宋光同，江 河，王 芬，蔣業(yè)林，陳 祝，王佳佳，吳倉倉

( 1.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 水產(chǎn)研究所，安徽 合肥 230031； 2.水產(chǎn)增養(yǎng)殖安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031 )

克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)，屬節(jié)肢動(dòng)物門、甲殼綱、十足目、爬行亞目、螯蝦科、原螯蝦屬，俗稱淡水小龍蝦、小龍蝦等，該蝦肉質(zhì)細(xì)膩，營養(yǎng)豐富，富含鈣質(zhì)，是我國重要的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)蝦類之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2020年，我國小龍蝦養(yǎng)殖總面積近133.3萬hm2，養(yǎng)殖總產(chǎn)量近200萬t，市場供需拐點(diǎn)出現(xiàn)，小龍蝦產(chǎn)業(yè)面臨洗牌，價(jià)格紅利逐漸失去，市場逐漸從數(shù)量轉(zhuǎn)向品質(zhì)方面，逐漸從“大養(yǎng)蝦”轉(zhuǎn)向“養(yǎng)大蝦”，培育優(yōu)質(zhì)大規(guī)格早繁苗是養(yǎng)殖大規(guī)格品質(zhì)蝦的重要技術(shù)手段之一。克氏原螯蝦沒有生殖蛻皮的習(xí)性，5—9月為繁殖期，6—8月為繁殖高峰期；每年產(chǎn)卵1次，抱卵期為8—10月，高峰期9月下旬至10月中旬，10月底以后抱卵的蝦由于水溫逐步降低，一直延續(xù)到翌年春季才孵化；孵化所需要的有效積溫為453～516 ℃·d，群體性腺發(fā)育和繁殖孵化皆存在不同步性[1-4]?？耸显r卵子發(fā)生經(jīng)歷4個(gè)時(shí)相，卵巢發(fā)育可分為5個(gè)時(shí)期，卵巢指數(shù)在春季較低，秋季達(dá)到頂峰，最高平均值出現(xiàn)在10月，10月后生殖群體逐漸減少，卵巢指數(shù)也逐漸下降，進(jìn)入冬季后有一個(gè)明顯的低谷[5-6]。溫度、光照、鹽度等環(huán)境因子皆不同程度影響其性腺發(fā)育及繁殖進(jìn)程[7-15]。近年來，關(guān)于冬季利用塑料溫棚保溫提早繁育克氏原螯蝦苗種有少量報(bào)道，但大多停留在生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)，缺乏系統(tǒng)性研究，育苗產(chǎn)量也不夠穩(wěn)定[16-23]；親本規(guī)格對克氏原螯蝦苗繁育的影響以及冬季洞穴中親蝦孵化情況也鮮見報(bào)道。為此，筆者開展塑料溫棚保溫及不同規(guī)格的親本對克氏原螯蝦繁殖指標(biāo)的影響研究，以期為溫棚克氏原螯蝦早繁以及親本選擇提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

在安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水產(chǎn)研究所試驗(yàn)基地，設(shè)置試驗(yàn)小池18個(gè)，其規(guī)格為底面積1 m2、深1 m，分別計(jì)作A1、A2、A3、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3、E1、E2、E3、F1、F2、F3。每個(gè)試驗(yàn)小池四周設(shè)置寬50 cm的防逃網(wǎng)片，網(wǎng)片上沿縫制8 cm的塑料薄膜，將各個(gè)試驗(yàn)小池分開。2018年9月12日，從合肥市大邵生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司選購規(guī)格15～50 g的克氏原螯蝦親本共20 kg，并按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)，進(jìn)行每個(gè)試驗(yàn)小池親本放養(yǎng)。

1.2 方法

克氏原螯蝦具有冬季繁殖習(xí)性，為了探尋冬季溫棚保溫、親蝦規(guī)格對克氏原螯蝦苗繁育影響，以及冬季洞穴中親蝦的孵化規(guī)律，同時(shí)進(jìn)行了3個(gè)試驗(yàn)。

1.2.1 試驗(yàn)1：溫棚內(nèi)和室外溫度環(huán)境對克氏原螯蝦苗繁育影響試驗(yàn)

采用對照試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，選擇試驗(yàn)池A1、A2、A3、B1、B2和B3，投放親蝦規(guī)格基本一致，皆為20～30 g，平均(25.51±2.86) g。2018年11月12日，氣溫降至15 ℃以下，在試驗(yàn)池A1、A2、A3上方設(shè)置規(guī)格為5 m×2 m×2 m的塑料溫棚，營造溫棚保溫環(huán)境。而試驗(yàn)池B1、B2、B3保持室外自然環(huán)境，不采取任何保溫措施(表1)。2018年11月13日至2019年5月28日，每日17:30測量棚外棚內(nèi)氣溫和水溫。

表1 試驗(yàn)親蝦投放情況Tab.1 Stocking of red swamp crayfish broodstock in the experiment

1.2.2 試驗(yàn)2：親蝦規(guī)格對克氏原螯蝦苗繁育影響試驗(yàn)

采用對比試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，選擇室外9個(gè)試驗(yàn)池(C1、C2、C3、D1、D2、D3、E1、E2、E3)，設(shè)置3個(gè)不同親本規(guī)格梯度試驗(yàn)組，每組3個(gè)平行。其中試驗(yàn)池C1、C2、C3投放小規(guī)格親蝦(15～20 g)，平均(17.65±1.73) g；試驗(yàn)池D1、D2、D3投放中規(guī)格組親蝦(25～35 g)，平均(29.63±2.96) g；試驗(yàn)池E1、E2、E3投放大規(guī)格親蝦(40～50 g)，平均(44.45±2.86) g。每個(gè)試驗(yàn)池投放親蝦密度相同，皆為24 尾/m2，雌雄比2∶1(表1)。

1.2.3 試驗(yàn)3：冬季洞穴中雌性親蝦孵化規(guī)律觀察試驗(yàn)

選擇室外試驗(yàn)池F1、F2、F3，分別投放規(guī)格15～50 g的克氏原螯蝦親本24尾，雌雄比2∶1，于2018年11月15日、2018年12月15日、2019年1月15日，分別排干試驗(yàn)池F1、F2和F3，每次挖洞穴，采集雌性親蝦5尾，檢查其抱卵、抱仔以及排苗情況(表1)。

1.2.4 試驗(yàn)日常管理方法

每個(gè)試驗(yàn)池日常管理方式基本一致。2018年9月13日—2019年12月5日，投喂全價(jià)小龍蝦顆粒飼料(蛋白含量30%，粒徑2 mm)，培育親蝦，每日17:30～18:00投喂1次，日投飼率為2%。進(jìn)入越冬期后，保持試驗(yàn)池水位70～80 cm，不投喂任何飼料。2019年3月5日發(fā)現(xiàn)蝦苗活動(dòng)，利用粉碎機(jī)將小龍蝦顆粒飼料打碎投喂蝦苗，每日每個(gè)試驗(yàn)池投喂飼料3.5 g；2019年4月1日后，改投喂全價(jià)小龍蝦專用顆粒飼料(蛋白含量30%，粒徑2 mm)，每個(gè)試驗(yàn)池投喂5～10 g，直至試驗(yàn)結(jié)束。親蝦培育期間，每隔15 d換水1次，每次換水20%～30%；每隔10 d，使用1次過硫酸氫鉀復(fù)合鹽(含量20%)和EM菌，改善底質(zhì)，調(diào)節(jié)水質(zhì)。

1.3 數(shù)據(jù)測定、計(jì)算與分析

2019年4月22日、2019年5月28日，分別從試驗(yàn)池A1、A2、A3、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3、E1、E2、E3中抽樣測定50尾蝦苗的體長、體質(zhì)量；2019年5月28日排干試驗(yàn)水，統(tǒng)計(jì)蝦苗、回捕親蝦數(shù)量。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 17.0及Excel 2003對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與繪圖，并對不同規(guī)格親蝦繁殖性能、回捕率進(jìn)行方差分析、顯著性檢驗(yàn)，對差異顯著的性狀進(jìn)行多重比較分析；試驗(yàn)池生物量為平均蝦苗規(guī)格與蝦苗數(shù)量的乘積。

2 結(jié) 果

2.1 室外池及溫棚內(nèi)池氣溫、水溫差異

試驗(yàn)期間，總共檢測氣溫、水溫165 d。外池與溫棚內(nèi)池氣溫、水溫變化趨勢基本相同(圖1、圖2)，其中外池水溫有部分日期低于5 ℃(圖1)，而溫棚內(nèi)池水溫皆高于5 ℃(圖2)。溫棚內(nèi)池水溫低于8 ℃的天數(shù)為26 d，占檢測總天數(shù)的15.8%，較外池天數(shù)少(表2)。安徽省每年入冬降溫與開春升溫期間(大約11月15日至翌年3月8日)，溫棚內(nèi)池平均氣溫為

圖1 室外池氣溫、水溫變化趨勢Fig.1 Changes in atmospheric temperature and water temperature in outdoor ponds

圖2 溫棚內(nèi)池氣溫、水溫變化趨勢Fig.2 Changes in atmospheric temperature and water temperature in plastic greenhouses

表2 室外池、溫棚內(nèi)池氣溫和水溫差異情況

(7.50±3.85) ℃，較外池高1.24 ℃；平均水溫為(9.66±2.84) ℃，較外池高1.97 ℃(表2)；每次降溫，外池降溫速度要明顯快于溫棚內(nèi)池。安徽省每年冬季最冷時(shí)節(jié)(大約12月26日至翌年1月17日)，溫棚內(nèi)池平均氣溫為(5.50±0.82) ℃，較外池高2.82 ℃，平均水溫為(7.24±0.96) ℃，較外池高3.44 ℃(表2)。

2.2 溫棚內(nèi)池與外池對克氏原螯蝦苗繁育的影響

經(jīng)抽樣檢測，2019年4月22日，室外池蝦苗體質(zhì)量(0.66±0.56) g，溫棚內(nèi)池蝦苗體質(zhì)量(1.87±1.73) g，溫棚內(nèi)池蝦苗體質(zhì)量為室外池蝦苗的2.82倍；2019年5月28日，室外池蝦苗體質(zhì)量(5.11±2.66) g，溫棚內(nèi)池蝦苗體質(zhì)量(7.47±3.27) g，溫棚內(nèi)池蝦苗體質(zhì)量為室外池蝦苗的1.46倍。對2次測定的蝦苗體質(zhì)量采用數(shù)理統(tǒng)計(jì)的差異性t檢驗(yàn)分析，t>t0.01，P<0.01,差異極顯著。2019年5月28日，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)蝦數(shù)量，溫棚內(nèi)池收獲蝦苗(213±39)尾/m2，室外池培育蝦苗(249±56)尾/m2，對育苗量數(shù)據(jù)采用數(shù)理統(tǒng)計(jì)的差異性t檢驗(yàn)分析，t0.05，差異不顯著。溫棚內(nèi)蝦生物量為1591.1 g，較室外池高25%(表3)。

表3 兩種生境克氏原螯蝦蝦苗生長及育苗情況Tab.3 Growth and rearing of red swamp crayfish P. clarkii in two habitats

2.3 親本規(guī)格對克氏原螯蝦苗繁育的影響

經(jīng)抽樣檢測，2019年4月22日，大、中、小規(guī)格親蝦組繁育的蝦苗規(guī)格分別為(0.92±0.78) g、(0.88±0.65) g和(0.63±0.24) g，大規(guī)格親蝦組與中規(guī)格親蝦組繁育蝦苗規(guī)格差異不顯著(P>0.05)，大規(guī)格親蝦組繁育蝦苗規(guī)格極顯著大于小規(guī)格親蝦組(P<0.01)；2019年5月28日，大、中、小規(guī)格親蝦組繁育蝦苗規(guī)格分別為(5.97±2.51) g、(5.68±2.39) g和(4.23±1.68) g，大規(guī)格親蝦組與中規(guī)格親蝦組繁育蝦苗規(guī)格差異不顯著(P>0.05),極顯著大于小規(guī)格親蝦組(P<0.01)。大、中、小規(guī)格親蝦組平均育苗量分別為(206±103)尾、(418±59)尾和(455±56)尾，中規(guī)格親蝦組與小規(guī)格親蝦組平均育苗量差異不顯著(P>0.05)，極顯著高于大規(guī)格親蝦組(P<0.01)，中規(guī)格親蝦組繁育蝦苗生物量最大,達(dá)2375.9 g，小規(guī)格親蝦組次之，大規(guī)格親蝦組最小，僅1229.2 g(表4)。

表4 不同規(guī)格克氏原螯蝦親蝦繁育蝦苗規(guī)格及育苗量Tab.4 The size and number of postlarvae hatched from broodstock of red swamp crayfish P. clarkii with different sizes

2.4 不同親蝦規(guī)格對繁殖后親蝦回捕率的影響

2019年4月1日開始，每隔7 d，利用地籠捕撈越冬親蝦，至2019年5月28日，干池捕撈全部親蝦。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，大規(guī)格親蝦池、中規(guī)格親蝦池、小規(guī)格親蝦池平均回捕親蝦(7.3±1.53) 尾/m2、(9.0±1.00) 尾/m2、(13.7±1.53) 尾/m2。分析統(tǒng)計(jì)表明，小規(guī)格親蝦池與中規(guī)格親蝦池的親蝦回捕率差異不顯著(P>0.05)，小規(guī)格親蝦池顯著高于大規(guī)格親蝦池(P<0.05)；其中小規(guī)格親蝦池雌性親蝦回捕率顯著高于大、中規(guī)格親蝦池(P<0.05)；中規(guī)格親蝦池、小規(guī)格親蝦池雄蝦回捕率差異不顯著(P>0.05)，小規(guī)格親蝦池顯著高于大規(guī)格親蝦池(P<0.05)?？傮w上，雌蝦回捕率明顯高于雄蝦(表5)。

表5 克氏原螯蝦親蝦繁育后回捕情況Tab.5 Recovery of broodstock of red swamp crayfish P. clarkii after spawning

2.5 冬季洞穴雌性親蝦產(chǎn)卵及孵化規(guī)律

通過定期掘穴取親蝦并觀察表明，冬季進(jìn)入11月，洞穴的克氏原螯蝦雌性親蝦皆呈抱卵或抱仔狀態(tài)，無排苗個(gè)體；12月排苗率達(dá)60%；翌年1月，排苗率達(dá)80%(表6)。

表6 冬季洞穴雌性親蝦產(chǎn)卵及孵化情況Tab.6 Spawning and hatching of female broodstock in caves in winter

3 討 論

3.1 溫棚保溫對克氏原螯蝦繁殖的影響

水溫對甲殼動(dòng)物生長、蛻皮、生殖、攝食、免疫有著重要影響[8-15]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，整個(gè)冬季，溫棚內(nèi)試驗(yàn)池氣溫和水溫明顯高于室外試驗(yàn)池；尤其在冬季最冷季節(jié)，溫棚內(nèi)試驗(yàn)池水溫能維持在5 ℃以上，且溫棚內(nèi)池平均氣溫較室外池高2.82 ℃，平均水溫較室外池高3.44 ℃；入冬前，溫棚內(nèi)池水溫下降比室外池相對緩慢，而開春后，水溫回升較快，蝦苗停食晚，開食早，皆有利于蝦苗快速生長。經(jīng)2019年4月22日和5月28日兩次抽樣檢測表明，溫棚內(nèi)池蝦苗體質(zhì)量分別為室外池蝦苗的 2.82倍和1.46倍，表明冬季溫棚內(nèi)水溫較高，蝦苗生長速度明顯提高，平均體質(zhì)量較高，而室外池水溫較低，且存在低于5 ℃的寒冷天氣，蝦苗的生長受到抑制，平均體質(zhì)量較低。倪靜靜等[8]研究認(rèn)為，當(dāng)水溫處于15～30 ℃，克氏原螯蝦對配合飼料、玉米、魚肉3組飼料的攝食率均隨著水溫的升高而增加，在低溫5 ℃情況下很少活動(dòng)，基本停止攝食，這與本試驗(yàn)的結(jié)論一致；也有研究表明，隨著溫度升高，蝦苗的生長速度加快[10-11]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，溫棚內(nèi)池蝦苗平均育苗量稍低于室外池，但差異不顯著(P<0.05)，表明低溫并不影響蝦苗的成活率。與韓曉磊等[11]的在4～25 ℃內(nèi)，心率和耗氧率隨著溫度的降低而減小，個(gè)體死亡率也隨之變小的研究結(jié)論一致。本試驗(yàn)中，溫棚內(nèi)克氏原螯蝦繁育蝦苗生產(chǎn)速度快，與國內(nèi)溫棚育苗試驗(yàn)可提前20～30 d出苗的研究結(jié)論[16-23]基本一致。

3.2 親蝦規(guī)格對克氏原螯蝦繁殖的影響

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，25～35 g的中規(guī)格親蝦為繁育生產(chǎn)優(yōu)選親蝦，該規(guī)格繁育的蝦苗育苗量與小規(guī)格親蝦差異不顯著，明顯高于大規(guī)格親蝦；與大規(guī)格親蝦繁育的蝦苗規(guī)格差異不顯著，但明顯高于小規(guī)格親蝦；中規(guī)格親蝦繁育的蝦苗生物量最大，達(dá)2375.9 g，小規(guī)格親蝦次之，大規(guī)格親蝦最小，僅1229.2 g。本試驗(yàn)結(jié)果與徐崢等[24]進(jìn)行克氏原螯蝦高產(chǎn)繁育試驗(yàn)中選擇親蝦規(guī)格基本一致。小規(guī)格親蝦繁殖后回捕率明顯高于大、中規(guī)格親蝦(P<0.05)，表明親蝦規(guī)格小可以明顯提高親蝦繁殖后的回捕率，可能與克氏原螯蝦親蝦繁殖過程中，蝦體規(guī)格越大，性腺發(fā)育越早，停食進(jìn)入繁殖時(shí)間越早，繁殖后進(jìn)入冬季，其儲(chǔ)存的能量需要供給更長時(shí)間，進(jìn)而影響其冬季成活率等有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果與實(shí)際生產(chǎn)中越冬期大規(guī)格親蝦容易死亡情況相符，且雌蝦的回捕率高于雄蝦，與生產(chǎn)中冬季大批雄蝦死亡的現(xiàn)象相符。Reynold等[25]認(rèn)為，克氏原螯蝦的產(chǎn)卵數(shù)量與雌蝦的個(gè)體大小密切相關(guān)；Nobblitt等[26]認(rèn)為，個(gè)體更大的雌蝦繁殖力更強(qiáng)，能產(chǎn)生更多的卵細(xì)胞；雄性克氏原螯蝦擇偶傾向是以大為美，與大個(gè)體雌蝦交配[27]。以上研究表明，親蝦以大規(guī)格蝦為宜，與本試驗(yàn)結(jié)果有所不同，可能與試驗(yàn)條件不同有關(guān)，筆者不僅考慮了親蝦本身的繁殖能力，還考慮了環(huán)境因素對親蝦和蝦苗的影響。

3.3 冬季洞穴中雌性親蝦產(chǎn)卵及孵化規(guī)律

克氏原螯蝦繁育需要經(jīng)歷2～3個(gè)月的嚴(yán)寒冬季，多數(shù)年前沒有完成排卵排苗的親蝦會(huì)進(jìn)入洞穴，在洞穴中完成產(chǎn)卵孵化，直到第二年開春溫度上升或者加水刺激其爬出洞穴。觀察表明，11月洞穴中所有親蝦呈抱卵狀態(tài)，12月開始逐漸排苗，排苗率達(dá)60%，1月排苗率達(dá)80%。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，冬季洞穴中溫度較恒定，有利于親蝦孵化和幼蝦存活，暴露在水中的抱卵蝦及抱仔蝦，容易出現(xiàn)卵子霉變脫落，仔蝦缺食成活率不高等情況。因此11月、12月盡量不要增加水位，防止抱卵蝦被水刺激爬出洞穴，洞外水溫變化幅度較大，抱卵容易霉變脫落，影響孵化率，洞外水溫過低，也會(huì)影響幼蝦成活率。筆者認(rèn)為，與11月、12月相比，2月后加水，刺激蝦苗出洞穴，有利于繁殖后親蝦及幼苗的存活。筆者在2月沒有繼續(xù)觀察，洞穴中的親蝦是否能在2月完成排苗還需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，溫棚保溫設(shè)施可提高冬季水溫，尤其在冬季最冷季節(jié)，溫棚內(nèi)試驗(yàn)池水溫能維持在5 ℃以上，可加快克氏原螯蝦抱卵孵化進(jìn)程，提高蝦苗生長速度和蝦苗規(guī)格；與小規(guī)格和大規(guī)格親蝦相比，選擇規(guī)格為25～35 g的中規(guī)格親蝦，在育苗量、蝦苗規(guī)格以及繁殖后親蝦回捕率方面皆具有優(yōu)勢；每年11月、12月為抱卵孵化期，不要隨意增加水位，防止抱卵霉變脫落；可以選擇2月后孵化出幼苗時(shí)，加水刺激蝦苗出洞穴，有利于幼苗存活，提高育苗量。