藥藥效和作用特點(diǎn)的評價,不少文獻(xiàn)也有對動物模型評價方法進(jìn)行探討。 如崔寧等[2]將中醫(yī)藥動物模型評價方法總結(jié)為以兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、非參數(shù)檢驗(yàn)為主的單因素方差分析和以因子分析為主的多元統(tǒng)計(jì)分析方法兩種,任珍等[3]將中醫(yī)藥動物模型評價方法大致分為單純“證”的評價方法(四診表征)、中醫(yī)“證”結(jié)合西醫(yī)指標(biāo)、以藥(方)測證、基于“組學(xué)”技術(shù)和基于中西醫(yī)病癥特點(diǎn)5 種等。 但由于中醫(yī)藥動物模型的特殊性,單一的動物模型評價方法難以全面反映模型動物的中醫(yī)證候特點(diǎn),體現(xiàn)中醫(yī)“辨證論治”的獨(dú)特優(yōu)勢。 有必要對中醫(yī)藥動物模型評價方法進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié),尋找適合中醫(yī)藥研究的動物模型評價體系,探討體現(xiàn)中醫(yī)藥特點(diǎn)的動物模型的構(gòu)建。 本文就2010 年～2021 年期間文獻(xiàn)中涉及的中醫(yī)動物模型評價方法進(jìn)行總結(jié),分析其優(yōu)缺點(diǎn),以期促進(jìn)中藥研究的科學(xué)發(fā)展。

1 數(shù)據(jù)來源

在“中國知網(wǎng)”數(shù)據(jù)庫高級檢索界面,設(shè)置主題為“動物模型”并且含有“評價”或“分析”,時間為2010.01～2021.10,進(jìn)行檢索。 初次檢索,共得到文獻(xiàn)2206 篇,經(jīng)篩選,納入符合標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)1090 篇。

納入標(biāo)準(zhǔn):選用動物實(shí)驗(yàn)研究的全部文獻(xiàn)；具體描述單個動物模型的部分綜述。 排除標(biāo)準(zhǔn):文中出現(xiàn)多個動物模型的綜述；資料不齊全的文獻(xiàn)；會議性論文；碩士、博士相關(guān)學(xué)位論文。

2 文獻(xiàn)分析

2.1 動物模型評價涉及的疾病類型分析

對納入符合標(biāo)準(zhǔn)的1090 篇文獻(xiàn)中涉及的動物模型和疾病類型進(jìn)行分析,經(jīng)系統(tǒng)歸類,發(fā)現(xiàn)以“心腦血管疾病、骨與關(guān)節(jié)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和消化系統(tǒng)疾病”居多,涉及疾病類型頻次共計(jì)1015 次,另75 篇僅有中醫(yī)“證/癥候或證/癥型”,未有具體疾病,詳見表1。

表1 文獻(xiàn)中疾病類型總結(jié)Table 1 Summary of disease types in the literature

由表2 知:頻次大于50 的動物模型依次為骨與關(guān)節(jié)、心腦血管、神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和腫瘤。 上述現(xiàn)象的可能原因有:(1)研究頻次較高的疾病具有較高的發(fā)病率,且發(fā)病機(jī)制和臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣,單一造模方法難以體現(xiàn)臨床病癥特點(diǎn),有必要進(jìn)行深入研究,以貼合臨床實(shí)際。 (2)研究頻次較高的疾病危害率高,或病情反復(fù)、難以根治,需要從多層次、多角度進(jìn)行研究。(3)目前的治療方法效果有限,難以滿足臨床需求,或者目前尚無確切有效的治療方法,一旦患病,難以長期生存。 如隨著生活方式的改變,經(jīng)濟(jì)壓力,導(dǎo)致體力勞動和腦力勞動力度均劇增,長期久坐、負(fù)重過大導(dǎo)致骨缺損、軟骨損傷、股骨頭壞死、脊髓損傷、腰椎間盤突出、頸椎病和關(guān)節(jié)損傷、關(guān)節(jié)受累等引發(fā)的骨與關(guān)節(jié)疾病逐年增多,促進(jìn)實(shí)驗(yàn)研究相應(yīng)增多[4]；心腦血管疾病具有較高的發(fā)病率、致殘率、死亡率和復(fù)發(fā)率,同時伴隨各類并發(fā)癥,是威脅健康的“頭號殺手”[5],因其發(fā)病率高、治愈率低且危害性大,故其相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究也較多。

表2 動物模型評價方法Table 2 Animal model evaluation method

2.2 動物模型評價方法分析

對納入符合標(biāo)準(zhǔn)的1090 篇文獻(xiàn)中涉及到的動物模型評價方法進(jìn)行分析,若一篇文獻(xiàn)中有2 種或以上不同的評價方法,則分別統(tǒng)計(jì),結(jié)果共得到相應(yīng)模型評價方法 8 種。 進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),以“病理”、“疾病評價”和“病證結(jié)合”為主,3 者頻次分別為 613、586 和 349 次,見表 2。

為更好理解不同評價方法在模型中的評價特點(diǎn),現(xiàn)對頻次＞40 的動物模型評價方法進(jìn)行部分舉例分析,詳見表3。

表3 頻次＞40 的造模方法和評價方法舉例Table 3 Examples of modeling methods and evaluation methods with frequency ＞40

2.3 各類模型評價分析方法總結(jié)

“病理”評價方法:對于器質(zhì)性病變,“病理”評價可作為此類疾病臨床診斷的“金指標(biāo)”[24]。 病理學(xué)分析能與表觀、生化等數(shù)據(jù)互為補(bǔ)充,對于器質(zhì)性病變動物模型研究是必不可少的。 如多囊卵巢綜合征(PCOS)臨床特征為性激素分泌失衡、不排卵或排卵障礙、月經(jīng)異常、不孕,以卵巢囊性改變?yōu)榕R床主要診斷依據(jù)。 評價PCOS 動物模型以卵巢組織病理觀察為主,判斷成模指標(biāo)主要為早期發(fā)育小卵泡、閉鎖卵泡和囊性擴(kuò)張卵泡多,顆粒細(xì)胞和黃體減少[25]；因卵巢卵泡發(fā)育障礙會導(dǎo)致月經(jīng)紊亂,故PCOS 動物模型整體會表現(xiàn)出動情周期紊亂的現(xiàn)象；此外,卵泡發(fā)育受促性腺激素釋放激素、促性腺激素和性激素的調(diào)控,故激素類生化指標(biāo)和相應(yīng)受體蛋白的改變可側(cè)面反應(yīng)卵巢病變程度,體現(xiàn)模型構(gòu)建是否符合臨床表現(xiàn)[26]。前列腺炎臨床表現(xiàn)為尿頻、尿急、尿痛、排尿困難、夜尿多、骨盆區(qū)域不適或疼痛等癥狀,其動物模型可首先依據(jù)動物整體排尿情況、尿動力學(xué)(排尿閾值壓、排尿間隔和排尿最大壓)情況進(jìn)行初步評價,然后結(jié)合前列腺組織病理觀察(腺體擴(kuò)張、上皮細(xì)胞排列紊亂、增生情況,腔內(nèi)炎性浸潤現(xiàn)象等)為主進(jìn)行是否成模的評價；其次,因?yàn)榍傲邢傺讜斐苫颊卟煌潭鹊慕箲]、誘發(fā)機(jī)體炎癥反應(yīng),故常結(jié)合曠場實(shí)驗(yàn)(運(yùn)動時間、周邊滯留時間、抬腿次數(shù)、跨越方格總數(shù))和炎癥因子(IL-1β、TNF-α 等)水平進(jìn)行動物模型的輔助評價[27-28]。 病理評價方法能夠最大化實(shí)驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù),減少實(shí)驗(yàn)所需動物數(shù)量,符合動物福利3R(減少、替代和優(yōu)化)原則[29-30]。 病理評價作為器質(zhì)性病變疾病相關(guān)模型評價方法,雖一定程度能體現(xiàn)中醫(yī)藥動物模型的特點(diǎn),但也有明顯的局限。 如中醫(yī)認(rèn)為“腎主骨”,若僅以“脛骨、股骨”病理或/和脛骨力學(xué)強(qiáng)度及股骨骨密度作為骨質(zhì)疏松癥成模與否的評價指標(biāo)難以解釋“腎主骨”的中醫(yī)認(rèn)識,難以解釋采用補(bǔ)腎中藥治療骨質(zhì)疏松癥的中醫(yī)藥內(nèi)涵,增加中醫(yī)“腎”的相關(guān)指標(biāo)則更能貼合中醫(yī)藥的特點(diǎn)。綜上,采用病理評價結(jié)合中醫(yī)因素進(jìn)行動物模型的評價更有利于體現(xiàn)中醫(yī)藥的特點(diǎn)。

續(xù)表3

續(xù)表3

“疾病評價”方法:“疾病評價”以臟器重量(長度)、外觀,血清、血漿、尿液、組織等中的指標(biāo)變化趨勢與臨床患者的一致性為判斷依據(jù),可以從多個發(fā)病機(jī)制和實(shí)驗(yàn)角度進(jìn)行動物模型評價。 血清、尿液等中的指標(biāo)變化在一定程度可反應(yīng)組織器官是否發(fā)生實(shí)質(zhì)性病變,而減少對相應(yīng)器官組織的取材進(jìn)行病理鑒定,簡化診斷流程。 如以結(jié)腸長度、結(jié)腸重量、疾病活動指數(shù)評分(便血結(jié)合體重變化)、結(jié)腸組織外觀和病理學(xué)改變作為潰瘍性結(jié)腸炎疾病的評價依據(jù)[12],以血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性升高,作為肝損傷的標(biāo)志[31]。 以血清或尿液尿酸、肌酐、尿素氮的異常作為腎功能異常、腎損傷的評價依據(jù)[32]。 結(jié)合文獻(xiàn)知,“疾病評價”較少納入中醫(yī)相關(guān)因素。 且受限于造模因素的單一性,難以反應(yīng)不同發(fā)病階段生化指標(biāo)變化特點(diǎn),即生化指標(biāo)變化高低難以量化疾病嚴(yán)重程度。 如僅以空白為對照,以ALT、AST 作為評價肝損傷依據(jù),但如何利用ALT、AST 偏離正常動物幅度判斷肝損傷嚴(yán)重程度(輕度、中度或重度損傷)尚無明確定論,必要時還需結(jié)合病理指標(biāo)進(jìn)行判斷。

“病證結(jié)合”評價方法:“病證結(jié)合”評價方法既包含證候?qū)W指標(biāo)如一般情況、活動、進(jìn)食、大小便、體質(zhì)量等,也包含疾病指標(biāo)如發(fā)病情況、血清、尿液等指標(biāo)變化程度等,從多個角度說明疾病變化過程,可以反應(yīng)部分疾病中醫(yī)證候變化特點(diǎn),指導(dǎo)臨床研究。 如通過觀察食蟹猴精神狀態(tài),活動情況,大便顏色、成形度、黏滯或燥結(jié)情況,皮膚有無濕疹瘙癢等證候?qū)W指標(biāo)判斷食蟹猴脾胃濕熱證情況,通過B 超測定肝臟回聲、血管紋理,HE 觀察肝組織病理學(xué)改變,全自動生化分析儀測血清AST、ALT、TG、TC 含量觀察肝臟是否有脂肪性病變,ELISA 檢測血清腦腸肽激素GAS 和MTL,反映胃腸功能,最終判斷食蟹猴急性酒精性脂肪肝脾胃濕熱證模型是否成功。 其中,眾多學(xué)者將GAS 作為脾胃濕熱證的首選指標(biāo),將GAS 升高作為“脾胃濕熱證”的微觀證據(jù)之一[33]。 研究表明,陰虛患者交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)功能偏高,表現(xiàn)為環(huán)磷酸腺苷(cAMP)升高、環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)降低、cAMP/cGMP 比值升高,并將cAMP 水平升高、cGMP 水平降低或 cAMP/cGMP 比值升高作為腎陰虛的微觀指標(biāo)。 如cAMP 水平升高、cGMP 水平降低或cAMP/cGMP 比值升高結(jié)合空腹血糖大于11.1 mmol/L 是常用的評價腎陰虛型糖尿病大鼠成模的依據(jù)[34]。 病證結(jié)合動物模型是目前能夠體現(xiàn)中醫(yī)藥特點(diǎn)的動物模型,因此,完善病證結(jié)合動物模型評價體系是中醫(yī)藥研究的發(fā)展趨勢。

“行為學(xué)評價”評價方法:行為學(xué)評價一般常用于抑郁癥、焦慮、應(yīng)激狀態(tài)等動物模型的評價,在相關(guān)動物實(shí)驗(yàn)中,行為學(xué)通常是研究后續(xù)機(jī)制的重要前提[35],可在一定程度反應(yīng)疾病的發(fā)生,從而使模型呈現(xiàn)出更好的表觀效度。 如抑郁癥以情緒低落、興趣喪失、思維遲緩為臨床主要特征,實(shí)驗(yàn)室研究常利用強(qiáng)迫游泳時間、懸尾實(shí)驗(yàn)中的“行為絕望”時間,電擊逃避失敗次數(shù),曠場實(shí)驗(yàn)、糖水偏好實(shí)驗(yàn)、新奇食物探索實(shí)驗(yàn)等評價模型是否成功；抑郁是情緒相關(guān)疾病的一種,受大腦的調(diào)控,腦組織和血清中生化指標(biāo)(單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA,腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF,下丘腦-垂體-腎上腺軸促腎上腺皮質(zhì)激素分泌激素、促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)激素等),腦組織中海馬區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況、p-JAK1/JAK1 和p-STAT3/STAT3 蛋白表達(dá)情況均可作為輔助評價指標(biāo)[36-37]。 焦慮是一種情緒障礙性疾病,實(shí)驗(yàn)室研究常用高架零迷宮(利用動物對高懸敞開臂的害怕和對新異環(huán)境的好奇特性形成矛盾沖突的行為考察動物的焦慮狀態(tài))、曠場實(shí)驗(yàn)(總路程、中央?yún)^(qū)停留時間、垂體活動次數(shù)、跨格數(shù))、高架十字迷宮(開放臂停留時間和進(jìn)入開放臂的次數(shù))等行為學(xué)表現(xiàn)評價模型是否成功；此外,5-HT、DA、NE 等神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)水平與焦慮癥的發(fā)生密切相關(guān),因此海馬組織 5-HT、MAO、NE 的表達(dá),血清 GABA、Glu 也常作為輔助指標(biāo)用于模型和藥效的評價[38-39]。 行為學(xué)評價以動物的癥狀、行為學(xué)和體征等表觀指標(biāo)評價為主,可反映中醫(yī)“望”的特點(diǎn),能在一定程度體現(xiàn)中醫(yī)藥臨床特色；有些情況下行為學(xué)評價在模型評價中可占據(jù)主導(dǎo)地位。

“基因評價”評價方法:基因突變與疾病的發(fā)生密切相關(guān),基因評價能從基因?qū)用娣磻?yīng)病變對機(jī)體影響,并可突出藥物對生物遺傳形狀的改變。 基因評價還表現(xiàn)在其存在脫靶效應(yīng)上(對非目標(biāo)基因序列進(jìn)行識別并切割),不僅在一定程度上影響實(shí)驗(yàn)動物模型的構(gòu)建,還影響了其在臨床基因治療中的應(yīng)用。 如以 IL-6 和 TNF-α mRNA 的變化作為大鼠體內(nèi)炎癥反應(yīng)的評價指標(biāo),結(jié)合肝形態(tài)、病理學(xué)改變,血清轉(zhuǎn)氨酶ALT 和AST 水平作為評價D-氨基半乳糖聯(lián)合Pam3CSK4 誘導(dǎo)的SD 大鼠急性肝損傷及炎癥反應(yīng)的評價依據(jù)[40]；DMPK 相關(guān)基因人源化大鼠模型可以減少大鼠和人類在藥物代謝上的種屬差異,提高動物實(shí)驗(yàn)的可信度[41-42]。 基因評價缺少中醫(yī)相關(guān)特色,具有一定片面性。 但是,一種疾病涉及多個基因突變,單個或幾個基因評價難以反應(yīng)疾病整體性。 且基因技術(shù)評價指標(biāo)相對單一、相關(guān)設(shè)備造價昂貴、操作復(fù)雜繁瑣,重復(fù)實(shí)驗(yàn)的可行性較低,在實(shí)際應(yīng)用中可將其作為輔助評價手段。

“基于中西醫(yī)臨床特點(diǎn)”評價方法:基于臨床中西醫(yī)病癥特點(diǎn)的評價方法,將表觀、生化和病理等指標(biāo)均考慮在內(nèi),又按“主次”以及交互作用進(jìn)行模型評價。 基于中西醫(yī)臨床特點(diǎn)評價方法,不僅納入了西醫(yī)的臨床癥狀特點(diǎn),將西醫(yī)病理、疾病和基因評價方法涵蓋在內(nèi),全面反應(yīng)動物模型的西醫(yī)臨床表現(xiàn)；還納入了中醫(yī)的證候,同時將動物的行為學(xué)表現(xiàn)、表觀指標(biāo)等納入評價范圍,最大程度反應(yīng)動物模型的證候、行為學(xué),是目前較為全面的評價動物模型的方法之一。 在一定程度上,補(bǔ)充了實(shí)驗(yàn)相關(guān)疾病的中醫(yī)學(xué)理論依據(jù),為相關(guān)疾病的中藥新藥研究、成藥配伍、組方劑量提供新的方法思路,一定程度上促進(jìn)了中醫(yī)的發(fā)展。 但中醫(yī)理論體系中一些特有的體征無法在動物身上進(jìn)行收集和評價,且造模過程中無法完全復(fù)刻相關(guān)因素(舌象和脈象特點(diǎn))[43],其次,體征收集不全造成四診信息不完善,導(dǎo)致臨床評價具有較大的主觀性,沒有統(tǒng)一的判斷模型成功標(biāo)準(zhǔn)。 現(xiàn)今,動物模型多數(shù)是在西醫(yī)指導(dǎo)下建立的,與中醫(yī)證候吻合度普遍較低,難以全面反映中醫(yī)學(xué)整體觀念,因此在構(gòu)建證候動物模型的同時應(yīng)對疾病的發(fā)展進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測,不斷進(jìn)行證候診斷,從而提高與中醫(yī)證型的匹配度[44]。

“證候?qū)W”價方法:中醫(yī)證候動物模型是探索證候發(fā)生與演變的重要載體,是中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的基本前提之一。 中醫(yī)“證”可追溯至中醫(yī)中的望聞問切,又稱“四診”,可由動物的癥狀和體征進(jìn)行反映。 如徐小薈等[45]根據(jù)造模后大鼠出現(xiàn)“寒凝血瘀表征”——蜷縮少動、遲鈍、呼吸弱、皮毛蓬亂無光澤、耳色和舌暗紅、皮膚青紫瘀斑、大便濕爛等確定寒凝血瘀證造模成功；以氫化可的松灌胃后大鼠出現(xiàn)體重下降、易驚易怒、潮熱、多汗、大便干結(jié)和毛發(fā)枯燥等癥狀確定腎陰虛證造模成功[46]；以腺嘌呤灌胃后大鼠出現(xiàn)皮肉松弛、畏寒、弓背、豎毛、掉毛等現(xiàn)象,毛發(fā)枯疏無光澤,飲食減少,多尿、溏便等情況,甚至陰囊收縮,精神萎靡,遲鈍,活動少,體重下降等確定腎陽虛證造模成功[23]。 隨著證型研究的深入,中醫(yī)“證”也可由現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢測手段體現(xiàn),如結(jié)合“四診”,以微觀指標(biāo)血清中T 降低,FSH 和LH 升高,E2/T 和cAMP/cGMP 比例失衡作為腎陰虛或腎陽虛的評價依據(jù)[23,34]；利用基因組學(xué)發(fā)現(xiàn)線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號通路系列相關(guān)基因表達(dá)下調(diào)與邪毒壅盛證小鼠有關(guān)[47],利用代謝組學(xué)發(fā)現(xiàn)亮氨酸、纈氨酸、賴氨酸水平上調(diào), 琥珀酸、馬尿酸水平下調(diào)可能是脾腎陽虛證的生物標(biāo)志物[48]。 中醫(yī)“證”的評價以“四診”為主,并逐漸采用生化指標(biāo)、組織病理、基因和蛋白等指標(biāo)為輔,有一定的科學(xué)性和實(shí)用性。

“以方測證”評價方法:“以藥(方)測證”是利用藥效反應(yīng),推知病機(jī),是現(xiàn)階段驗(yàn)證證候模型成功與否、推測疾病模型證候?qū)傩缘闹匾侄巍?證候是在疾病基礎(chǔ)上額外施加因素致原有疾病出現(xiàn)變化,運(yùn)用“以藥(方)測證”驗(yàn)證動物模型證候,可增加模型的可信度和說服力。 疾病發(fā)展伴隨證的動態(tài)變化,證與病相互存在,若不施加“證”的致病因素,在牢靠的疾病模型基礎(chǔ)上采用“以藥(方)測證”可進(jìn)行動物模型證候的推測[49]。 如以茵陳蒿湯和六味地黃丸為參照,推測四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠模型屬于陰虛證[50]；以烏頭湯驗(yàn)證風(fēng)寒濕痹證模型的成功,同時以四妙丸作為反證,從反證角度證明風(fēng)寒濕痹證動物模型的成功[51]。 但鑒于中藥方劑的多效應(yīng)性、多成分、多靶點(diǎn)等特點(diǎn),方與證之間并非一一對應(yīng)的鎖定關(guān)系,即同一方劑可適用多種證候,同一證候的有效方劑亦有多個。 故有學(xué)者指出方-證之間可能是復(fù)雜的“一多關(guān)系”,因此從某方必然推斷出某證的邏輯思維也是不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)腫52]?？紤]到中藥方劑的多效性,“以藥(方)測證”缺乏其它方藥的多方對照,否定了可能存在的其它證候[53]。

3 討論

動物模型的效度評價是動物模型研究中十分重要的一項(xiàng)環(huán)節(jié),目前較為權(quán)威的評價方式是依據(jù)鑒定和評價三效度進(jìn)行動物模型效度評價,即從表觀、結(jié)構(gòu)、預(yù)測3 方面對動物模型的效度進(jìn)行分析[54]。 表觀效度指模型動物與人類之間現(xiàn)象學(xué)的相似性,一般包括被毛光澤度、活動度、精神狀態(tài)、體重、飲食狀況、大小便情況等癥狀和體征變化以及行為學(xué)指標(biāo)。 結(jié)構(gòu)效度體現(xiàn)在動物模型與研究疾病具有相似的原因或生物學(xué)機(jī)制,如腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)改變、下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸系統(tǒng)激活等。結(jié)構(gòu)效度是三效度中的理論基礎(chǔ),也是動物模型建立過程中最基本、最重要的一個方面,決定了動物模型的有效性。 預(yù)測效度指對動物模型相應(yīng)癥狀進(jìn)行有效干預(yù)所產(chǎn)生的反應(yīng)性,其作用一般體現(xiàn)在臨床藥物的篩選中[55]。 理想的動物模型應(yīng)該符合上述3 個效度標(biāo)準(zhǔn)。 如徐小薈等[45]采用冰水冷凍法制備寒凝血瘀證大鼠模型:從大鼠活動度、飲水量、被毛光澤度、心率、耳廓血管顏色及舌色、大便性狀改變反應(yīng)表觀效度,從大鼠炎癥因子TNF-α、IL-1β 升高等生理指標(biāo)改變反應(yīng)結(jié)構(gòu)效度,以附子或附子配伍當(dāng)歸、香附灌胃觀察治療效果反應(yīng)該模型的預(yù)測效度。 郭文鶴等[56]采用復(fù)合因素造模構(gòu)建氣滯血瘀型動脈粥樣硬化大鼠模型:從大鼠體型、舌象、耳廓血管顏色、活動度、進(jìn)食量改變情況反應(yīng)表觀效度；從大鼠血脂水平、凝血四項(xiàng)、升主動脈及肝組織病理學(xué)結(jié)果反應(yīng)結(jié)構(gòu)效度；給予辛伐他丁及通脈顆粒灌胃治療觀察治療效果反應(yīng)模型的預(yù)測效度。 但目前較多的動物模型評價尚不能完全涵蓋上述3 個效度標(biāo)準(zhǔn),如張澤丹等[12]采用高脂飼料喂養(yǎng)配合潮濕環(huán)境制備潰瘍性結(jié)腸炎濕熱證小鼠模型:從小鼠反應(yīng)度、飲水量、肛門清潔度、大小便情況、有無粘液膿血便等反應(yīng)表觀效度；從小鼠結(jié)腸長度、遠(yuǎn)端結(jié)腸組織病理學(xué)改變、炎癥性指標(biāo) IL-6、IL-10、血清 SC、CRP 等病理學(xué)改變及生化指標(biāo)方面反應(yīng)結(jié)構(gòu)效度。 張瀟等[16]采用復(fù)合因素造模制備心理亞健康大鼠模型:從大鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)(糖水偏好實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、明暗箱實(shí)驗(yàn))及一般體征改變(精神狀態(tài)、被毛光澤度、活動度)反應(yīng)表觀效度；從大鼠臟器指數(shù)反應(yīng)結(jié)構(gòu)效度。

各類疾病的發(fā)生發(fā)展受內(nèi)外環(huán)境、飲食、情志等多因素影響,其對應(yīng)的動物模型也應(yīng)考慮多因素作用及與臨床證型和病癥的吻合程度。 中醫(yī)藥動物模型評價未來的重點(diǎn)方向應(yīng)基于中醫(yī)證型及西醫(yī)疾病按照“主次”及交互作用全面考慮表觀指標(biāo)、生化指標(biāo)和病理指標(biāo)等因素,參考目前疾病診療的現(xiàn)狀,并結(jié)合中醫(yī)“辨證治療”“ 標(biāo)本兼治”等相關(guān)理論進(jìn)行評價。 同時,可將基于臨床中西醫(yī)病癥特點(diǎn)的評價方法與代謝組學(xué)或“以藥(方)測證”進(jìn)行結(jié)合,進(jìn)一步完善評價體系。 中醫(yī)藥動物模型評價體系的完善與發(fā)展可以增加中醫(yī)藥相關(guān)理論的科學(xué)性、有效性和實(shí)用性,促進(jìn)中醫(yī)藥研究現(xiàn)代化。