匡浩銘 沈琳玲 曹閑雅 匡建軍 柳卓 毛果 蔡萍 戎寬 楊惠

〔摘要〕 目的 探討金剛丸對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠骨代謝和血清骨鈣素的影響。方法 將60只SPF級(jí)大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組及高、中、低劑量組和己烯雌酚組，每組10只。高、中、低劑量金剛丸組每天分別以3.24、1.62、0.81 g/kg的劑量灌胃1次;己烯雌酚組大鼠每天給予1.0 mg/kg灌胃1次;正常對(duì)照組及模型組給予等體積的生理鹽水。給藥6周后取股骨，測(cè)量股骨最大載荷和斷裂載荷;HE染色法觀察骨小梁結(jié)構(gòu);ELISA法測(cè)定股骨組織中血清骨源性堿性磷酸酶（bone alkaline phosphatase， BALP）、雌二醇（estradiol E2）和血清骨鈣素（bone gla-containing protein， BGP）、骨保護(hù)蛋白（osteoprotegerin， OPG）、核因子-κB受體活化因子（receptor activator of NF-κB， RANK）及核因子-κB受體活化因子配體（receptor activator of NF-κB ligand， RANKL）的水平;采用光子骨密度（bone mineral density， BMD）測(cè)試儀測(cè)定BMD;采用Western blot法檢測(cè)瞬時(shí)受體電位陽離子通道亞族V成員6 （transient receptor potential cation channel subfamily V member 6， TRPV6）蛋白相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果 模型組骨小梁形態(tài)模糊、廣泛斷裂，骨髓腔增寬，骨細(xì)胞排列散亂;高、中、低劑量組可見骨小梁形態(tài)較模型組改善、結(jié)構(gòu)較為緊密，骨髓腔減小，骨外膜排列改善。與正常對(duì)照組相比，模型組體質(zhì)量、BALP、BGP、RANK、RANKL水平明顯升高，E2、BMD、最大負(fù)荷、斷裂負(fù)荷、TRPV6、OPG水平均明顯降低（P<0.05）。與模型組相比，高、中、低劑量組體質(zhì)量、BALP、BGP、RANK、RANKL水平降低，E2、BMD、最大負(fù)荷、斷裂負(fù)荷、OPG、TRPV6水平顯著升高（P<0.05）。結(jié)論 金剛丸通過提高絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠雌激素水平，調(diào)節(jié)骨代謝，提高生物力學(xué)性能和BMD，起到抗骨質(zhì)疏松的療效和骨保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過影響TRPV6表達(dá)上調(diào)OPG表達(dá)，下調(diào)RANKL表達(dá)。

〔關(guān)鍵詞〕 骨質(zhì)疏松;金剛丸;血清鈣;骨代謝;瞬時(shí)受體電位陽離子通道亞族V成員6;骨保護(hù)素

〔中圖分類號(hào)〕285.5? ? ? ? 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2022.02.010

Effects of Jingang Pill on bone metabolism and serum osteocalcin in osteoporosis rats

KUANG Haoming1， SHEN Linling1， CAO Xianya1， KUANG Jianjun2， LIU Zhuo3， MAO Guo3， CAI Ping2，

RONG Kuan2*， YANG Hui1*

（1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. Hunan Academy of Traditional Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410006， China; 3. Hunan Academy of Traditional Chinese Medicine Affiliated Hospital，

Changsha， Hunan 410006， China）

〔Abstract〕 Objective To investigate the effects of Jingang Pill on bone metabolism and serum osteocalcin in osteoporosis rats. Methods 60 SPF rats were randomly divided into control group， model group， high， medium and low dose Jingang Pill groups and diethylstilbestrol group， with 10 rats in each group. The high， medium and low dose Jingang Pill groups were given intragastric administration of 3.24， 1.62， 0.81 g/kg per day respectively; the rats in the diethylstilbestrol group were given diethylstilbestrol 1.0 mg/kg every day; rats in the control group and model group were given equal volume of normal saline. After 6 weeks of administration， the femur was taken to detect the maximum load and fracture load; bone trabecular structure was observed by HE staining; the levels of serum bone alkaline phosphatase （BALP）， estradiol （E2） and serum bone gla-containing protein （BGP）， osteoprotegerin （OPG）， receptor activator of NF-κB （RANK） and receptor activator of NF-κB ligand （RANKL） were measured by ELISA; bone mineral density

（BMD） was measured by BMD tester; the relative expression of transient receptor potential cation channel subfamily V member 6 （TRPV6） protein was detected by Western blot. Results In the model group， bone trabecular morphology was blurred and extensively fractured， bone marrow cavity was widened， and bone cells were scattered. Compared with the model group， bone trabecular morphology and structure were improved in high， medium and low dose groups， bone marrow cavity was reduced， and bone membrane arrangement was improved. Compared with the control group， the levels of body weight， BALP， BGP， RANK and RANKL in model group were significantly increased， while the levels of E2， BMD， maximum load， breaking load， OPG and TRPV6 were significantly decreased （P<0.05）. Compared with the model group， the levels of body weight， BALP， BGP， RANK and RANKL in medium and high dose groups were significantly increased， while the levels of E2， BMD， maximum load， breaking load， OPG and TRPV6 were significantly decreased （P<0.05）. Conclusion Jingang Pill has the effect of anti-osteoporosis and bone protection by increasing the estrogen level， regulating bone metabolism， improving biomechanical properties and BMD in postmenopausal osteoporosis rats， and mechanism may be through affecting the expression of TRPV6， so as to up-regulate the expression of bone protective protein and down-regulate the expression of RANKL.

〔Keywords〕 osteoporosis; Jingang Pill; serum calcium; bone metabolism; transient receptor potential cation channel subfamily V member 6; osteoprotegerin

骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis， OP）是一種代謝失衡導(dǎo)致的骨量減少、骨組織結(jié)構(gòu)破壞、易發(fā)骨折骨的代謝性疾病[1]。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥（postmenopausal osteoporosis， PMOP）是導(dǎo)致老年婦女骨折的重要原因，增加了患者病殘率和死亡率[2-4]。PMOP發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響婦女的心理和生活質(zhì)量[5]。因此，各種途徑尋找行之有效的OP防治方法是目前相關(guān)學(xué)科研究者關(guān)注的焦點(diǎn)。研究表明，絕經(jīng)后婦女雌激素缺乏導(dǎo)致骨吸收異常是OP發(fā)生的主要原因之一，雌激素水平降低影響成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的分化，抑制了骨代謝，使得OP的發(fā)生[6]。臨床上常用雌激素和孕酮治療，但是長(zhǎng)期用于治療OP會(huì)導(dǎo)致顯著的不良反應(yīng)。和西藥相比，中醫(yī)藥防治OP具有很多優(yōu)勢(shì)，多靶向且對(duì)人體不良反應(yīng)相對(duì)較少，適合臨床長(zhǎng)期應(yīng)用。通過辨證施治，中藥可作用于多個(gè)病理環(huán)節(jié)，能夠改善患者多種伴隨的癥狀，從而提高患者生存質(zhì)量，減少患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。金剛丸最早記載于《素問·病機(jī)氣宜保命集》，是金朝著名醫(yī)家劉完素治療腎虛型骨萎的經(jīng)典名方，在古代醫(yī)案中治療骨萎多有良效。而課題組對(duì)金剛丸前期的研究表明，其治療OP臨床療效確切，金剛丸能夠通過調(diào)節(jié)整合素β1、αVβ3表達(dá)水平，降低骨代謝指標(biāo)，維持骨丟失與骨形成之間的代謝平衡，從而具有一定的抗OP的作用[7-8]。本研究應(yīng)用去卵巢大鼠模型以及成熟的指標(biāo)探索瞬時(shí)受體電位陽離子通道亞族V成員6（transient receptor potential cation channel subfamily V member 6， TRPV6）、骨保護(hù)蛋白（osteoprotegerin， OPG）、核因子-κB受體活化因子（receptor activator of NF-κB， RANK）及核因子-κB受體活化因子配體（receptor activator of NF-κB ligand， RANKL）與OP的關(guān)系，并初步研究金剛丸抗OP代謝的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1? 動(dòng)物及分組

由湖南省中醫(yī)藥研究院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心代為采購(gòu)的60只SPF級(jí)、10月齡、雌性大鼠，體質(zhì)量（220±40） g，動(dòng)物許可證號(hào)：43602500000352。動(dòng)物均喂養(yǎng)在SPF級(jí)動(dòng)物房中，保證通風(fēng)和光線充足，相對(duì)濕度50%左右，并在室溫下適應(yīng)1周，使用標(biāo)準(zhǔn)飼料和飲用水。適應(yīng)性喂養(yǎng)，將60只SPF級(jí)大鼠按照數(shù)字表法隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、己烯雌酚組及高、中、低劑量組，每組10只。

1.2? 實(shí)驗(yàn)藥物

金剛丸制作：肉蓯蓉（酒浸）、菟絲子（酒浸）、杜仲（鹽炒）、萆薢，各120 g等分為細(xì)末，與酒煮豬腰子蜜制成丸。金剛丸（陜西天洋制藥有限公司，規(guī)格：3.5 g/丸，國(guó)藥準(zhǔn)字：Z61020726，批號(hào)：202004）。己烯雌酚片（天津利盛制藥有限公司，規(guī)格：0.5 mg/片，國(guó)藥準(zhǔn)字：H12020154，批號(hào)：219A ）。

1.3? 主要試劑

上樣緩沖液6X（批號(hào)：CW0610）、mRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（批號(hào)：CW2569）、miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（批號(hào)：CW2141）均購(gòu)自中國(guó)北京康為世紀(jì)有限公司;EDTA（中國(guó)大連美倫公司，批號(hào)：MB2514）;核酸染料（中國(guó)北京普利萊公司，批號(hào)：PB11141）;OPG、RANK、RANKL、TRPV6酶聯(lián)免疫吸附試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)：ml133271、ml601105、ml003065、

ml347206）;TRPV6抗體（批號(hào)：ab740201）、OPG抗體（批號(hào)：ab73400）、RANKL抗體（批號(hào)：ab45039）均購(gòu)自英國(guó)abcam公司;青霉素（華北制藥股份有限公司，批號(hào)：L201008）。

1.4? 主要儀器

臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司，型號(hào)：H1650R）;多功能酶標(biāo)分析儀（深圳市匯松科技發(fā)展有限公司，型號(hào)：MB-530）;電熱恒溫培養(yǎng)箱（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司，型號(hào)：DHP-500）;搖床（中國(guó)江蘇其林貝爾公司，型號(hào)：TS-1）;熒光定量RCP儀（美國(guó)Thermo公司，型號(hào)：PIKOREAL96）熒光PCR板（美國(guó)Thermo公司，型號(hào)：SPL0960）。

1.5&nbsp; 模型建立

參照文獻(xiàn)研究[8]，將大鼠固定在無菌手術(shù)臺(tái)上使其平臥夾緊，腹腔注射（10%，0.3 mg/kg）水合氯醛麻醉。常規(guī)消毒后，其腹部經(jīng)切口切開，用手術(shù)線結(jié)扎卵巢下輸卵管，切除雙側(cè)卵巢，切口部位消毒縫合。模型組、己烯雌酚組及高、中、低劑量組均摘取雙側(cè)卵巢。手術(shù)后，術(shù)后連續(xù)3 d肌注青霉素以預(yù)防感染，5萬單位/只，1次/d。

1.6? 藥物處理及取材

高、中、低劑量組每天分別給予3.24、1.62、0.81 g/kg的金剛丸水溶液灌胃;己烯雌酚組每天給予1.0 mg/kg的己烯雌酚水溶液灌胃;正常對(duì)照組和模型組均以等量生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥6周后，處死大鼠，檢測(cè)指標(biāo)。詳細(xì)記錄各組大鼠的體力活動(dòng)與體質(zhì)量。處死前，取各組大鼠腹主動(dòng)脈血5 mL，分離血清，置-80 ℃冰箱保存，待用。

1.7? 指標(biāo)檢測(cè)

1.7.1? 體質(zhì)量? 給藥6周后，各組大鼠均禁食12 h，不禁水，于次日上午稱體質(zhì)量。

1.7.2? HE染色? 石蠟切片制備：大鼠右側(cè)脛骨以4%多聚甲醛固定后，用10% EDTA溶液脫鈣，每3天換液1次，室溫下連續(xù)脫鈣6周，以注射液針頭剌無阻力感為脫鈣完成標(biāo)準(zhǔn)。取脛骨上段1 cm左右長(zhǎng)度，進(jìn)行梯度乙醇脫水（70%、80%、90%、95%、100%、100%、100%，每個(gè)溶液浸泡15 min）;用二甲苯透明切片（2次，共40 min）;取冠狀面向外，常規(guī)石蠟包埋，石蠟切片厚度為5 μm，42 ℃水浴展片后，裱片于載玻片上，60 ℃烤片5 h備用。

染色：石蠟切片用二甲苯脫蠟（梯度酒精下行至水）;在BOUIN氏固定液中再固定1 h，流水沖洗至切片無色;HE染液浸染10 min，用蒸餾水沖洗切片，至水澄清;用1%磷鉬酸分色5～10 min，至骨小梁褪色即可;0.5%固綠染液浸染5 min，梯度乙醇脫水（70%、80%、90%、95%、100%、100%、100%，每個(gè)濃度溶液浸泡5 min）后，用二甲苯透明化處理，最后使用中性樹膠封片，鏡下觀察。

1.7.3? BMD檢測(cè)? 從每個(gè)骨標(biāo)本中取出右股軟組織，用雙能雙光子骨密度（bone mineral density， BMD）儀測(cè)量BMD。采用AG-IX生物力學(xué)通用試驗(yàn)機(jī)測(cè)量出最大載荷和斷裂載荷。大鼠的左股骨均置于試驗(yàn)機(jī)上，跨度為20 mm，加載速度保持在10 mm/min，下壓探頭至脛骨中段，直至其發(fā)生斷裂，記錄載荷變形曲線，并分析數(shù)據(jù)。

1.7.4? ELISA法? 采用ELISA法檢測(cè)血清BALP、E2、BGP、OPG、RANK、RANKL水平。取血清標(biāo)本，用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)品的加樣、加酶、配液、洗滌、顯色測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 min以內(nèi)進(jìn)行。

1.7.5? Western blot法? 蛋白提取：用冰預(yù)冷PBS洗組織，加入300 μL RIPA裂解液于生物樣品均質(zhì)儀中;裂解10 min;4 ℃，12 000 r/min離心15 min（離心半徑8 cm）;將離心后的上清液進(jìn)行制膠、凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，放入1×PBST中洗1 過夜，次日室溫放置30 min。一抗（1∶1000）二抗（1∶3000）孵育結(jié)束，1×PBST洗3次，每次10 min。ECL顯色曝光：使用ECL化學(xué)發(fā)光液與膜孵育1 min，用濾紙吸盡液體，在成像系統(tǒng)儀中拍照。

1.8? 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 21.0數(shù)據(jù)包，實(shí)驗(yàn)中所有結(jié)果以“x±s”表示，數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性、方差齊性檢測(cè)，符合正態(tài)分布與方差齊性則用采用單因素方差分析，不符合則用Dunnett-t檢驗(yàn)，均以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 各組大鼠體質(zhì)量比較

與正常對(duì)照組比較，模型組體質(zhì)量明顯升高（P<0.05）;與模型組比較，高、中、低劑量組和己烯雌酚組體質(zhì)量明顯降低（P<0.05）;與己烯雌酚組比較，高、中、低劑量組體質(zhì)量均降低（P<0.05）;且高、中、低劑量組體質(zhì)量降低呈劑量依賴性（P<0.05）。見表1。

2.2? HE染色結(jié)果顯示

正常對(duì)照組骨小梁形態(tài)完整、無明顯斷裂，骨髓腔正常，骨細(xì)胞排列均勻;模型組骨小梁形態(tài)模糊、廣泛斷裂，骨髓腔增寬，骨細(xì)胞排列散亂;己烯雌酚組及高、中、低劑量組可見骨小梁形態(tài)較模型組改善、結(jié)構(gòu)較為緊密，骨髓腔減小，骨外膜排列接近正常對(duì)照組。見圖1。

2.3? 各組大鼠BMD水平比較

與正常對(duì)照組比較，模型組體BMD水平明顯下降（P<0.05）;與模型組比較，高、中、低劑量組和己烯雌酚組BMD水平升高（P<0.05）;與己烯雌酚組比較，高劑量組BMD水平升高，中、低劑量組BMD水平降低（P<0.05）;高、中、低劑量組BMD水平降低呈劑量依賴性（P<0.05）。見表2。

2.4? 各組大鼠最大負(fù)荷和斷裂負(fù)荷比較

與正常對(duì)照組比較，模型組最大負(fù)荷及斷裂負(fù)荷降低（P<0.05）;與模型組比較，高、中、低劑量組和己烯雌酚組最大負(fù)荷及斷裂負(fù)荷升高（P<0.05）;與己烯雌酚組比較，高、中、低劑量組最大負(fù)荷及斷裂負(fù)荷降低（P<0.05）;高、中、低劑量組最大負(fù)荷和斷裂負(fù)荷降低呈劑量依賴性（P<0.05）。見表3。

2.5? 各組大鼠BALP、E2和BGP水平比較

與正常對(duì)照組比較，模型組BALP和BGP水平升高，E2水平明顯降低（P<0.05）;與模型組相比，高、中、低劑量組和己烯雌酚組BALP和BGP水平降低，E2水平升高（P<0.05）;與己烯雌酚組相比較，高劑量組BALP、BGP降低，E2水平升高;中、低劑量組BALP、BGP升高，E2水平降低（P<0.05）;高、中、低劑量組BALP、E2和BGP水平表達(dá)呈劑量依賴性（P<0.05）。見表4。

2.6? 各組大鼠血清OPG、RANK、RANKL相對(duì)表達(dá)水平比較

與正常對(duì)照組比較，模型組OPG降低，RANK、RANKL含量升高（P<0.05）;與模型組比較，高、中、低劑量組和己烯雌酚組OPG升高，RANK、RANKL降低（P<0.05）;與己烯雌酚組比較，高劑量組OPG升高，RANK、RANKL降低，中、低劑量組OPG、RANK、RANKL升高（P<0.05）;高、中、低劑量組OPG、RANK、RANKL水平升高呈劑量依賴性（P<0.05）。見表5。

2.7? 各組大鼠TRPV6相對(duì)表達(dá)水平比較

與正常對(duì)照組比較，模型組TRPV6明顯下降（P<0.05）;與模型組比較，高、中、低劑量組和己烯雌酚組TRPV6升高（P<0.05）;與己烯雌酚組比較，高劑量組TRPV6升高，中、低劑量組降低（P<0.05）;高、中、低劑量組TRPV6相對(duì)表達(dá)水平降低呈劑量依賴性（P<0.05）。見表6、圖2。

3 討論

隨著我國(guó)進(jìn)入老年化社會(huì)，OP發(fā)病率逐年上升，且以絕經(jīng)后婦女最為多見，是我國(guó)老年女性最為常見的全身骨代謝性疾病[9]。女性絕經(jīng)后由于雌激素水平降低、成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞偶聯(lián)失衡而出現(xiàn)的以腰背痛、短縮畸形、脊柱關(guān)節(jié)退變甚至脆性骨折為主要表現(xiàn)的一種骨代謝紊亂的疾病，對(duì)我國(guó)中老年婦女的身體健康及生活質(zhì)量產(chǎn)生了極大的威脅，因此，充分認(rèn)識(shí)PMOP并了解其發(fā)病機(jī)制，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行對(duì)癥治療，研究并發(fā)現(xiàn)抗OP效驗(yàn)方具有重要的社會(huì)及科研價(jià)值。

骨生物力學(xué)反應(yīng)的是骨質(zhì)微結(jié)構(gòu)的變化以及骨量的綜合反應(yīng)，是多種微量元素代謝的正常與紊亂的表現(xiàn)，骨組織處在吸收和形成平衡狀態(tài)，平衡被打破時(shí)骨生物力學(xué)就會(huì)發(fā)生改變。骨代謝異常導(dǎo)致骨量丟失，正常結(jié)構(gòu)布局的合理性遭到了破壞，骨干強(qiáng)度降低，更加容易發(fā)生骨折，測(cè)量的載荷值反映了骨強(qiáng)度，在一定程度上反映了骨代謝的變化。BMD是骨質(zhì)量的一個(gè)重要標(biāo)志，與骨骼強(qiáng)度和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定密切相關(guān)，是反映OP程度，預(yù)測(cè)骨折危險(xiǎn)性的重要依據(jù)[10]。BALP與成骨細(xì)胞代謝活性有關(guān)，在骨組織重建過程時(shí)，BALP的活性會(huì)相應(yīng)增高[11]。有報(bào)道稱，血漿骨特異性堿性磷酸酶可作為成骨細(xì)胞活性指標(biāo)，并認(rèn)為骨特異性堿性磷酸酶作為骨代謝指標(biāo)比堿性磷酸酶更靈敏[12]。TRPV6是瞬時(shí)性受體電位通道超家族主要成員，高選擇性鈣離子通道主要存在于人體中具有鈣離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能的器官組織[13]，而E2是雌激素之一，也是卵巢分泌的主要性激素之一，E2、BALP、BGP等多種因素對(duì)鈣離子代謝產(chǎn)生影響有可能是通過TRPV6通路影響到骨代謝過程中的骨細(xì)胞分化-形成-吸收-破壞等環(huán)節(jié)，然后通過鈣離子通道的調(diào)控直接影響骨的代謝[14-16]。有研究表明，在人成骨細(xì)胞中存在TRPV6 mRNA，敲除鼠的TRPV6會(huì)導(dǎo)致股骨BMD下降，發(fā)生OP[17-18]。因此，通過調(diào)節(jié)TRPV6鈣離子通道的狀態(tài)，進(jìn)而改變成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞的增殖分化行為，最終改善機(jī)體骨代謝狀況，可能是臨床治療OP等骨代謝疾病的新探索[19]。OPG/RANKL/RANK系統(tǒng)在骨代謝過程中起著至關(guān)重要的作用，其可以促進(jìn)破骨細(xì)胞的分化及骨吸收活性[20]。成骨細(xì)胞及骨髓基質(zhì)細(xì)胞分泌表達(dá)OPG可與RANKL競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，從而阻斷RANKL與RANK之間的相互作用[21]。OPG作為一種可溶性的分泌型糖蛋白起到抑制骨吸收的作用，而RANK作為一種跨膜蛋白，誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化增殖，與RANKL結(jié)合后成為一種強(qiáng)促破骨細(xì)胞分化成熟劑，推動(dòng)體內(nèi)骨吸收[22-23]。

在本次研究中，與正常對(duì)照組相比，模型大鼠的BALP、BGP、RANK、RANKL水平明顯升高，E2、BMD、OPG、TRPV6均明顯降低。與模型組相比，高、中、低劑量組BALP、BGP、RANK、RANKL、最大負(fù)荷、斷裂負(fù)荷水平降低，E2、BMD、OPG、TRPV6、最大負(fù)荷、斷裂負(fù)荷水平顯著升高。高、中、低劑量組和己烯雌酚組大鼠體質(zhì)量增加明顯，模型組骨小梁形態(tài)模糊、廣泛斷裂，骨髓腔增寬，骨細(xì)胞排列散亂;高、中、低劑量組和己烯雌酚組均可見骨小梁形態(tài)較模型組改善、結(jié)構(gòu)較為緊密，骨髓腔減小，骨外膜排列改善。

綜上，本研究通過對(duì)成熟可靠的指標(biāo)研究確認(rèn)金剛丸對(duì)OP骨代謝的作用。結(jié)果表明，金剛丸可能通過提高PMOP模型大鼠雌激素水平，調(diào)節(jié)骨代謝，提高生物力學(xué)性能和BMD，達(dá)到抗OP的療效和骨保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過影響TRPV6表達(dá)上調(diào)OPG表達(dá)，下調(diào)RANKL表達(dá)。但具體的分子機(jī)制還未完全探索清楚，特別是TRPV6是否在骨代謝中起到關(guān)鍵作用，需要進(jìn)一步的深入研究。

參考文獻(xiàn)

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