孫江漫 李敏 邵燕 孟祥兆 陳寶榮 于洪遠

作者單位：1 北京航天總醫(yī)院檢驗科，北京 100076

2 北京金域醫(yī)學(xué)檢驗實驗室有限公司，北京 100015

中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白（Neutrophil gelatinase associated lipocalin，NGAL）是一種小分子蛋白，由Kjeldsen 等[1]首次在中性粒細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，其位于染色體9q34 上，分子量25kD，屬于脂鈣蛋白家族。正常情況下，NGAL 在成熟外周血中性粒細(xì)胞和人體組織器官中的mRNA 表達較低。但在各種原因如腎毒性藥物、造影劑、感染、心臟病、重大手術(shù)、糖尿病等[2]導(dǎo)致的急性腎損傷（Acute kidney injury，AKI）早期，血液、尿液中的NGAL 濃度顯著升高，且與傳統(tǒng)腎功能檢測指標(biāo)如血肌酐、血尿素氮、尿量等相比，NGAL 是一種更靈敏、更理想的早期腎功能損傷檢測指標(biāo)。因此，血液和（或）尿液中NGAL 濃度升高對AKI 的診斷、治療和預(yù)后有重要的臨床意義[3]。本研究通過對市售的NGAL試劑盒參數(shù)進行分析研究后最終選取兩種試劑盒進行性能驗證，并比較其不同檢測系統(tǒng)結(jié)果的一致性，為NGAL 的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣本20 份無溶血、黃疸、乳糜的臨床剩余單人份血清樣本，衛(wèi)健委質(zhì)控品（202011～202015）。

1.2 儀器日立7170 自動生化分析儀。

1.3 試劑邁克試劑檢測原理是膠乳免疫比濁，試劑批號0819021，校準(zhǔn)品批號0819021，質(zhì)控品批號0619021；生之源試劑檢測原理為膠乳增強免疫透射比濁，試劑批號19111458-A1，校準(zhǔn)品批號20190808，質(zhì)控品批號20190808。

1.4 方法檢測前對儀器進行日常清洗、常規(guī)維護和保養(yǎng)。按照各試劑盒說明書在日立7170 自動生化分析儀上設(shè)置參數(shù)，通過常規(guī)方法對儀器和試劑進行校準(zhǔn)，質(zhì)控在控進行下一步驗證。

1.4.1 正確度 目前國內(nèi)外尚無NGAL 參考方法和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，故通過檢測衛(wèi)健委質(zhì)控品（202011～202015）評價兩種試劑檢測結(jié)果的正確度；再使用兩種試劑同時檢測20 份單人份血清樣本，對檢測結(jié)果進行配對t檢驗，以評估兩種試劑檢測結(jié)果的一致性。

1.4.2 精密度 參考行標(biāo)WS/T 420-2013，檢測2 個濃度水平（其中水平1 為正常值、水平2 為異常值）的患者血清樣本及試劑自帶高低值質(zhì)控品，計算精密度是否符合試劑說明書的精密度要求，邁克試劑批內(nèi)精密度要求≤8%，實驗室不精密度≤10%；生之源試劑批內(nèi)精密度要求≤5%，實驗室不精密度≤10%。

1.4.3 線性 采用高低值血清樣本評估線性，按照6H∶0L、5H∶1L、4H∶2L、3H∶3L、2H∶4L、1H∶5L、0H∶6L方式配置7 個濃度梯度。邁克試劑要求濃度在25～5 000ng/ml，相關(guān)系數(shù)r≥0.99，其中25～200ng/ml時偏差應(yīng)在±20ng/ml 內(nèi)；200～5 000ng/ml 時偏差在±10%范圍內(nèi)；生之源試劑要求濃度為25～3 000 ng/ml，相關(guān)系數(shù)r≥0.99，其中濃度為25～400ng/ml 時偏差應(yīng)在±40ng/ml，400～3000ng/ml 時偏差在±10%范圍內(nèi)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析使用SPSS 20.0 軟件對數(shù)據(jù)進行分析，兩種試劑的正確度結(jié)果進行配對t檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種試劑正確度驗證通過衛(wèi)健委質(zhì)控品檢測可知，生之源試劑的檢測結(jié)果與靶值的相對偏倚除最大值外均比邁克試劑大；邁克試劑除最大值外相對偏倚均在15%以內(nèi)，而生之源試劑除最大值外均高于20%，但兩種試劑均未超出衛(wèi)健委統(tǒng)計結(jié)果的允許范圍。見表1。

表1 衛(wèi)健委質(zhì)控檢測兩種試劑結(jié)果

2.2 兩種試劑對患者樣本的檢測結(jié)果兩種試劑的20 份單人份血清樣本檢測結(jié)果相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.012）。兩種試劑的檢測結(jié)果有一定的偏差，但兩種試劑的相對偏倚均小于衛(wèi)健委統(tǒng)計的最大偏倚（30%）。見表2。

表2 兩種試劑對20 份患者樣本的檢測結(jié)果（ng/ml）

2.3 兩種試劑精密度驗證在水平1、水平2、低值質(zhì)控、高值質(zhì)控上，邁克試劑批內(nèi)精密度優(yōu)于生之源試劑，而生之源試劑的實驗室內(nèi)不精密度優(yōu)于邁克試劑；兩種試劑高值精密度均比低值精密度高。但兩種試劑測量的精密度均在各自要求的范圍內(nèi)。見表3。

表3 兩種試劑精密度對比（%）

2.4 兩種試劑線性驗證邁克試劑線性驗證結(jié)果示實測值與理論值無離群值，符合試劑說明書要求：濃度25～200ng/ml 時，偏差±20ng/ml；200～5 000ng/ml時偏差均在±10%內(nèi)，見表4；相關(guān)方程y=1.02064x-68.66716，線性相關(guān)性良好（R2=0.99896），見圖1。生之源試劑驗證結(jié)果符合試劑說明書要求：濃度25～400ng/ml 時偏差±40ng/ml；400～3 000ng/ml 時，偏差在±10%內(nèi)，見表5；相關(guān)方程y=0.99833x-14.0747，線性相關(guān)性良好（R2=0.99926)，見圖2。

圖2 生之源試劑線性驗證

表5 生之源試劑線性驗證結(jié)果

圖1 邁克試劑線性驗證

表4 邁克試劑線性驗證結(jié)果

3 討論

AKI 是各種嚴(yán)重疾病中最常見的并發(fā)癥之一，因此早期診斷對AKI 的治療至關(guān)重要。經(jīng)典的AKI生化指標(biāo)在腎功能發(fā)生不可逆損傷前不會發(fā)生明顯改變，這增加了AKI 早期識別的難度，導(dǎo)致患者死亡率增加。AKI 患者血液和（或）尿液中NGAL 的表達明顯升高，尤其是尿液中NGAL 水平與腎損傷嚴(yán)重程度密切相關(guān)，故NGAL 成為目前最有潛力的AKI 早期生化標(biāo)志物。此外臨床檢測的準(zhǔn)確性和可靠性是疾病診斷的基礎(chǔ)。

如何保障臨床實驗室檢測系統(tǒng)測量結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性是檢驗醫(yī)學(xué)研究的重點，也是臨床實驗室質(zhì)量管理的核心。量值溯源是目前實現(xiàn)各檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的一種常規(guī)方法，量值溯源是指溯源至該檢測項目的參考方法和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[4]?；谀壳皣鴥?nèi)外尚無NGAL 參考方法和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，故通過衛(wèi)健委質(zhì)控品和20 份單人份血清樣本評估兩種試劑檢測結(jié)果的正確度和一致性。兩種試劑通過檢測衛(wèi)健委質(zhì)控品可知邁克試劑檢測結(jié)果的相對偏倚較生之源試劑小，但都在衛(wèi)健委統(tǒng)計的允許范圍內(nèi)。兩種試劑檢測20 份同一單人份血清樣本的結(jié)果有顯著性差異，說明兩種試劑檢測結(jié)果還是有一定的偏差。因為NGAL 尚無參考方法和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，各試劑廠商就無法實現(xiàn)量值溯源[5]，導(dǎo)致各試劑檢測結(jié)果無法標(biāo)準(zhǔn)化，所以檢測結(jié)果會有偏差，衛(wèi)健委的統(tǒng)計結(jié)果范圍也較大。所以即使兩種試劑檢測結(jié)果有偏差但也均在衛(wèi)健委統(tǒng)計范圍內(nèi)，另外邁克試劑的正確度略優(yōu)于生之源試劑。對于精密度，邁克試劑批內(nèi)精密度優(yōu)于生之源試劑，而生之源試劑的實驗室內(nèi)不精密度優(yōu)于邁克試劑，但都在其要求的范圍內(nèi)，均滿足臨床要求。兩者的線性相關(guān)性良好，均符合其說明書規(guī)范。

綜上所述，各試劑的性能良好，只是因為缺乏可溯源的途徑導(dǎo)致正確度有一定差異，故我們需要盡快研究NGAL 的參考方法或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來驗證其檢驗結(jié)果的一致性和可比性，為臨床提供更準(zhǔn)確的結(jié)果，以便于疾病的診斷和治療。