陳良勝 殷雙興

河南省新縣人民醫(yī)院藥劑科，河南 新縣 465550

柴胡歷史悠久，為傘形科植物柴胡(BupleurumchinenseDC.)或狹葉柴胡(BupleurumscorzonerifoliumWilld.)的根。柴胡皂苷類為其主要活性成分，其中，以柴胡皂苷a、d的藥理作用最強。因此，本文主要對道地柴胡藥材有效成分指紋圖譜的研究進展進行綜述，并進行鑒別、檢查、含量測定、重金屬檢查和農(nóng)藥殘留檢測，旨在為全面控制柴胡藥材的質(zhì)量提供重要依據(jù)。

1 柴胡臨床使用的現(xiàn)狀

柴胡屬藥用植物在我國分布廣泛，品種較多，在不同區(qū)域都被當(dāng)?shù)卦谂R床上當(dāng)作柴胡使用，藥用的有效性和安全性較差。本文對長江上游和大別山柴胡屬藥用植物進行實地考查和大量歷史文獻匯總和分析。認(rèn)定原植物為同屬植物4種民間藥用柴胡，在本地都有使用，都曾經(jīng)有被當(dāng)作藥用的歷史。我國野生柴胡屬中藥資源藏量巨大。由于我國藥典并未收錄有關(guān)區(qū)域性柴胡的內(nèi)容，缺乏相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，造成長江上游和大別山區(qū)域性柴胡質(zhì)量難以得到有效控制。而民間又有大量的實際應(yīng)用，給當(dāng)?shù)乩习傩沼盟帋韲?yán)重的安全隱患。因此，采用科學(xué)的方法建立區(qū)域性柴胡的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分析長江上游和大別山區(qū)四種柴胡屬植物的化學(xué)成分，測定其有效成分的含量，為當(dāng)?shù)夭窈耐茝V應(yīng)用提供理論依據(jù)，發(fā)展庫區(qū)中藥材具有現(xiàn)實的經(jīng)濟意義，也是現(xiàn)實的客觀需要。

正品柴胡為常用中草藥，野生資源正在枯竭，在推廣人工種植的同時，適時研發(fā)新的柴胡屬植物替用品，擴大野生資源的來源，也是目前比較現(xiàn)實的選擇。隨著柴胡資源日漸緊張，市場價格不斷攀升，各地都在積極探索，開發(fā)當(dāng)?shù)夭窈鷮俚囊吧Y源，試圖緩解供量的緊張。長江上游和大別山區(qū)是柴胡產(chǎn)量較大，是全國的主產(chǎn)區(qū)之一，品種混用極其混亂嚴(yán)重。質(zhì)量無法控制，用藥隱患大。

2 柴胡的分類

柴胡(Bupleuri)是傘形科植物中的大屬之一，全世界有200種左右。我國有柴胡屬植物40種、17變種、7變型，主要分布于西南、西北和東北地區(qū)[1]。本屬入藥種類約20種，主要的有柴胡(Bupleuri.chinenseDC.)、狹葉柴胡(Bupleuri.scorzonerifoliumWilld.)、銀州柴胡(Bupleuri.yinchowenseShanet Y. Li)和黑柴胡(Bupleuri.smithiiH.Wolff)等?！吨腥A人民國和國藥典》2020版規(guī)定柴胡(Bupleuri.chinenseDC.)和狹葉柴胡(Bupleuri.scorzonerifoliumWilld.)的干燥根為藥用柴胡，按性狀不同，分別習(xí)稱“北柴胡”和“南柴胡”。

3 柴胡的化學(xué)成分與藥理作用

柴胡的化學(xué)成分復(fù)雜,主要含皂苷和揮發(fā)油,同時也含黃酮、脂肪酸、多元醇、植物甾醇、木脂素、香豆素、多糖、微量元素等類型成分[2-3]。柴胡性味辛、苦，微寒，歸肝、膽、肺經(jīng)，具有疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽氣的功效，用于感冒發(fā)熱，寒熱往來，胸脅脹痛，月經(jīng)不調(diào)，子宮脫垂，脫肛[4]。藥理實驗[5-6]表明，柴胡具有解熱鎮(zhèn)痛、保肝、抗病毒、抗抑郁、抗癌、抗?jié)兊榷喾N活性。

4 柴胡的指紋圖譜研究和安全性檢查領(lǐng)域綜述

近年來，很多學(xué)者對柴胡藥用成分和臨床應(yīng)用研究較多，在本草考證、生境分布、原藥用植物鑒定以及質(zhì)量評價等方面作出了大量的貢獻。在柴胡分布較多的甘肅、河北、河南、湖北等地區(qū)，對野生和家種的柴胡的指紋圖譜研究較多，主要采用HPLC、GC-MS以及薄層色譜等方法來研究柴胡中柴胡皂苷和揮發(fā)油等有效成分?，F(xiàn)將近十年來各地在柴胡品質(zhì)，主要在指紋圖譜研究和安全性檢查領(lǐng)域取得的重要進展綜述如下。

將北柴胡柴胡皂苷建立高效薄層熒光色譜指紋圖譜(如圖1所示)，與南柴胡、錐葉柴胡、多枝柴胡、三島柴胡、西藏柴胡等不同產(chǎn)地柴胡的指紋圖譜進行比較。以60目硅膠為原料制備高效薄層板，以CH2Cl2∶EtOAC∶CH3OH∶H2O(30∶40∶15∶3)為流動相，2%對二甲氨基苯甲醛:10%硫酸乙醇液顯色后獲得薄層熒光色譜指紋圖譜，經(jīng)軟件(ChromafingerTM)生成共有模式，發(fā)現(xiàn)北柴胡指紋圖譜由19個特征熒光條斑組成[7]。

圖1 柴胡屬藥材皂苷高效薄層色譜指紋圖譜的研究圖[7]

有關(guān)專家采用山西產(chǎn)地的柴胡和小葉黑柴胡中皂苷類成分HPLC指紋圖譜分析方法，采用RP-HPLC測定10個不同來源柴胡樣品。建立了HPLC指紋圖譜共有模式，并對其進行了相似度比較，為控制柴胡藥材的質(zhì)量提供了理論依據(jù)[8-11]。

肖蓉等[12]分別建立了野生北柴胡、栽培北柴胡、狹葉柴胡、錐葉柴胡及線葉柴胡的HPLC指紋圖譜(如圖2所示)，采用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對北柴胡揮發(fā)油的有效成分進行了測定和分析。 發(fā)現(xiàn)培育出來的北柴胡與野生北柴胡相比，其提取物、皂苷類成分和 HPLC 指紋圖譜均無顯著差異，但揮發(fā)油的含量和成分有一定差異。 因此培育柴胡具有一定的應(yīng)用前景和經(jīng)濟價值。根據(jù)實驗結(jié)果，北柴胡提取物的含量為15.6%，柴胡皂苷 c、 a、 d 含量分別為0.50%、1.90%和1.73%。南柴胡浸出物含量為25.9%，皂苷c、d含量分別為0.15%、0.29%。市場上的柴胡飲片品種主要為北柴胡，浸出物含量為13.6%，皂苷c、a、d的含量分別為0.41%、1.17%、1.30%。

圖2 河北道地藥材北柴胡HPLC-UV指紋圖譜研究圖[12]

湯芳玲等[13]采用Waters BEHTM Cl8色譜柱，以CH3CN∶H2O進行梯度洗脫，0.61 mL· min-1的流速，200 nm作為檢測波長，30℃柱溫。通過檢測20批小葉黑柴胡藥材，建立其UPLC指紋圖譜(如圖3所示)，共發(fā)現(xiàn)了28個共有指紋峰，根據(jù)聚類分析結(jié)果，可將藥材質(zhì)量分為2大類，8個相似度較高的藥材分為一類。

圖3 UPLC法測定小葉黑柴胡的根中柴胡皂苷a、d含量圖[13]

李艷榮等[14]建立同時測定承德產(chǎn)及其他主產(chǎn)區(qū)柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量及其HPLC指紋圖譜(如圖4所示)。方法：色譜柱為ZorbaxSB-C18，乙腈溶液系統(tǒng)梯度洗脫，檢測波長 210 nm，流速1.0 mL· min-1，分析時間90 min。得到柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的線性范圍分別為33.2～531 μg· mL-1(r=0.9999)、31.8～508 μg·mL-1(r=0.9999)；平均回收率分別為98.6%(RSD=0.9%)、98.9%(RSD=1.2%)。15批藥材的HPLC指紋圖譜共確立6個共有峰。

圖4 柴胡的HPLC指紋圖譜研究圖[14]

王建科等[15]建立了竹葉柴胡藥材的HPLC指紋圖譜。方法：色譜柱為Agilent Cl8， CH3CN：0.2% H3PO4水溶液為流動相，流速為1.0 mL·min-l，柱溫為30 ℃，檢測波長為203 nm。得到了竹葉柴胡藥材的指紋圖譜，確定了共有峰22個，各峰的相似度均>0.800。

王一飛等[16]建立了柴胡藥材的高效液相指紋圖譜方法(如圖5所示)。方法：采用Zorbax SB-C18柱，柱溫25 ℃，以流動相CH3CN：0.2% H3PO4水溶液洗脫，檢測波長220 nm，流速為1.0 mL·min-l。采用國家藥典委員會出版的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價》軟件，對9批不同批次的柴胡藥材指紋圖譜進行相似度計算。得到各批柴胡藥材中有11個共有峰，各峰分離度良好，各批次柴胡藥材間共有峰的相對保留時間RSD<1.0%，藥材間相似度均>90%。

圖5 北柴胡藥材的HPLC 指紋圖譜研究圖[16]

孫國祥等[17]用RP-HPLC建立了柴胡HPLC數(shù)字化指紋圖譜(如圖6所示)。方法采用CenturySIL C18色譜柱，流動相為水和乙腈(均含l%醋酸)梯度洗脫；流速1.0 mL·min-1，265 nm檢測，柱溫(30～0.15)℃。確定了27個共有峰。通過對指紋峰多種參數(shù)評價，建立了柴胡HPLC數(shù)字化指紋圖譜。各產(chǎn)地藥材的化學(xué)成分分布比例和含量2個方面與對照指紋圖譜間都具有良好相似性。

圖6 柴胡高效液相色譜數(shù)字化指紋圖譜研究圖 [17]

王啟帥等[18]采用HPLC-ELSD析方法，對柴胡樣品進行HPLC指紋圖譜研究。分析采用相似性分析、數(shù)據(jù)聚類分析和主成分分析分析。 結(jié)果建立了柴胡藥材的HPLC指紋圖譜分析方法，共有12個共有峰。

綜上所述，隨著指紋圖譜技術(shù)的飛速發(fā)展，已廣泛應(yīng)用于對中藥質(zhì)量的研究，逐步取代傳統(tǒng)的以單一化學(xué)成分的含量來控制藥材質(zhì)量的模糊做法，各地對正品柴胡和道地柴胡品種的質(zhì)量研究很多，多采用最新的指紋圖譜技術(shù)，研究發(fā)現(xiàn)各地柴胡品種的指紋圖譜有所不同，其指紋圖譜顯示有效成分含量皂苷和揮發(fā)油成分多有不同，結(jié)合長江上游和大別山區(qū)域柴胡的考察，借鑒和運用其他柴胡指紋研究經(jīng)驗，建立地域性柴胡指紋圖譜，指導(dǎo)柴胡資源開發(fā)意義重大。