楊 梅,迪麗美合日·迪力夏提,趙翡翠,2,3

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院,新疆 烏魯木齊,830000;2.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院 藥學(xué)部,新疆 烏魯木齊 830000;3.新疆中藥炮制研究重點實驗室,新疆 烏魯木齊,830000)

卵巢癌起病隱匿，約70%的患者發(fā)現(xiàn)時已屬晚期，病死率居婦科惡性腫瘤的首位[1-2]。目前卵巢癌的治療方法為手術(shù)、放療和化療，但化療具有較強的毒副作用及耐藥性，且復(fù)發(fā)率高[3-5]。中醫(yī)研究[6]認(rèn)為腫瘤是因正氣虧虛，氣滯、血瘀、痰結(jié)、濕聚、熱毒等互相搏結(jié)，日久積滯形成腫塊而導(dǎo)致，可采用烏頭屬的辛溫之藥以毒攻毒、開結(jié)破凝，以溫陽散寒之法治療腫瘤?，F(xiàn)代藥理研究[7]也證實烏頭類中藥對腫瘤治療效果顯著。準(zhǔn)噶爾烏頭是毛茛科植物準(zhǔn)噶爾烏頭的干燥塊根，專產(chǎn)于中國新疆維吾爾自治區(qū)北部地區(qū)，作為哈薩克族重要的傳統(tǒng)民族藥材，準(zhǔn)噶爾烏頭在哈薩克族民間常被作為“藥用烏頭”，《哈薩克藥志》等文獻[8-10]記載其性味辛、苦、大熱，有毒，炮制減毒后用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腹部腫塊、肋間神經(jīng)痛等。研究[11]表明準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品具有一定的抗腫瘤活性，但作用機制尚不明確。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)[12]關(guān)注整體性和系統(tǒng)性的特點與中醫(yī)藥學(xué)的整體觀念相吻合，有助于探索中藥多成分、多靶點、多途徑的作用機制。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品的抗卵巢癌潛在作用機制，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物

準(zhǔn)噶爾烏頭及其炮制品、烏頭屬植物。目前國內(nèi)外未見準(zhǔn)噶爾烏頭及其炮制品抗卵巢癌作用機制的文獻且有關(guān)準(zhǔn)噶爾烏頭的文獻很少，故本研究利用準(zhǔn)噶爾烏頭與烏頭屬植物具有化學(xué)親緣性的特點擴大檢索范圍[13-15],收集準(zhǔn)噶爾烏頭及烏頭屬植物全部化學(xué)成分，并從中篩選活性成分納入準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品活性成分中研究。

1.2 數(shù)據(jù)庫、分析平臺及軟件

本研究使用的數(shù)據(jù)庫、分析平臺及軟件見表1。

表1 數(shù)據(jù)庫、分析平臺及軟件

1.3 藥物活性成分收集與篩選

通過TCMSP、BATMAN-TCM、TCM-ID及文獻收集準(zhǔn)噶爾烏頭及其炮制品、烏頭屬植物所有化學(xué)成分。根據(jù)口服生物利用度(OB)與類藥性(DL)對成分進行篩選?？紤]到樣本量及數(shù)據(jù)的復(fù)雜性，篩選標(biāo)準(zhǔn)定為:OB≥20%，DL≥0.14[16]。

1.4 藥物作用靶點預(yù)測及有效活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建

通過PubChem數(shù)據(jù)庫確認(rèn)篩選出的活性成分，下載其2D結(jié)構(gòu)導(dǎo)入Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫進行靶點預(yù)測。借助TCMSP、BATMAN-TCM、TCM-ID數(shù)據(jù)庫對確認(rèn)的活性成分進行靶點預(yù)測。將獲得的全部藥物靶點去重，導(dǎo)入Uniprot數(shù)據(jù)庫校正靶點信息，得到準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品有效活性成分作用靶點。經(jīng)Cytoscape 3.6.1可視化處理，構(gòu)建有效活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖。

1.5 人卵巢癌靶點篩選

在TTD數(shù)據(jù)庫中以“Ovarian cancer”為關(guān)鍵詞，檢索得到人卵巢癌相關(guān)靶點;在DisGeNET數(shù)據(jù)庫中以“Ovarian cancer”為關(guān)鍵字進行檢索，選取其中基因-疾病關(guān)聯(lián)評分(score_gda)>0.05的靶點信息進行研究[17];在GeneCards數(shù)據(jù)庫中以“Ovarian cancer”為關(guān)鍵字進行檢索，選取其中相關(guān)度得分(relevance score)≥20的靶點信息進行研究[18]。

在GEO數(shù)據(jù)庫中以“Ovarian cancer”為關(guān)鍵詞檢索相關(guān)芯片，獲取編號為GSE18520的芯片文件和GPL570的芯片基因注釋文件。該芯片數(shù)據(jù)包含53例卵巢癌標(biāo)本和10例正常卵巢表面上皮(OSE)刷。對芯片數(shù)據(jù)進行基因差異表達在線分析，篩選出顯著差異基因，篩選標(biāo)準(zhǔn)為:P<0.05,差異倍數(shù)(FC)>4[19]。應(yīng)用R語言ggplot2程序包繪制火山圖。最終獲得人卵巢癌的差異表達基因。

將TTD、DisGeNET、GeneCard數(shù)據(jù)庫中獲取的人卵巢癌相關(guān)靶點與GEO數(shù)據(jù)庫中獲得的人卵巢癌差異表達基因取并集，將并集中的靶點信息導(dǎo)入Uniprot數(shù)據(jù)庫進行校對，最終獲得人卵巢癌相關(guān)靶點。

1.6 準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌關(guān)鍵靶點挖掘

將1.4標(biāo)題內(nèi)容中預(yù)測到的藥物作用靶點與1.5標(biāo)題內(nèi)容中檢索到的人卵巢癌潛在靶點經(jīng)Draw Venn Diagram在線軟件取交集，獲得準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌關(guān)鍵靶點，并繪制維恩圖。

1.7 “疾病-藥物-成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將1.6標(biāo)題內(nèi)容中得到的準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌關(guān)鍵靶點與活性成分對應(yīng)的靶點進行比對，篩選出能夠作用到關(guān)鍵靶點上的活性成分，剔除未作用到關(guān)鍵靶點上的活性成分，整合對應(yīng)有效活性成分，導(dǎo)入Cytoscape 3.6.1軟件，構(gòu)建“疾病-藥物-成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)。

1.8 DAVID富集分析

采用DAVID數(shù)據(jù)庫對關(guān)鍵靶點進行基因本體(GO)生物學(xué)功能分析及京都基因和基因組數(shù)據(jù)庫(KEGG)富集分析。運用R語言ggPlot2程序包對GO富集分析結(jié)果中滿足P<0.05且按P值升序排列的前20條結(jié)果繪制條形圖，對KEGG富集分析結(jié)果中滿足P<0.05且按P值升序排列的前20條結(jié)果繪制氣泡圖。

1.9 關(guān)鍵靶點蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將1.6標(biāo)題內(nèi)容中挖掘出的關(guān)鍵靶點映射到String數(shù)據(jù)庫，選擇物種為人，以最低要求互動得分0.7為篩選參數(shù)[20]，對結(jié)果進行整合，借助Cytoscape 3.6.1進行可視化處理，構(gòu)建準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌的關(guān)鍵靶點蛋白質(zhì)互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖并進行網(wǎng)絡(luò)分析。

2 結(jié) 果

2.1 準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品活性成分

從TCMSP、BATMAN-TCM、TCM-ID及文獻中獲得準(zhǔn)噶爾烏頭及其炮制品、烏頭屬植物化學(xué)成分577個，按照同時滿足OB≥20%、DL≥0.14的標(biāo)準(zhǔn)篩選出有效活性成分41個。

2.2 準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品作用靶點及有效活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖

通過PubChem數(shù)據(jù)庫對41個有效活性成分確認(rèn)后，借助Swiss Target Prediction、TCMSP、BATMAN-TCM、TCM-ID預(yù)測有效活性成分靶點，得到有對應(yīng)靶點的有效活性成分30個，見表2。經(jīng)Cytoscape 3.6.1進行可視化處理，構(gòu)建有效活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)圖，其中有效活性成分的作用靶點627個，有效活性成分與對應(yīng)靶點間存在1 703個相互關(guān)系。見圖1。

2.3 人卵巢癌作用靶點

在TTD、DisGeNET、GeneCards數(shù)據(jù)庫中分別獲得人卵巢癌靶點42、70、788個。在GEO數(shù)據(jù)庫中獲得1 145個顯著差異基因(去重后為1 139個)，其中上調(diào)基因516個，下調(diào)基因629個，繪制人卵巢癌差異基因火山圖，見圖2。將上述4個數(shù)據(jù)庫中獲得的人卵巢癌靶點及人卵巢癌顯著差異基因取并集，經(jīng)Uniprot數(shù)據(jù)庫校對，最終得到人卵巢癌靶點1 667個。

表2 準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品有效活性成分信息

2.4 準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌關(guān)鍵靶點

將627個準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品有效活性成分作用靶點與1 667個人卵巢癌靶點經(jīng)Draw Venn Diagram在線軟件取交集，獲得準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌關(guān)鍵靶點152個，并以“靶點名稱(縮寫)”的形式表示:即72 kDa type IV collagenase(MMP2)、transketolase(TKT)、estradiol 17-beta-dehydrogenase 1(HSD17B1)、estradiol 17-beta-dehydrogenase 2(HSD17B2)、high affinity nerve growth factor receptor(NTRK1)、matrilysin(MMP7)、nitric oxide synthase(NOS2)、fibroblast growth factor receptor 1(FGFR1)、hepatocyte growth factor receptor(MET)、cytochrome P450 2D6(CYP2D6)、C5a anaphylatoxin chemotactic receptor 1(C5AR1)、G1/S-specific cyclin-E1(CCNE1)、amine oxidase (flavin-containing)A (MAOA)、cyclin-dependent kinase 1(CDK1)、focaladhesionkinase1(PTK2)、sexhormone-bindingglobulin(SHBG)、cholinesterase(BCHE)、apoptosisregulatorBcl-2(BCL2)、phosphatidylinositol4,5-bisphosphate3-kinasecatalyticsubunitbetaisoform(PIK3CB)、endothelin-1receptor(EDNRA)、gonadotropin-releasinghormonereceptor(GNRHR)、beta-secretase2(BACE2)、retinoicacidreceptorbeta(RARB)、aurorakinaseA(AURKA)、alpha-1Aadrenergicreceptor(ADRA1A)、arylhydrocarbonreceptor(AHR)、dihydrofolatereductase(DHFR)、aurorakinaseB(AURKB)、aromatase(CYP19A1)、latelet-derivedgrowthfactorreceptorbeta(PDGFRB)、integrinbeta-1(ITGB1)、mast/stemcellgrowthfactorreceptorKit(KIT)、tyrosine-proteinkinaseJAK2(JAK2)、prostaglandinG/Hsynthase2(PTGS2)、G1/S-specificcyclin-D1(CCND1)、neuropeptideYreceptortype1(NPY1R)、estrogenreceptor(ESR1)、cyclin-dependentkinase4(CDK4)、thymidylatesynthase(TYMS)、cGMP-inhibited3′,5′-cyclicphosphodiesteraseA(PDE3A)、dualspecificitymitogen-activatedproteinkinasekinase4(MAP2K4)、phosphatidylinositol4,5-bisphosphate3-kinasecatalyticsubunitdeltaisoform(PIK3CD)、cyclin-A2(CCNA2)、interstitialcollagenase(MMP1)、solutecarrierfamily2(SLC2A1)、indoleamine2,3-dioxygenase1(IDO1)、vascularendothelialgrowthfactorreceptor1(FLT1)、tyrosine-proteinkinasereceptorUFO(AXL)、mitogen-activatedproteinkinase1(MAPK1)、matrixmetalloproteinase-14(MMP14)、E3ubiquitin-proteinligaseMdm2(MDM2)、epidermalgrowthfactorreceptor(EGFR)、receptortyrosine-proteinkinaseerbB-2(ERBB2)、mitogen-activatedproteinkinase8(MAPK8)、proteinase-activatedreceptor1(F2R)、tyrosine-proteinkinaseABL1(ABL1)、highaffinitycAMP-specific3′,5′-cyclicphosphodiesterase7A(PDE7A)、mitogen-activatedproteinkinase12(MAP3K12)、beta-glucuronidase(GUSB)、serine/threonine-proteinkinaseChk2(CHEK2)、telomerasereversetranscriptase(TERT)、proto-oncogenetyrosine-proteinkinaseSrc(SRC)、cyclin-dependentkinase2(CDK2)、progesteronereceptor(PGR)、serine/threonine-proteinphosphatase2Acatalyticsubunitalphaisoform(PPP2CA)、steroid17-alpha-hydroxylase/17,20lyase(CYP17A1)、gamma-aminobutyricacidreceptorsubunitbeta-3(GABRB3)、plasminogen(PLG)、serine/threonine-proteinkinasePAK4(PAK4)、phosphatidylinositol3-kinaseregulatorysubunitalpha(PIK3R1)、acetyl-CoAcarboxylase2(ACACB)、beta-3adrenergicreceptor(ADRB3)、isocitratedehydrogenase1(IDH1)、histonedeacetylase1(HDAC1)、P2Xpurinoceptor7(P2RX7)、estrogenreceptorbeta(ESR2)、ephrintype-Breceptor4(EPHB4)、cytochromeP4501B1(CYP1B1)、M-phaseinducerphosphatase1(CDC25A)、prostaglandinE2receptorEP3subtype(PTGER3)、deoxycytidinekinase(DCK)、arachidonate5-lipoxygenase(ALOX5)、protein-glutaminegamma-glutamyltransferase2(TGM2)、tyrosine-proteinphosphatasenon-receptortype11(PTPN11)、serine/threonine-proteinkinasePLK1(PLK1)、dipeptidylpeptidase4(DPP4)、serine/threonine-proteinkinaseChk1(CHEK1)、kinesin-likeproteinKIF11(KIF11)、potassiumvoltage-gatedchannelsubfamilyHmember2(KCNH2)、peroxisomeproliferator-activatedreceptorgamma(PPARG)、proteinkinaseCdeltatype(PRKCD)、proto-oncogenetyrosine-proteinkinasereceptorRet(RET)、multidrugresistanceprotein1(ABCB1)、cannabinoidreceptor1(CNR1)、glucocorticoidreceptor(NR3C1)、serine/threonine-proteinkinasemTOR(MTOR)、integrin-linkedproteinkinase(ILK)、mitogen-activatedproteinkinase14(MAPK14)、cyclin-dependentkinase6(CDK6)、tyrosine-proteinkinaseCSK(CSK)、RAFproto-oncogeneserine/threonine-proteinkinase(RAF1)、gamma-aminobutyricacidreceptorsubunitbeta-2(GABRB2)、signaltransducerandactivatoroftranscription3(STAT3)、sphingosinekinase1(SPHK1)、TGF-betareceptortype-1(TGFBR1)、type-1angiotensinⅡreceptor(AGTR1)、cathepsinD(CTSD)、Kelch-likeECH-associatedprotein1(KEAP1)、inducedmyeloidleukemiacelldifferentiationproteinMcl-1(MCL1)、G1/S-specificcyclin-D3(CCND3)、interleukin-6(IL6)、heatshockproteinHSP90-alpha(HSP90AA1)、poly(ADP-ribose)polymerase1(PARP1)、vitaminD3receptor(VDR)、max-likeproteinX(MLX)、rho-associatedproteinkinase1(ROCK1)、vascularendothelialgrowthfactorreceptor2(KDR)、UDP-N-acetylglucosamine-peptideN-acetylglucosaminyltransferase110kDasubunit(OGT)、ATP-bindingcassettesub-familyGmember2(ABCG2)、multipleendocrineneoplasia1(MEN1)、retinoicacidreceptoralpha(RARA)、tyrosine-proteinphosphatasenon-receptortype1(PTPN1)、beta-secretase1(BACE1)、phosphatidylinositol4,5-bisphosphate3-kinasecatalyticsubunitgammaisoform(PIK3CG)、NAD(P)Hdehydrogenase(quinone)1(NQO1)、phosphatidylinositol4,5-bisphosphate3-kinasecatalyticsubunitalphaisoform(PIK3CA)、Interleukin-2(IL2)、DNAtopoisomerase2-alpha(TOP2A)、insulin-likegrowthfactor1receptor(IGF1R)、calcitoningene-relatedpeptidetype1receptor(CALCRL)、intercellularadhesionmolecule1(ICAM1)、Bcl-2-likeprotein1(BCL2L1)、mitogen-activatedproteinkinase3(MAPK3)、inhibitorofnuclearfactorkappa-Bkinasesubunitepsilon(IKBKE)、hypoxia-induciblefactor1-alpha(HIF1A)、Toll-likereceptor4(TLR4)、tyrosine-proteinkinaseJAK1(JAK1)、fattyacid-bindingprotein(FABP4)、G1/S-specificcyclin-D2(CCND2)、RAC-alphaserine/threonine-proteinkinase(AKT1)、dualspecificitymitogen-activatedproteinkinase1(MAP2K1)、highaffinitycAMP-specificandIBMX-insensitive3′,5′-cyclicphosphodiesterase8B(PDE8B)、prostaglandinG/Hsynthase1(PTGS1)、macrophagecolony-stimulatingfactor1receptor(CSF1R)、transcriptionfactorAP-1(JUN)、dualspecificityproteinkinaseTTK(TTK)、androgenreceptor(AR)、proteinkinaseCalphatype(PRKCA)、trypsin-1(PRSS1)、ribosomalproteinS6kinasebeta-1(RPS6KB1)、matrixmetalloproteinase-9(MMP9)、DNAtopoisomerase1(TOP1)。繪制的維恩圖見圖3。

2.5 “疾病-藥物-成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖

應(yīng)用Cytoscape 3.6.1軟件構(gòu)建“疾病-藥物-成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖，該網(wǎng)絡(luò)中共有181個節(jié)點，其中紅色為疾病節(jié)點，共1個;藍(lán)色為藥物節(jié)點，共1個;紫色為成分節(jié)點，共27個(剔除了3個未作用到關(guān)鍵靶點上的活性成分);綠色為靶點節(jié)點，共152個;共663條邊。見圖4。

2.6 DAVID富集分析

通過DAVID數(shù)據(jù)庫富集分析獲得GO條目559條(P<0.05),其中生物過程(BP)條目404個，主要包括蛋白磷酸化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖正調(diào)控等;細(xì)胞組成(CC)條目67個，主要包括細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶全酶復(fù)合物、磷脂酰肌醇-3-激酶復(fù)合物等;分子功能(MF)條目88個，主要包括ATP結(jié)合、蛋白酪氨酸激酶活性、蛋白絲氨酸激酶活性等。按P值排序，將每個模塊前20位條目使用R語言ggplot2程序包繪制條形圖，橫坐標(biāo)為富集基因的個數(shù)，柱的顏色代表-log10(P)值的大小，顏色由藍(lán)到紅表示-log10(P)值遞增，見圖5。

通過DAVID數(shù)據(jù)庫對關(guān)鍵靶點進行KEGG通路富集分析得到108條通路(P<0.05),其中包括癌癥途徑、PI3K/Akt信號通路、VEGF信號通路、HIF-1信號通路等。按P值排序，選取前20位通路，使用R語言ggplot2程序包繪制氣泡圖，橫坐標(biāo)表示該通路所富集的基因占總體輸入基因的比率，氣泡顏色越紅提示-log10(P)值越大，表示KEGG通路富集越顯著，氣泡越大表示KEGG通路越重要，見圖6。

2.7 關(guān)鍵靶點PPI網(wǎng)絡(luò)

152個關(guān)鍵靶點映射到String數(shù)據(jù)庫，隱藏?zé)o相互關(guān)聯(lián)的靶點，獲得關(guān)鍵靶點相互作用網(wǎng)絡(luò)圖，包含148個靶點(4個靶點未參與),1 052條邊，平均自由度為13.8,平均局部聚類系數(shù)為 0.54。借助Cytoscape 3.6.1進一步進行可視化處理，構(gòu)建出準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌的關(guān)鍵靶點PPI網(wǎng)絡(luò)圖，并使用Cytoscape 3.6.1 軟件中Network Analyzer工具對網(wǎng)絡(luò)中的節(jié)點進行相關(guān)參數(shù)分析，其中degree值越大、節(jié)點越大、節(jié)點的顏色越深，節(jié)點的顏色由綠色變?yōu)槌壬?，表示該?jié)點越重要;combine score值越大、邊越粗，表示由該邊代表的靶點間關(guān)系越密切，見圖7。

2.8 核心靶點分析

通過Cytoscape 3.6.1計算,PPI網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點的度值的中位值為24.500,介數(shù)的中位值為302.240,緊密度的中位值為0.164,度值、介數(shù)和緊密度均超過中位值的靶點共18個，分別為AKT1、MAPK1、PIK3CA、STAT3、SRC、MAPK3、HSP90AA1、PIK3R1、EGFR、MAPK8、JAK2、IL6、CCND1、JUN、MMP9、ESR1、MAPK14、AR。這些節(jié)點可能是準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌的核心靶點。

3 討 論

卵巢癌是嚴(yán)重危害女性健康的常見惡性腫瘤之一。目前，化療藥物的毒副作用和耐藥是卵巢癌治療中的重要問題。中醫(yī)[6]認(rèn)為腫瘤屬“積聚”“癥瘕”等范疇，采用烏頭類大辛大溫之品，以其溫陽散寒之功治療腫瘤已得到醫(yī)學(xué)界的認(rèn)可[21]。準(zhǔn)噶爾烏頭在哈薩克族民間作為“藥用烏頭”長期使用，研究[11]表明，準(zhǔn)噶爾烏頭具有一定的抗卵巢癌活性，但作用機制不明確。

本研究發(fā)現(xiàn)準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌活性成分27個，包括準(zhǔn)噶爾烏頭堿、脫氧烏頭堿、次烏頭堿、亞油酸甲酯等。準(zhǔn)噶爾烏頭堿、脫氧烏頭堿、次烏頭堿是準(zhǔn)噶爾烏頭中已明確的化學(xué)成分[22-23],其余活性成分是根據(jù)準(zhǔn)噶爾烏頭與烏頭屬植物具有化學(xué)親緣性的特點[13-15],通過以烏頭屬植物代表性化學(xué)成分?jǐn)U大數(shù)據(jù)庫檢索范圍而收集到的烏頭屬植物含有的化學(xué)成分。本研究預(yù)測出準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌作用靶點可能是PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD、PIK3CG、EGFR、MAPK1、MAPK3、CDK6等。PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD、PIK3CG是磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)的催化異構(gòu)體。PI3K是原癌基因，能磷酸化磷脂酰肌醇、磷脂酰肌醇4-磷酸和磷脂酰肌醇4，5-二磷酸，生成磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸(PIP3),PIP3招募PH結(jié)構(gòu)域蛋白到細(xì)胞膜，包括AKT1和PDPK1,從而激活涉及細(xì)胞生長、生存、增殖、運動和形態(tài)的信號級聯(lián)，發(fā)揮關(guān)鍵作用[24]。EGFR是表皮生長因子受體家族成員之一，能激活多種下游信號通路，促進腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[25-26]。研究[27]表明EGFR是解決上皮性卵巢癌化療耐藥問題新的治療靶點。MAPK1、MAPK3屬于絲/蘇氨酸蛋白激酶,MAPK在許多腫瘤中都表現(xiàn)出異常表達，在卵巢癌組織中,MAPK1、MAPK3均高表達，表明其在卵巢癌中可能被異常激活,MAPK1、MAPK3可能是卵巢癌的作用靶點[28]。CDK6作為重要的細(xì)胞周期促進因子，參與誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的增殖,CDK6過表達在卵巢癌發(fā)病和導(dǎo)致不良預(yù)后方面發(fā)揮了重要的作用,CDK6可作為潛在靶點用于卵巢癌的治療[29]。

本研究預(yù)測出準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌信號通路有癌癥途徑、PI3K/Akt信號通路、VEGF信號通路、HIF-1信號通路等，其中PI3K-Akt信號通路通過多種途徑抑制腫瘤細(xì)胞凋亡。PI3K/Akt 信號通路通過活化PI3K 后產(chǎn)生PIP3，進而活化Akt，促進腫瘤血管形成，加劇腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[30]。卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展以及化療耐藥都與PI3K/AKT信號通路的過度激活密切相關(guān)，該通路能夠介導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲，抑制卵巢癌細(xì)胞的凋亡和自噬[31-33]。VEGF信號通路是上皮性卵巢癌多藥耐藥相關(guān)信號通路之一[34]。研究[35]表明，通過使用血管抑制劑競爭性結(jié)合血管內(nèi)皮生長因子受體的激酶結(jié)構(gòu)域，可以抑制VEGF通路，從而明顯提高晚期卵巢癌患者的存活率。缺氧是實體腫瘤微環(huán)境的基本特征之一，腫瘤內(nèi)的缺氧環(huán)境與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[36-37]。HIF-1是在缺氧條件下普遍存在的重要調(diào)節(jié)因子[38-39],HIF-1由α亞基(α亞基影響HIF-1的活性)和β亞基(β亞基是結(jié)構(gòu)性亞基)構(gòu)成[40-41]。HIF-1對基因表達的調(diào)節(jié)導(dǎo)致葡萄糖攝取和氧化，能量產(chǎn)生和血管生成的改變，進而調(diào)節(jié)多種靶基因轉(zhuǎn)錄，使得糖酵解限速酶激活，有氧糖酵解增加、葡萄糖攝取率提高等，從而促進腫瘤細(xì)胞在缺氧或低氧條件下增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移[42-43]。研究[44-45]表明，通過抑制HIF-1α途徑，可以下調(diào)HK2、LDHA表達，從而抑制卵巢癌細(xì)胞的糖酵解，有效抑制卵巢癌細(xì)胞增殖。

綜上所述，本研究通過綜合運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)探討準(zhǔn)噶爾烏頭炮制品抗卵巢癌可能的關(guān)鍵靶點及分子機制，為治療卵巢癌提供新的切入點，為民族藥的開發(fā)利用提供新的思路。由于本研究結(jié)論是借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)對數(shù)據(jù)庫進行挖掘得出，為保證網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性，后續(xù)仍需進一步實驗驗證。