管弋铦 韓和平 李利偉

(重慶登康口腔護(hù)理用品股份有限公司，重慶 400025)

引言

厚樸作為中國重點(diǎn)保護(hù)的珍稀藥材，其主要活性成分為厚樸酚與和厚樸酚。厚樸酚與和厚樸酚具有抗菌、抗炎、抗病毒和抗氧化等廣譜性生物活性，使厚樸提取物在口腔護(hù)理用品中逐漸得到應(yīng)用[1,2]。目前，關(guān)于厚樸酚的含量測定多集中于中藥制劑方面[3,4]，而口腔護(hù)理產(chǎn)品中厚樸酚含量的分析鮮有報(bào)道，且關(guān)于牙膏中厚樸酚與和厚樸酚含量測定的最優(yōu)前處理?xiàng)l件的研究尚未見報(bào)道。

本研究采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)牙膏中厚樸酚與和厚樸酚進(jìn)行前處理方法優(yōu)化，通過單因素分析法對(duì)提取溶劑、甲醇濃度、料液比、振蕩提取時(shí)間和超聲時(shí)間5個(gè)影響因素進(jìn)行考察，以期提供一種準(zhǔn)確度高、檢測效率快的牙膏中厚樸酚與和厚樸酚含量的檢測方法。

1 試劑與儀器

1.1 試劑

甲醇、乙腈(沃凱，色譜純)，甲酸(川東化工，分析純)，水為實(shí)驗(yàn)室純水機(jī)制備的一級(jí)水，厚樸酚對(duì)照品與和厚樸酚對(duì)照品均購自上海源葉生物。

兩年來，公司黨委認(rèn)真學(xué)習(xí)貫徹上級(jí)黨組織的重要精神和決策部署，以“著力四個(gè)自信、聚焦三抓三要、鞏固雙基建設(shè)”為工作思路，理直氣壯抓黨建，為生產(chǎn)經(jīng)營任務(wù)的完成提供了強(qiáng)有力的政治和組織保障。2017年以來，公司產(chǎn)量利潤雙創(chuàng)新高，不少集體和個(gè)人榮獲昆明市勞動(dòng)模范、云南省五一勞動(dòng)獎(jiǎng)?wù)?、五一巾幗?biāo)兵，云南省工人先鋒號(hào)、上級(jí)公司優(yōu)秀黨員，優(yōu)秀黨務(wù)工作者、先進(jìn)基層黨組織等榮譽(yù)。

1.2 儀器

高效液相色譜儀(1290 Infinity Ⅱ，安捷倫)；Welch Ultimate XB-C18色譜柱( 4.6mm×250mm，5μm) 、電子天平 ( ME204，梅特勒托利多) 、超聲清洗器(GT-SONIC-D9，固特) 、超純水系統(tǒng)( 1810A，摩爾)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

稱取1g(精確至0.0001g)牙膏樣品于20mL玻璃取樣瓶中，加玻璃珠數(shù)顆，用移液管分別按料液比1∶4、1∶6、1∶8、1∶10、1∶15加入4、6、8、10、15mL 90%甲醇，在轉(zhuǎn)速1800r/min條件下振蕩提取15min，超聲30min，冷卻至室溫后提取液過0.22μm有機(jī)相濾膜，濾液上機(jī)檢測，結(jié)果見表4。當(dāng)料液比達(dá)到1∶10后結(jié)果變化較小。與1∶15相比，1∶10的料液比經(jīng)濟(jì)效益更高，故綜合考慮選擇料液比為1∶10。

2.1 液相色譜條件

建筑給排水工程施工結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)對(duì)管道的清潔性、保溫性以及防腐性進(jìn)行檢查，防止給排水工程出現(xiàn)因高溫及腐蝕等因素影響管道正常運(yùn)行。同時(shí)，在整個(gè)安裝工程結(jié)束之后，還應(yīng)該對(duì)排水系統(tǒng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整和驗(yàn)收，檢測整個(gè)安裝質(zhì)量是否合格。

2.2 提取溶劑的篩選

稱取1g(精確至0.0001g)牙膏樣品于20mL玻璃取樣瓶中，加玻璃珠數(shù)顆，用移液管加入10mL 90%甲醇，在轉(zhuǎn)速1800r/min條件下分別振蕩提取2min、5min、8min、10min、15min、20min，超聲30min，冷卻至室溫后提取液過0.22μm有機(jī)相濾膜，濾液上機(jī)檢測。如表3所示，振蕩提取15min以上，樣品分散徹底、提取效果較好，與20min相比，振蕩15min效率更高。因此，綜合考量選取振蕩提取時(shí)間為15min。

表1 不同提取溶劑對(duì)厚樸酚和和厚樸酚提取的比較

2.3 甲醇濃度的篩選

稱取1g(精確至0.0001g)牙膏樣品于20mL玻璃取樣瓶中，加玻璃珠數(shù)顆，用移液管加入10mL 90%甲醇，在轉(zhuǎn)速1800r/min條件下振蕩提取15min，分別超聲0min、10min、20min、30min、40min、60min，冷卻至室溫后提取液過0.22μm有機(jī)相濾膜，濾液上機(jī)檢測，其結(jié)果如表5所示。當(dāng)超聲時(shí)間大于20min后提取效果提升不明顯，但預(yù)實(shí)驗(yàn)中某些特殊牙膏提取時(shí)，超聲時(shí)間不足會(huì)造成分散不充分，綜合考量選擇超聲時(shí)間為30min。

表2 甲醇濃度對(duì)厚樸酚與和厚樸酚提取的影響

2.4 振蕩提取時(shí)間的篩選

稱取1g(精確至0.0001g)牙膏樣品于20mL玻璃取樣瓶中，加玻璃珠數(shù)顆，用移液管分別加入10mL甲醇、乙醇、乙腈及水，在轉(zhuǎn)速1800r/min條件下常溫振蕩提取15min，超聲30min，冷卻至室溫后提取液過0.22μm有機(jī)相濾膜，濾液上機(jī)檢測。不同提取溶劑對(duì)牙膏中厚樸酚與和厚樸酚提取效果的影響結(jié)果如表1所示，提取效果分別是甲醇>乙醇>水>乙腈。

(2)冷源中有2臺(tái)吸收式溴化鋰機(jī)組，蒸汽來源為3臺(tái)3.9/h的燃油蒸汽鍋爐，和直燃型溴化鋰制冷機(jī)組相比，鍋爐轉(zhuǎn)換效率、熱力管網(wǎng)兩部分損失增大，整個(gè)冷源系統(tǒng)的效率明顯下降；

表3 振蕩提取時(shí)間對(duì)厚樸酚與和厚樸酚提取的影響

2.5 料液比的篩選

本研究采用單因素分析法考察提取溶劑、甲醇濃度、料液比 、振蕩提取時(shí)間和超聲時(shí)間5個(gè)因素對(duì)厚樸酚與和厚樸酚含量檢測的影響，從而選出最優(yōu)前處理?xiàng)l件。由于上述5因素分別來源于溶劑、時(shí)間、設(shè)備，彼此互不相容，設(shè)備之間原理不同且獨(dú)立工作，不存在交互作用，可用單因素實(shí)驗(yàn)法篩選，以確定前處理最優(yōu)方法。

依據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了液相色譜分析條件為Welch Ultimate XB-C18色譜柱( 4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈∶0.1 %甲酸溶液=52∶48(V/V)；流速1.0mL/min；柱溫30℃；檢測波長為294nm，參比波長450nm；進(jìn)樣體積為10μL。在此條件下空白對(duì)照樣品、對(duì)照品和含厚樸酚與和厚樸酚牙膏的HPLC圖譜如圖1所示。

表4 不同料液比對(duì)厚樸酚與和厚樸酚提取的比較

2.6 超聲時(shí)間的篩選

稱取1g(精確至0.0001g)牙膏樣品于20mL玻璃取樣瓶中，加玻璃珠數(shù)顆，用移液管分別加入10mL 50%、70%、90%、100%濃度的甲醇，在轉(zhuǎn)速1800r/min條件下常溫振蕩提取15min，超聲30min，冷卻至室溫后提取液過0.22μm有機(jī)相濾膜，濾液上機(jī)檢測，結(jié)果如表2所示。當(dāng)用50%甲醇提取時(shí)，提取液難以過膜，100%甲醇提取時(shí)牙膏易板結(jié)，難以分散。以90%的甲醇提取時(shí)，牙膏更易分散，過膜時(shí)透過性相對(duì)較好，且提取率與100%甲醇相當(dāng)。楊培等[5]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)甲醇濃度在10%～90%時(shí)，厚樸酚與和厚樸酚的提取率隨甲醇濃度的增加而增加，而90%與100%甲醇提取結(jié)果無顯著差異，與本研究結(jié)果一致。因此，綜合考慮，選擇90%甲醇作為提取厚樸酚與和厚樸酚的最佳濃度。

從像控點(diǎn)的布設(shè)方案可以看出，方案一與方案二的區(qū)別在于，方案一在測區(qū)周邊未進(jìn)行像控點(diǎn)加密，方案二在測區(qū)周邊做了像控點(diǎn)加密，兩種方案在測區(qū)內(nèi)的布設(shè)方法是相同的。在測區(qū)周邊均進(jìn)行加密布點(diǎn)的情況下，設(shè)計(jì)了方案三、方案四，這兩種方案與方案二的區(qū)別在于，在方案二的基礎(chǔ)上，兩個(gè)方案在測區(qū)內(nèi)，旁向方向的像控點(diǎn)間隔航線數(shù)在增加。

表5 超聲時(shí)間對(duì)厚樸酚與和厚樸酚提取的影響

2.7 確定的提取條件

稱取牙膏1g(精確至0.0001g)于20mL玻璃樣品瓶中，加玻璃珠數(shù)枚，再以移液管加10mL 90%甲醇，以多聯(lián)漩渦混勻器于1800r/min轉(zhuǎn)速下振蕩提取15min，然后超聲30min，冷卻至室溫后提取液用0.22μm有機(jī)相膜過濾，濾液待測。

2.8 優(yōu)選前處理?xiàng)l件的精密度考察

取同一批牙膏樣品6份，按照優(yōu)選前處理?xiàng)l件處理后進(jìn)行色譜分析，記錄厚樸酚與和厚樸酚的含量，并計(jì)算其RSD值，結(jié)果如表6所示。由表6可知，優(yōu)選的前處理?xiàng)l件方法精密度高，檢測結(jié)果穩(wěn)定。

表6方法精密度試驗(yàn)

3 結(jié)論

本研究考察了采用高效液相色譜法測定牙膏中厚樸酚與和厚樸酚含量時(shí)，前處理過程中提取溶劑、甲醇濃度、料液比、振蕩提取時(shí)間和超聲時(shí)間等5個(gè)因素對(duì)提取結(jié)果的影響。根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果優(yōu)選出高效液相色譜法測定牙膏中厚樸酚與和厚樸酚含量的最優(yōu)前處理?xiàng)l件為：稱取牙膏1g，加玻璃珠數(shù)枚，再以移液管加10mL 90%甲醇，以多聯(lián)漩渦混勻器于轉(zhuǎn)速1800r/min條件下振蕩提取15min，超聲處理30min。方法精密度試驗(yàn)結(jié)果表明，篩選出的最優(yōu)前處理?xiàng)l件方法精密度高，有利于提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。