鐘镥 羅世英 張靜 張藝

摘 要 目的 提升藏藥秦艽花的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為全面評(píng)價(jià)其質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。方法 采用顯微及薄層色譜（TLC）法對(duì)16批不同產(chǎn)地、不同基原的秦艽花藥材進(jìn)行定性分析;參照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則中相應(yīng)方法，分別進(jìn)行水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物含量的測(cè)定;建立高效液相色譜（HPLC）法，同時(shí)測(cè)定秦艽花中5種成分（馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷、異葒草苷）的含量。結(jié)果 秦艽花藥材粉末呈淺棕黃色;粉末顯微特征清晰，可見(jiàn)花粉粒、導(dǎo)管、非腺毛、花冠表皮細(xì)胞和花萼表皮細(xì)胞等。TLC鑒別結(jié)果顯示，在供試品色譜圖中，與對(duì)照品（異葒草苷）色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。16批藥材的水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物的含量分別為5.40%～8.87%、3.76%～6.40%、0.27%～0.58%、26.81%～42.51%。含量測(cè)定方法學(xué)考察結(jié)果均符合藥典要求;16批秦艽花樣品中馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷、異葒草苷的含量分別為3.13～9.36、1.26～22.39、13.80～74.60、1.24～12.22、2.58～14.96 mg/g。結(jié)論 本研究在秦艽花已有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了顯微鑒別、TLC鑒別、含量測(cè)定以及水分、總灰分、酸不溶性灰分和醇溶性浸出物等檢查項(xiàng)，并初步擬定秦艽花中水分不得過(guò)9.0%、總灰分不得過(guò)6.5%、酸不溶性灰分不得過(guò)0.6%、醇溶性浸出物不得少于26.0%、龍膽苦苷的含量不得低于13.8 mg/g。

關(guān)鍵詞 秦艽花;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);顯微鑒別;薄層色譜法;高效液相色譜法;含量測(cè)定

中圖分類號(hào) R282;R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2022）01-0026-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.01.05

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To improve the quality standard of Tibetan medicine of Qinjiaohua， and to provide scientific basis for comprehensive quality evaluation. METHODS The qualitative analysis of 16 batches of Qinjiaohua with different producing areas and different origins was carried out by microscopic and TLC identification. According to the method stated in 2020 edition of Chinese Pharmacopoeia， water content， total ash content， acid-insoluble ash content and alcohol-soluble extract content were determined. HPLC method was used to determine the contents of 5 components （loganic acid， swertiamarin， gentiopicrin， swertionolin， isoorientin） in Qinjiaohua. RESULTS The medicinal powder of Qinjiaohua was light brown-yellow， and the microscopic features of the powder were clear， and pollen grains， ducts， non-glandular hairs， corolla epidermal cells and calyx epidermal cells were all found. The results of TLC indentification showed that there were fluorescent spots of the same color in the chromatogram of the tested product and the corresponding position of substance control （isoorientin）. The content ranges of water content， total ash content， acid-insoluble ash content and alcohol-soluble extract were 5.40%-8.87%， 3.76%-6.40%， 0.27%-0.58%， 26.81%-42.51%， respectively. The results of content determination methodology met the requirements of pharmacopoeia; the content ranges of loganic acid， swertiamarin， gentiopicrin， swertionolin and isoorientin in 16 batches of Qinjiaohua were 3.13-9.36， 1.26-22.39， 13.80-74.60， 1.24-12.22， 2.58-14.96 mg/g， respectively. CONCLUSIONS On the basis of the original quality standard of Qinjiaohua， microscopic identification， TLC identification， content determination and examination items of water， total ash， acid-insoluble ash and alcohol-soluble extract are added. It is preliminarily proposed that water content， total ash content and acid-insoluble ash content should not exceed 9.0%， 6.5% and 0.6%， while the contents of ethanol-soluble extract and gentiopicrin should not be less than 26.0% and 13.8 mg/g， respectively.

KEYWORDS? ?Qinjiaohua; quality standard; microscopic identification; TLC; HPLC; content determination

秦艽花為我國(guó)藏族地區(qū)常用的民族藥，藏語(yǔ)為“”，音譯為“吉解”。秦艽花來(lái)源于龍膽科Gentianaceae龍膽屬Gentiana數(shù)種植物的干燥花枝，于夏、秋二季花將開(kāi)放時(shí)采收，除去雜質(zhì)，陰干后入藥，主要分布于西藏、青海、寧夏、四川甘孜等地[1]。在藏族臨床應(yīng)用上，秦艽花常用來(lái)治療四肢腫脹、腑熱膽熱等癥[2]。研究發(fā)現(xiàn)，秦艽花主要含有環(huán)烯醚萜苷和黃酮類、三萜類成分，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗氧化、潤(rùn)腸通便和抑制乙酰膽堿酯酶活性的作用[3]。本課題組前期對(duì)各大藏醫(yī)院、藥材市場(chǎng)及藏藥廠等進(jìn)行實(shí)地調(diào)研發(fā)現(xiàn)，秦艽花的主流品種主要為麻花秦艽G. straminea Maxim.、西藏秦艽G. tibetica King ex Hook. f.、粗莖秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.、管花秦艽G. siphonantha Maxim. ex Kusnez.、長(zhǎng)梗秦艽G. waltonii Burk.和黃管秦艽G. officinalis H. Smith.的干燥花枝。

秦艽花已被《國(guó)家藏藥標(biāo)準(zhǔn)全書(shū)》《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（藏藥分冊(cè)）》《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（蒙藥分冊(cè)）》《藏藥標(biāo)準(zhǔn)》等收載[1，4-6]，但這些標(biāo)準(zhǔn)僅收錄了該藥材的外觀性狀、性味和功能主治等，缺乏其他鑒別項(xiàng)，也沒(méi)有基于藥效的化學(xué)成分含量測(cè)定。基于此，本研究根據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則中關(guān)于中藥材質(zhì)量控制的要求[7]，使用顯微鏡及薄層色譜（thin-layer chromatography，TLC）法對(duì)其進(jìn)行定性鑒別，測(cè)定其水分、總灰分、酸不溶性灰分和醇溶性浸出物含量，并采用高效液相色譜（high-performance liquid chromatography，HPLC）法測(cè)定秦艽花藥材中馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷和異葒草苷的含量，以期對(duì)該藥材的質(zhì)量進(jìn)行全面控制。

1 材料

1.1 主要儀器

1260型HPLC儀（包括四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器、Chemistation 04.03色譜工作站）購(gòu)自美國(guó)Agilent公司;BH200型顯微鏡購(gòu)自舜宇光學(xué)科技（集團(tuán)）有限公司;聚酰胺薄膜（規(guī)格10 cm×20 cm）購(gòu)自臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠;DHG-9145A型電熱鼓風(fēng)干燥箱購(gòu)自上海一恒科學(xué)儀器有限公司;ZF-20D型暗箱式紫外分析儀購(gòu)自上海寶山顧村電光儀器廠;FA1004型萬(wàn)分之一電子分析天平購(gòu)自上海良平儀器儀表有限公司;BSA124S型十萬(wàn)分之一電子分析天平購(gòu)自賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司;SB-8200DTS型雙頻超聲儀購(gòu)自寧波新藝超聲設(shè)備有限公司;UPH-I型超純水機(jī)購(gòu)自四川優(yōu)普超純科技有限公司。

1.2 主要藥品與試劑

馬錢苷酸對(duì)照品（批號(hào)PS012095，純度≥98.5%）、獐牙菜苦苷對(duì)照品（批號(hào)PS012298，純度≥98.5%）、龍膽苦苷對(duì)照品（批號(hào)PS010423，純度≥99%）、獐牙菜苷對(duì)照品（批號(hào)PS010483，純度≥99%）、異葒草苷對(duì)照品（批號(hào)PS011444，純度≥98.5%）均購(gòu)自成都普思生物科技股份有限公司;甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

16批秦艽花藥材（編號(hào)S1～S16）由本課題組自行采集或購(gòu)買所得，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)民族醫(yī)藥學(xué)院張靜教授鑒定，S1～S4號(hào)樣品為粗莖秦艽的干燥花枝、S5～S8號(hào)樣品為麻花秦艽的干燥花枝、S9～S12號(hào)樣品為西藏秦艽的干燥花枝、S13號(hào)樣品為長(zhǎng)梗秦艽的干燥花枝、S14號(hào)樣品為黃管秦艽的干燥花枝、S15～S16號(hào)樣品為管花秦艽的干燥花枝。16批秦艽花樣品的來(lái)源信息見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別

取秦艽花藥材粉末（編號(hào)S1）在顯微鏡下觀察。結(jié)果，本品粉末呈淺棕黃色，花粉粒類圓球形，表面雕紋不明顯，直徑為36 μm，有3個(gè)萌發(fā)孔;纖維細(xì)長(zhǎng)，多成束，直徑為3～31 μm;可見(jiàn)螺紋、梯紋及網(wǎng)紋導(dǎo)管，直徑約60 μm;非腺毛為單細(xì)胞，甚長(zhǎng)，多破碎;花冠表皮細(xì)胞表面呈類圓形或類多角形，外壁呈乳頭狀突起，表面具條狀紋理;花萼表皮細(xì)胞表面呈類多角形，垂周壁略呈連珠狀，表面具波狀角質(zhì)紋理。秦艽花藥材粉末的顯微鑒別圖見(jiàn)圖1。

2.2 TLC鑒別

取本品粉末0.5 g，加甲醇10 mL，超聲（功率400 W，頻率40 kHz）處理30 min，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。另取異葒草苷對(duì)照品，加甲醇制成每l mL含0.1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則“0502薄層色譜法”進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[7]。吸取供試品溶液1.5 ?L、對(duì)照品溶液1 ?L，分別點(diǎn)樣于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇-水-冰乙酸（6 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V）溶液為展開(kāi)劑展開(kāi);取出，晾干，噴3%AlCl3乙醇溶液，60 ℃下加熱2 min，然后在紫外燈（波長(zhǎng)365 nm）下檢視。結(jié)果，在供試品色譜圖中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)（圖2）。

2.3 檢查

2.3.1 水分 取各批次秦艽花藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩）各約2 g，按2020版《中國(guó)藥典》（四部）“通則0832”水分測(cè)定法項(xiàng)下第二法進(jìn)行檢測(cè)[7]。每個(gè)樣本平行測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果顯示，16批秦艽花藥材的水分含量在5.40%～8.87%之間，平均值為7.54%（RSD=12.36%，n=3）?？紤]到藥材來(lái)源的差異，本研究以略高于最高測(cè)定值設(shè)限[8]，初步擬定秦艽花藥材的水分不得過(guò)9.0%。秦艽花藥材中水分測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3.2 總灰分和酸不溶性灰分 取各批次秦艽花藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩）各約4 g，按2020版《中國(guó)藥典》（四部）“通則2302”灰分測(cè)定法項(xiàng)下總灰分和酸不溶性灰分測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè)[7]。每個(gè)樣本平行測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果顯示，16批秦艽花藥材的總灰分含量在3.76%～6.40%之間，平均值為5.08%（RSD=12.60%，n=3）;酸不溶性灰分含量在0.27%～0.58%之間，平均值為0.45%（RSD=17.41%，n=3）。考慮到藥材來(lái)源的差異，本研究以略高于最高測(cè)定值設(shè)限[8]，初步擬定秦艽花藥材中總灰分不得過(guò)6.5%、酸不溶性灰分不得過(guò)0.6%。秦艽花藥材中總灰分和酸不溶性灰分測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3.3 醇溶性浸出物測(cè)定 取各批次秦艽花藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩）各約2 g，按2020版《中國(guó)藥典》（四部）“通則2201”浸出物測(cè)定法項(xiàng)下醇溶性浸出物測(cè)定法（熱浸法）進(jìn)行檢測(cè)，溶劑為50%乙醇[7]。每個(gè)樣本平行測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果顯示，16批秦艽花藥材中醇溶性浸出物含量在26.81%～42.51%之間，平均值為35.38%（RSD=11.18%，n=3）。考慮到藥材來(lái)源的差異，本研究以略低于最低測(cè)定值設(shè)限[8]，初步擬定秦艽花藥材中醇溶性浸出物不得少于26.0%。秦艽花藥材中醇溶性浸出物測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4 含量測(cè)定

2.4.1 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷和異葒草苷對(duì)照品適量，加甲醇制成上述5個(gè)成分質(zhì)量濃度分別為0.367、0.104、2.122、0.636、0.262 mg/mL的混合對(duì)照品貯備液。取上述貯備液5 mL，用甲醇稀釋4倍，即得混合對(duì)照品溶液。將所得溶液置于4 ℃冰箱中保存，備用。

2.4.2 供試品溶液的制備 取秦艽花藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩）0.5 g，精密稱定，置于50 mL錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率400 W，頻率40 kHz）處理30 min;放冷至室溫，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，以0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。將所得溶液置于4 ℃冰箱中保存，備用。

2.4.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 采用Kromasil 100-5-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;以甲醇（A）-0.2%磷酸水溶液（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（0～30 min，25%A→40%A）;檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm;流速為1 mL/min;柱溫為30 ℃;進(jìn)樣量為10 μL。分別取供試品溶液（編號(hào)S1）、混合對(duì)照品溶液和空白溶液（甲醇），按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，理論板數(shù)按馬錢苷酸計(jì)大于3 000，各待測(cè)成分峰與其相鄰峰間的分離度均大于1.5，均達(dá)到基線分離，且空白溶液（甲醇）對(duì)5種成分的測(cè)定無(wú)干擾，色譜圖見(jiàn)圖3。

2.4.4 線性關(guān)系考察 將“2.4.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液用甲醇分別稀釋2、4、8、16、32、64倍，取混合對(duì)照品貯備液及各稀釋液分別按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以各待測(cè)成分的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得5種成分的線性回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)（r）。結(jié)果顯示，各待測(cè)成分在其質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好（r≥0.999 5），詳見(jiàn)表3。

2.4.5 檢測(cè)限與定量限考察 取“2.4.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液適量，用甲醇逐步稀釋，然后按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，分別以信噪比3 ∶ 1、10 ∶ 1測(cè)定檢測(cè)限、定量限。結(jié)果顯示，5種成分的檢測(cè)限和定量限均滿足檢測(cè)要求，詳見(jiàn)表3。

2.4.6 精密度試驗(yàn) 取“2.4.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件于同一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷和異葒草苷峰面積的RSD分別為0.65%、0.89%、0.80%、0.71%、0.51%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次秦艽花藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩，編號(hào)S1）共6份，每份0.5 g，精密稱定，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄5種成分的峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中各成分的含量。結(jié)果顯示，馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷和異葒草苷含量的RSD分別為0.89%、0.97%、0.71%、0.83%、0.98%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.4.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取秦艽花藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩，編號(hào)S1）適量，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10、12、24 h時(shí)，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷和異葒草苷峰面積的RSD分別為0.76%、0.79%、0.55%、0.69%、1.06%（n=8），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一批秦艽花藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩，編號(hào)S1）共6份，每份0.5 g，精密稱定，分別精密加入與樣品中各成分含量等量的混合對(duì)照品溶液，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷和異葒草苷的平均加樣回收率分別為101.20%、101.87%、98.11%、98.29%、96.76%，RSD分別為1.25%、2.19%、2.22%、1.60%、1.86%（n=6），表明本方法的準(zhǔn)確度良好，詳見(jiàn)表4。

2.4.10 樣品含量測(cè)定 精密稱取16批秦艽花藥材粉末，每份約0.5 g，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各成分的含量。每批樣品平行測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果顯示，16批秦艽花樣品中馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷和異葒草苷的含量分別為3.13～9.36、1.26～22.39、13.80～74.60、1.24～12.22、2.58～ 14.96 mg/g?？紤]到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的適用性和藥材來(lái)源的差異性，本研究選擇含量最高的龍膽苦苷作為該藥材含量限定的指標(biāo)成分，以略低于含量最低值設(shè)限[8]，初步擬定本品中龍膽苦苷的含量不得低于13.8 mg/g，結(jié)果見(jiàn)表5。

3 討論

3.1 定性和定量分析指標(biāo)的選擇

據(jù)現(xiàn)有研究報(bào)道，秦艽花藥材中含環(huán)烯醚萜苷和黃酮類、三萜類等多種成分，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗氧化、潤(rùn)腸通便和抑制乙酰膽堿酯酶活性的作用[3]。異葒草苷為黃酮苷類成分，具有抗氧化、保肝、抗炎等作用[9-11];馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷均為環(huán)烯醚萜苷類成分，均具有抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝等作用[10-18]。這些成分的生物活性與秦艽花的抗炎、鎮(zhèn)痛藥理作用相符，提示這5種成分均是該藥材的有效成分。因此，本課題組最終選擇異葒草苷作為秦艽花藥材的定性分析指標(biāo)成分，并選擇馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷和異葒草苷作為秦艽花藥材的定量分析指標(biāo)成分。

3.2 TLC鑒別條件的選擇

本課題組前期分別考察了不同展開(kāi)劑[甲醇-水-冰乙酸（6 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V）、乙醇-水-冰乙酸（4 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V）、丙酮-水-冰乙酸（3 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V）]、不同點(diǎn)樣量（0.5、1、1.5、2 μL）、不同顯色方式（3%AlCl3乙醇溶液顯色和10%硫酸乙醇顯色）、不同溫度（4、20、35 ℃）及不同相對(duì)濕度（32%、58%和72%）對(duì)鑒別結(jié)果的影響。結(jié)果表明，異葒草苷以甲醇-水-冰乙酸（6 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V）為展開(kāi)劑展開(kāi)、3%AlCl3乙醇溶液顯色時(shí)，其分離度較好，比移值適宜，斑點(diǎn)清晰;且該方法在不同溫度和相對(duì)濕度下均能對(duì)樣品溶液有很好的分離效果，說(shuō)明該方法的耐用性良好。

3.3 浸出物測(cè)定條件的考察

在前期研究中，本課題組考察了不同浸出方法（冷浸法和熱浸法）、不同浸出溶劑（水，30%、50%、70%、100%的乙醇，30%、50%、70%、100%的甲醇）對(duì)浸出效果的影響，且將相應(yīng)浸出條件下的溶液處理（0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液）后按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算出各有效成分的含量，然后以浸膏得率和有效成分的浸出含量為共同指標(biāo)篩選浸出條件。結(jié)果，當(dāng)浸出方式為熱浸法且以50%乙醇作為溶劑時(shí)，浸出效果最好。因此，在本研究中選擇50%乙醇作為浸出物的提取溶劑。

3.4 供試品溶液制備條件的選擇

在前期研究中，本課題組以待測(cè)物有效成分的相對(duì)含量為指標(biāo)，分別對(duì)供試品溶液制備的提取溶劑（70%、50%、30%、100%的乙醇，70%、50%、30%、100%的甲醇）、提取方式（回流提取、超聲提取）、提取溶劑用量（25、50、100 mL）、提取時(shí)間（15、30、60 min）進(jìn)行了考察，最終選擇以甲醇溶液25 mL、超聲提取30 min為秦艽花供試品溶液的制備方法（此條件下各待測(cè)成分的相對(duì)含量較高）。

3.5 HPLC檢測(cè)條件的選擇

本課題組前期對(duì)不同流動(dòng)相（甲醇-0.1%磷酸水溶液、甲醇-0.2%磷酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液、甲醇-水）、不同檢測(cè)波長(zhǎng)（230、240、270、330、370 nm）、不同色譜柱（Chromsil C18、Kromasil 100-5-C18、Zorbax Eclipse XDB-C18）、不同柱溫（25、30、35 ℃）、不同流速（0.9、1.0、1.1 mL/min）等色譜條件進(jìn)行了考察，最終確定了“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件。

3.6 不同樣品的含量測(cè)定結(jié)果分析

本研究通過(guò)含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，云南、四川、青海、西藏等不同產(chǎn)地的秦艽花樣品中各成分的平均含量差異較大：馬錢苷酸的平均含量分別為4.61、3.55、5.79、6.34 mg/g（RSD=24.55%，n=4），獐牙菜苦苷的平均含量分別為1.26、2.47、3.89、7.79 mg/g（RSD=73.63%，n=4），龍膽苦苷的平均含量分別為25.96、16.81、28.02、47.73 mg/g（RSD=43.92%，n=4），獐牙菜苷的平均含量分別為7.77、2.50、5.99、6.74 mg/g（RSD=39.76%，n=4），異葒草苷的平均含量分別為3.14、4.88、6.47、6.33 mg/g（RSD=29.84%，n=4）。這可能與樣品的不同生長(zhǎng)環(huán)境及采收時(shí)間等因素有關(guān)，也表明不同產(chǎn)地的秦艽花在不同化學(xué)成分方面有各自的產(chǎn)地優(yōu)勢(shì)，可為后續(xù)秦艽花化學(xué)成分的深入研究提供數(shù)據(jù)支撐。本研究通過(guò)含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，秦艽花藥材中龍膽苦苷含量最高，占測(cè)定的5種成分總含量的60%左右。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，龍膽苦苷具有抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝等多種藥理活性[19]，與秦艽花傳統(tǒng)功效一致，且龍膽苦苷也是龍膽屬植物的代表性成分。因此，本研究選擇秦艽花中的功效性成分，同時(shí)也是其中含量較高的成分——龍膽苦苷作為該藥材含量限定的指標(biāo)成分。

綜上所述，本研究按照2020版《中國(guó)藥典》（四部）藥材標(biāo)準(zhǔn)起草的技術(shù)要求，對(duì)秦艽花進(jìn)行了顯微鑒別、TLC鑒別以及水分、總灰分、酸不溶性灰分和醇溶性浸出物等檢查項(xiàng)的考察，對(duì)秦艽花中馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷、獐牙菜苷和異葒草苷進(jìn)行了含量測(cè)定，并初步擬定了各指標(biāo)的限度標(biāo)準(zhǔn)，為秦艽花藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定奠定了基礎(chǔ)。但本研究中所用的樣品批次、數(shù)量均較少，后續(xù)本課題組還將繼續(xù)采集其他不同產(chǎn)地、不同基原的樣品進(jìn)行研究，以建立更加完善的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

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（收稿日期：2021-10-22 修回日期：2021-11-19）

（編輯：林 靜）