王思瑤,潘曉玲,劉 敏,李佳馨,陳慧玲,毛丹丹,戴小軍,梁滿中,陳良碧

(湖南師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 作物不育資源創(chuàng)新與應(yīng)用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,中國(guó)湖南 長(zhǎng)沙 410081)

農(nóng)墾58S是最早被發(fā)現(xiàn)并鑒定的光敏核不育水稻[1]。研究證明,光敏核不育系育性轉(zhuǎn)換的光周期敏感時(shí)期是第二次枝梗原基分化期至花粉母細(xì)胞形成期,對(duì)光周期敏感的部位是葉片,光受體是光敏色素[2～3]。陳良碧等[4～5]研究發(fā)現(xiàn),溫敏核不育系和光敏不育系育性轉(zhuǎn)換的溫度敏感期都是雌雄蕊形成期到花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂期,對(duì)溫度敏感的部位是敏感期的幼穗。

安農(nóng)S-1在日均溫度26℃以上時(shí)表現(xiàn)為雄性不育,低于24℃時(shí)則可育并結(jié)實(shí)[6]。培矮64S是農(nóng)墾58S衍生的不育系中應(yīng)用面積最大、不育臨界溫度最低的不育系,該不育系在23.5℃條件下花粉低度可育,但自交結(jié)實(shí)率低;兩系不育系中,不育臨界溫度最低、雜交制種最安全的不育系是株1S[6]。育種工作者在應(yīng)用研究中發(fā)現(xiàn),培矮64S等農(nóng)墾58S衍生的秈型不育系的花粉育性主要受溫度調(diào)控,誘導(dǎo)花粉不育的臨界溫度的高低成為了不育系能否安全制種的關(guān)鍵因素,而有關(guān)農(nóng)墾58S衍生不育系中育性感溫性的遺傳基礎(chǔ)尚不清楚,其臨界溫度及其變化規(guī)律也未見(jiàn)報(bào)道。本研究以農(nóng)墾58S衍生的不育系培矮64S及其與豐源B制備的近等基因系為材料,對(duì)其育性的感溫特性和感溫基因定位進(jìn)行研究,旨在促進(jìn)對(duì)不育系培矮64S及衍生不育系的育性感溫特性的認(rèn)識(shí),提高兩用核不育系雜交制種的安全性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

培矮64S及其與豐源B制備的40個(gè)近等基因系不育材料和對(duì)照材料株1S均由本實(shí)驗(yàn)室提供。材料的每個(gè)處理群體為3個(gè)盆栽,30個(gè)單株。

實(shí)驗(yàn)所使用引物的合成和克隆序列的測(cè)定均由上海生工生物工程股份有限公司完成。RNA提取試劑Trizol購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司,DNA提取試劑盒購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司,PrimeSTAR?GXL DNA Polymerase購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司,cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司。

1.2 育性鑒定

將育性敏感期(花粉母細(xì)胞至減數(shù)分裂期)在2018年7月15日至8月5日自然高溫(日均溫≥28℃)條件下生長(zhǎng)的不育系平均分成兩組,一組采用自然高溫條件,一組在自然光照條件下的23.5℃冷水池處理6 d。處理結(jié)束后在自然高溫條件下恢復(fù)生長(zhǎng)。開(kāi)花期連續(xù)檢測(cè)花粉育性1個(gè)星期。

取每株不育系3朵穎花中的花藥置于載玻片上的碘液中,夾散花粉,在10×20倍顯微鏡下觀察不同的3個(gè)視野。大小正常并被染成黑褐色的花粉為具有生活力的可染花粉;染色不均勻或形狀不規(guī)則的花粉為不育花粉[7]?？扇净ǚ勐?%)=可染花粉粒數(shù)/總花粉粒數(shù)×100%,取3個(gè)視野的平均值。

1.3 感溫不育基因定位分析

將培矮64S以及近等基因系各單株送于華大基因公司進(jìn)行全基因組測(cè)序,獲得感溫不育基因的初步定位,再利用SSR標(biāo)記和QTL基因定位技術(shù)對(duì)感溫不育基因進(jìn)行精細(xì)定位。

1.4 DNA的提取

取一段水稻新鮮葉片,將裝有材料的EP管放入球磨儀內(nèi)研磨,后按說(shuō)明書(shū)操作。加入700 μL 65℃預(yù)熱的buffer GP1,置于65℃恒溫水浴20 min,加入700 μL氯仿,充分混勻后12 000 r/min離心5 min。轉(zhuǎn)移上層水相,加入700 μL buffer GP2,過(guò)吸附柱。向吸附柱中加入500 μL試劑buffer GW1,12 000 r/min離心1 min,隨后加入500 μL試劑buffer GW2,12 000 r/min離心1 min。12 000 r/min離心2 min后晾干。向吸附柱的中間部位加入50 μL 65℃預(yù)熱的buffer GE或滅菌ddH2O,12 000 r/min離心1 min,收集DNA溶液并于-20℃保存。

1.5 RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄

1.5.1 RNA的提取

取水稻材料裝入研缽中,加入液氮研磨成粉末狀,轉(zhuǎn)入EP管中,向EP管中加入1 mL TRI-zoL試劑充分混勻。離心10 min,取上清加入0.2 mL已預(yù)冷的氯仿,4℃12 000 r/min離心15 min,取上層水相于1.5 mL EP管中,加入等體積已預(yù)冷的異丙醇,顛倒混勻15 s,離心10 min。用75%乙醇1 mL洗滌沉淀,4℃12 000 r/min離心5 min,棄上清。將EP管置于超凈工作臺(tái)上吹至管中的白色沉淀變透明;向EP管中加入20 μL滅菌ddH2O(60℃預(yù)熱),放入60℃恒溫水浴鍋中水浴10 min,檢測(cè)RNA濃度。

1.5.2 RNA的反轉(zhuǎn)錄

利用cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒,按說(shuō)明書(shū)完成反轉(zhuǎn)錄。計(jì)算所加mRNA的量(2 000/RNA濃度)和水的量(7～2 000/RNA濃度);加入對(duì)應(yīng)的mRNA和RNase-free water,再加入1 μL Anchored oligo(dT)18 primer,總體積為8 μL;混勻,放入65℃水浴5 min,取出后冰浴2 min;繼續(xù)加入10 μL 2× TS Reaction Mix,1 μL TransScript RT/RI Enzyme Mix,1 μL gDNA Remover,總體積為 20 μL;輕輕混勻,放入42℃水浴30 min后85℃加熱5 s。反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物放-80℃保存。

1.6 PCR擴(kuò)增及瓊脂糖凝膠電泳

1.6.1 PCR擴(kuò)增

PCR 反應(yīng)體系(總體積 10 μL):3 μL ddH2O,5 μL 2× Taq PCR Master Mix,0.5 μL forward primer(10 μmol/L),0.5 μL reverse primer(10 μmol/L),1 μL DNA模板。PCR擴(kuò)增程序設(shè)置:①95℃預(yù)變性5 min;② 95℃變性30 s;③ 55～60℃退火30 s;④72℃延伸1 min;⑤將②～④設(shè)置35個(gè)循環(huán);⑥72℃終延伸10 min。將PCR反應(yīng)產(chǎn)物存于4℃冰箱備用。

1.6.2 瓊脂糖凝膠電泳

配制1.5%瓊脂糖凝膠(加入Gel Red核酸染料),取3 μL PCR產(chǎn)物注入樣品槽進(jìn)行電泳。電泳緩沖液為 1×TAE,120 V恒壓,10～15 min。電泳結(jié)束后,用凝膠分析系統(tǒng)紫外燈觀察膠圖,檢測(cè)DNA是否成功提取,引物是否能夠擴(kuò)增片段。

1.7 SSR引物合成及聚丙烯酰胺凝膠電泳

1.7.1 SSR引物的選擇與合成

初定位結(jié)果顯示7號(hào)和9號(hào)染色體上均有基因型頻率的差異,在網(wǎng)頁(yè)http://archive.gramene.org/cmap/上尋找7號(hào)染色體19 830.36～20 025 kb區(qū)間的SSR標(biāo)記和9號(hào)染色體2 453.62～22 902.05 kb區(qū)間的SSR標(biāo)記,然后在http://archive.gramene.org/markers/上查找引物并進(jìn)行化學(xué)合成。

1.7.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳

根據(jù)表1配制20 mL 8%的 PAGE凝膠,將凝膠溶液灌入兩塊玻璃板之間,在電泳槽中加入1× TBE(10× TBE 稀釋10倍)緩沖溶液;注入1 μL的PCR反應(yīng)產(chǎn)物,160 V電壓、200 mA電流電泳數(shù)小時(shí)后取下膠塊置于自來(lái)水中漂洗1 min;加入染色液(0.2 g AgNO3溶液于125 mL水中)置于搖床輕搖染色5 min;加入顯色液(6.25 mL的10%NaOH溶液、0.5 mL甲醛溶液加水定容至125 mL)至看到清晰的條帶;棄顯色液,觀察并拍照記錄,用于PCR產(chǎn)物的質(zhì)量分析。

表1 8%聚丙烯酰胺配方Table 1 Preparation of 8% polyacrylamide gel

1.8 候選基因的克隆和測(cè)序

在目標(biāo)區(qū)間內(nèi)對(duì)候選基因進(jìn)行精細(xì)定位。對(duì)7號(hào)染色體上篩選到的感溫不育基因的候選基因LOC_Os07g33380和LOC_Os07g33390進(jìn)行擴(kuò)增和序列測(cè)定。根據(jù)NCBI上獲取的CDS序列,用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)上述兩個(gè)候選基因的擴(kuò)增引物(表2),擴(kuò)增野生型材料和培矮64S近等基因不育株系中候選基因的序列,由武漢生工測(cè)序,然后比對(duì)核苷酸序列和氨基酸差異。

表2 候選基因測(cè)序所用引物Table 2 Primers used for sequencing of candidate genes

2 結(jié)果與分析

2.1 培矮64S及近等基因不育株系育性感溫性比較

在自然高溫條件下,各不育系材料的可染花粉率均為零(表3),說(shuō)明這些材料都是高溫誘導(dǎo)不育類(lèi)型。23.5℃條件下,對(duì)照不育系株1S的花粉可染率為零(圖1);培矮64S的花粉為低度可育(可染花粉率6.6%);培矮64S的40個(gè)近等基因系材料中p5-1S、p28-1S和p12S花粉的可染率為零,p3S、p5-2S的花粉可育性低于培矮64S(可染花粉率分別為1.4%和3.6%),其余材料的花粉可育性均高于培矮64S,其中p27S和p1S的可染花粉率高達(dá)80%以上。結(jié)果表明,利用培矮64S不育基因源可以選育出育性轉(zhuǎn)換的臨界溫度低于23.5℃的秈型不育系,從而提高制種安全性。

圖1 不同溫度條件下不育株系花粉可染率比較Fig.1 Comparison of pollen dyeability of sterile lines at different temperatures

表3 不同溫度條件下不育系花粉育性比較Table 3 Comparison of pollen fertility of male-sterile lines at different temperatures

2.2 近等基因不育系與培矮64S柱頭和花器性狀的比較

p5-1S、p28-1S和培矮64S的柱頭外露率沒(méi)有明顯的差異,但p5-1S的柱頭比培矮64S的大(圖2),表明p5-1S的柱頭更易接受異花授粉,有利于提高雜交制種產(chǎn)量[8～9]。

圖2 p5-1S、p28-1S和培矮64S柱頭和花器性狀的比較A、D和G:柱頭外露;B、E和H:花藥形態(tài);C、F和I:柱頭形態(tài)。Fig.2 Comparison of stigma and floral traits of p5-1S、p28-1S and Pei'ai 64SA,D and G:Stigma exsertion;B,E and H:Anther morphology;C,F and I:Stigma morphology.

2.3 培矮64S及近等基因不育系育性感溫基因的定位分析

培矮64S及近等基因系經(jīng)全基因組測(cè)序在7號(hào)染色體中部和9號(hào)染色體末端有基因型頻率差異,分別位于7號(hào)染色體上的19 830.36～20 025 kb(長(zhǎng) 194.64 kb)和 9號(hào)染色體上的22 453.62～22 902.05 kb(長(zhǎng) 448.43 kb)。

根據(jù)網(wǎng)頁(yè)上查找的7號(hào)染色體和9號(hào)染色體區(qū)間上的SSR引物,對(duì)培矮64S的育性感溫基因進(jìn)行精細(xì)定位。7號(hào)染色體區(qū)間內(nèi)的8對(duì)SSR引物中RM21714沒(méi)有擴(kuò)增帶。另外7對(duì)SSR引物擴(kuò)增帶在培矮64S近等基因系中高溫不育單株和高溫可育單株的分布規(guī)律顯示:RGNM2661與基因不連鎖,RM21711、RM21712、RM21713、RM2-1715、RM21716和 RM21717分別檢測(cè)到了22、18、11、0、12 和 36個(gè)重組事件。其中,RM21715 被發(fā)現(xiàn)與育性感溫基因共分離(圖3和圖4)。因此,育性感溫基因被準(zhǔn)確定位在第7號(hào)染色體上RM-21713和RM21715之間的8.9 kb區(qū)間內(nèi),該區(qū)間有兩個(gè)候選基因:LOC_Os07g33380和LOC_O-s07g33390。

圖3 7號(hào)染色體上育性感溫基因連鎖的分子標(biāo)記以及重組事件的發(fā)生頻率R表示重組單株數(shù);×表示該SSR標(biāo)記與基因不連鎖。Fig.3 The molecular markers of chromosome 7 and the frequency of recombinant events“R”indicates the number of recombinant plants,and“×”indicates that the SSR marker is not linked to the gene.

圖4 SSR標(biāo)記RM21715對(duì)培矮64S近等基因系單株的標(biāo)記基因型W1:野生型G283;W2:野生型G40;P:培矮64S近等基因系。Fig.4 Marker genotype of SSR marker RM21715 on a single plant of sterile line derived from Pei'ai 64SW1:Wild-type rice G283;W2:Wild-type rice G40;P:Pei'ai 64S near isogenic line.

PCR擴(kuò)增9號(hào)染色體區(qū)間內(nèi)的19對(duì)SSR引物,結(jié)果顯示 RM2482、RM2848、RM2255、RM10-26、RM24825、RM24827、RM6797 這 7 對(duì)引物不可用。在22.46 Mb和22.88 Mb(0.42 Mb)的物理距離之間采用間隔法,選取了RM24824、RM205、RM24840、RM7586這4對(duì)SSR引物來(lái)分析培矮64S近等基因系中高溫不育單株和高溫可育單株,結(jié)果發(fā)現(xiàn)RM205和RM7586與基因不連鎖。對(duì)RM24840和RM7586之間的兩個(gè)SSR標(biāo)記RM-24844和RM24846進(jìn)行分析,將候選區(qū)間縮至22.61 Mb和22.84 Mb(0.23 Mb)之間。再將RM2-4824、RM205、RM24840標(biāo)記間 6個(gè) SSR 標(biāo)記全部進(jìn)行分析,結(jié)果表明RM24827與基因不連鎖,其余的 5個(gè) SSR標(biāo)記 RM24825、RM6797、RM2-4832、RM24833 和 RM1013,分別檢測(cè)到了 0、0、0、0和17個(gè)重組事件(圖5)。該區(qū)間并未發(fā)現(xiàn)最大可能的連鎖標(biāo)記,無(wú)法縮小置信區(qū)間。在RM24824和RM24833的164.2 kb區(qū)間內(nèi)有28個(gè)ORF,無(wú)法確定候選基因。需要在此區(qū)間內(nèi)增加SSR標(biāo)記和擴(kuò)大分析群體來(lái)進(jìn)一步縮小區(qū)間,以最終確定候選基因的精細(xì)定位。

圖5 9號(hào)染色體上育性感溫基因連鎖的分子標(biāo)記以及重組事件的發(fā)生頻率R表示重組單株數(shù);×表示該SSR標(biāo)記與基因不連鎖。Fig.5 The molecular markers of chromosome 9 and the frequency of recombinant events“R”indicates the number of recombinant plants,and“×”indicates that the SSR marker is not linked to the gene.

2.4 育性感溫候選基因分析

根據(jù)RM21713和RM21715在基因組的物理位置,在國(guó)家水稻基因數(shù)據(jù)中心(http://www.ricedata.cn/gene/)7號(hào)染色體上檢索此物理區(qū)間內(nèi)的基因,發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)標(biāo)記之間有兩個(gè)候選基因LOC_Os07g33380和LOC_Os07g33390,這兩個(gè)候選基因的功能注釋分別是表達(dá)蛋白和BCS1蛋白。

2.4.1 LOC_Os07g33380的序列和編碼蛋白分析

對(duì)7個(gè)野生型和7個(gè)培矮64S近等基因不育株系單株的候選基因LOC_Os07g33380進(jìn)行克隆測(cè)序以及核苷酸序列比對(duì)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在外顯子的第748 bp的核苷酸處存在1個(gè)胞嘧啶C到胸腺嘧啶T(C→T)的堿基替換,這個(gè)堿基的替換導(dǎo)致脯氨酸(非極性)突變成絲氨酸(極性)(圖6),這個(gè)位點(diǎn)的變化是否引起基因功能的改變需進(jìn)一步確認(rèn)。

圖6 培矮64S近等基因不育株系育性感溫候選基因LOC_Os07g33380的序列分析(A)野生型與培矮64S近等基因不育株系的CDS序列比對(duì)結(jié)果;(B)野生型與培矮64S近等基因不育株系的氨基酸序列比對(duì)結(jié)果。Fig.6 Analysis of candidate gene LOC_Os07g33380 from Pei'ai 64S near-isogenic lines(A)Comparison of CDS sequences between the wild-type and Pei'ai 64S near-isogenic lines;(B)Comparison of the amino acid sequence between the wild-type and Pei'ai 64S near isogenic lines.

利用TMpred(http://www.cbs.dtu.dk/cgi-bin/webface2.fcgi?jobid=5BE04E6600000E164CE1D13-2&wait=20)對(duì)LOC_Os07g33380編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行跨膜預(yù)測(cè),結(jié)果顯示該蛋白質(zhì)不是跨膜蛋白。同時(shí),利用PSIPRED(http://bioinf.cs.ucl.ac.uk/psipred/)預(yù)測(cè)分析野生型和培矮64S近等基因不育株系中LOC_Os07g33380基因編碼的蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu),結(jié)果表明,相對(duì)于野生型,培矮64S近等基因不育株系中多了一個(gè)α-螺旋和一段β折疊的氨基酸片段,并在40～60個(gè)氨基酸區(qū)間的兩個(gè)α-螺旋也有所差異,這些變化引起蛋白質(zhì)總體構(gòu)象的改變,導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能的改變或喪失。

2.4.2 LOC_Os07g33390的序列和編碼蛋白分析

對(duì)8個(gè)野生型和8個(gè)培矮64S近等基因不育株系單株的候選基因LOC_Os07g33390進(jìn)行克隆測(cè)序以及核苷酸序列比對(duì)分析,結(jié)果顯示,培矮64S近等基因不育株系在外顯子的第154～163 bp的核苷酸處缺失9個(gè)堿基(CGGCGGCGG),第817～820 bp的核苷酸處缺失3個(gè)堿基(GTG),第490 bp的核苷酸處存在兩個(gè)堿基替換(AA→GG),第794 bp的核苷酸處也存在兩個(gè)堿基替換(AA→CG),第290 bp、第354 bp、第591 bp等的核苷酸處發(fā)生了1個(gè)堿基替換(圖7)。該候選基因的編碼區(qū)序列出現(xiàn)了多處堿基替換和缺失,導(dǎo)致氨基酸序列也發(fā)生了很大的變化,這些位點(diǎn)的變化引起基因功能的改變。

利用TMpred(http://www.cbs.dtu.dk/cgi-bin/webface2.fcgi?jobid=5BE0516100000E16A1B7536-8&wait=20)對(duì)LOC_Os07g33390編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行跨膜預(yù)測(cè),結(jié)果顯示該蛋白質(zhì)不是跨膜蛋白。利用 PSIPRED(http://bioinf.cs.ucl.ac.uk/psipred/)預(yù)測(cè)分析野生型和培矮64S近等基因不育株系中LOC_Os07g33390基因編碼的蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu),結(jié)果顯示培矮64S近等基因不育株系中該蛋白質(zhì)比野生型的少了多個(gè)α-螺旋和β折疊,導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能改變或喪失,最終引起花粉不育。

3 討論

由于兩系雜交水稻具有配組自由、恢復(fù)源廣且有利于亞種間雜種優(yōu)勢(shì)的利用等優(yōu)點(diǎn),從1990年開(kāi)始兩系雜交水稻得到廣泛的應(yīng)用[10]。其配組自由易于選配到強(qiáng)優(yōu)勢(shì)組合,育種程序簡(jiǎn)化、育種周期縮短可以快速育成新的雜交水稻新品種,不育系類(lèi)型豐富易于培育多樣化水稻品種,使其生產(chǎn)面積逐漸擴(kuò)大,這是水稻雜種優(yōu)勢(shì)利用的主要途徑,對(duì)我國(guó)的糧食安全起到重要作用[11～12]。光溫敏核不育系是兩系雜交水稻應(yīng)用的關(guān)鍵,盡管已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了較多的光溫敏核不育材料,但比較重要的材料是光敏核不育材料農(nóng)墾58S和溫敏核不育材料安農(nóng)S-1[13]。對(duì)農(nóng)墾58S和安農(nóng)S-1等重要不育系進(jìn)行轉(zhuǎn)育及相關(guān)處理,育成了多個(gè)光溫敏核不育系。如:用農(nóng)墾58S和培矮64作為親本,運(yùn)用雜交和回交的方法選育出培矮64S[10];對(duì)安農(nóng)S-1/湘香B的后代進(jìn)行多年選育,育成了低溫敏型兩用核不育系安湘S[13]等。

在制種過(guò)程中,外界氣溫波動(dòng)會(huì)使這些不育系產(chǎn)生育性變化的風(fēng)險(xiǎn)[14],即低溫會(huì)使得部分不育系恢復(fù)育性,導(dǎo)致其無(wú)法應(yīng)用于雜交制種,因此需要尋找育性轉(zhuǎn)換溫度低的不育系材料。但臨界溫度過(guò)低會(huì)導(dǎo)致不育系難以自交結(jié)實(shí),因此需要選育“雙低”兩用不育系,即下限生理溫度和低臨界溫度的不育系,以保證不育系的制種安全[6,15]。阻礙雜交水稻制種產(chǎn)量增加的另一個(gè)因素是不育系異交結(jié)實(shí)率低[16]。不育系柱頭外露是限制雜交水稻制種異交結(jié)實(shí)率的關(guān)鍵[17]。楊保漢[18]發(fā)現(xiàn)自然條件下不育系柱頭外露率每提高1個(gè)百分點(diǎn),其結(jié)實(shí)率可提高0.74～0.92個(gè)百分點(diǎn),每公頃制種產(chǎn)量可增加47～68 kg。所以,本研究選育出的育性轉(zhuǎn)換溫度較低、柱頭大且外露率高的3個(gè)新型不育系水稻株系對(duì)于兩系法雜交水稻育種有著重要的意義。

目前,以溫敏核不育基因tms5在生產(chǎn)上應(yīng)用較多,而以光敏核不育基因遺傳的農(nóng)墾58S應(yīng)用較少,一是因?yàn)閠ms5基因遺傳模式簡(jiǎn)單,易于選育新的不育系,而農(nóng)墾58S的不育系為多基因調(diào)控,選育新不育系難度大;二是tms5不育類(lèi)型易于選育出不育臨界溫度低于23.5℃的不育系[19],而農(nóng)墾58S衍生的不育系育性最穩(wěn)定的是培矮64S,在23.5℃條件下仍有低度可育花粉。研究報(bào)道,溫度對(duì)光敏核不育系農(nóng)墾58S及衍生不育系的花粉育性都有一定影響[11],但其育性感溫性狀的遺傳規(guī)律和分子機(jī)制還未見(jiàn)報(bào)道。本研究對(duì)光敏核不育系農(nóng)墾58S及衍生不育系感溫性狀的分子機(jī)制進(jìn)行了初步研究,定位了與育性感溫性關(guān)聯(lián)的兩個(gè)基因位點(diǎn)。序列比對(duì)分析表明,這兩個(gè)位點(diǎn)與Mei等[20]克隆的PMS3和Fan等[21]克隆的PMS1T位點(diǎn)均不重疊,提示新鑒定位點(diǎn)可能含有新的與水稻育性感溫性狀相關(guān)的基因。有關(guān)這兩個(gè)位點(diǎn)的基因及功能還需作進(jìn)一步的深入研究。