張海軍 曹培超 鄭占強(qiáng) 薛長理 梁春東 張圣旭

膠質(zhì)瘤是常見的顱內(nèi)原發(fā)性腫瘤，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，預(yù)后不良[1]。 研究指出微小核糖核酸（microRNA，miRNA）參與細(xì)胞凋亡、增殖、分化等過程，與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)[2]。張雨薇等[3]指出miR-145-5p 與多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)，例如前列腺癌、膀胱癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌等，具有抑癌作用，受競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA 的調(diào)控。本文探討腦膠質(zhì)瘤miR-145-5p的表達(dá)及其與病人預(yù)后的關(guān)系，為臨床膠質(zhì)瘤的診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后病理證實(shí)為腦膠質(zhì)瘤；術(shù)前無免疫治療、放療與化療史；無先天疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：復(fù)發(fā)性膠質(zhì)瘤；患其他惡性腫瘤；長期使用激素、免疫抑制劑；心、肝等重要臟器功能不全；患血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾??；既往有腦血管疾病、腦膜炎等病史。選擇2016 年6 月～2018 年6 月手術(shù)切除的人腦膠質(zhì)瘤組織155例，其中男89例，女66例；年齡31～69 歲，平均（55.93±12.16）歲。取同期顱腦損傷顱內(nèi)減壓術(shù)切除的非腫瘤腦組織56例為對(duì)照，其中男32 例，女24 例；年齡30～72 歲，平均（56.19±10.98）歲。

1.2 miR-145-5p 的檢測(cè) 利用qRT-PCR 法檢測(cè)miR-145-5p 的表達(dá)水平。Trizol 試劑（美國Genecopia 公司）提取組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA（美國Genecopia 公司）。實(shí)時(shí)定量PCR 反應(yīng)條件：95 ℃5min 預(yù)變性；95 ℃10s 變性；58 ℃20 s 退火；72 ℃30 s 延伸；循環(huán)45 次。引物序列：miR-145-5p 上游引 物5'-GTGTAACAAATCTATAGGGCCA-3'，下 游引物5'-GAGGCCCAGCAGACAATGAGACT-3'；內(nèi)參U6上游引物5'-GCGAAGTGTGAAGCGTTC-3'，下游引物5'-GTGTGGAGCCGAGGT-3'。利用2-△△CT法計(jì)算miR-145-5p相對(duì)表達(dá)水平。根據(jù)miR-145-5p表達(dá)水平均值分成高表達(dá)與低表達(dá)。

1.3 隨訪 術(shù)后第1 天開始隨訪，截止2021 年6 月30日，隨訪方式為門診隨訪與微信或電話隨訪，記錄病人生存預(yù)后情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件分析；計(jì)量資料以±s表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；利用多因素Cox比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析腦膠質(zhì)瘤生存預(yù)后的危險(xiǎn)因素；利用Kaplan-Meier 生存曲線分析miR-145-5p 表達(dá)水平與病人生存預(yù)后的關(guān)系；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 人腦膠質(zhì)瘤miR-145-5p的表達(dá)變化 腦膠質(zhì)瘤組織miR-145-5p相對(duì)表達(dá)量[（4.36±1.64）]明顯低于對(duì)照組[（9.41±1.17）；P＜0.001]。

2.2 腦膠質(zhì)瘤病人生存預(yù)后的影響因素 隨訪截止時(shí)，生存85例，死亡70例。單因素分析顯示，腫瘤病理分級(jí)、腫瘤大小、腫瘤切除程度、術(shù)后化/放療、miR-145-5p 表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤預(yù)后有關(guān)（P＜0.05，表1）。多因素Cox 比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示，WHO分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)、腫瘤直徑≥5 cm、腫瘤未全切除、術(shù)后未放化療、miR-145-5p低表達(dá)是膠質(zhì)瘤生存預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05，表2）。

表1 本文人腦膠質(zhì)瘤生存預(yù)后影響因素的單因素分析

表2 本文人腦膠質(zhì)瘤生存預(yù)后影響因素的多因素Cox 比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析

2.3 miR-145-5p表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤生存預(yù)后的關(guān)系 生存曲線分析顯示，miR-145-5p低表達(dá)組3年累積生存率（54.74%）較高表達(dá)組（80.00%）明顯降低（P＜0.001，圖1）。

圖1 生存曲線分析miR-145-5p 表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤生存預(yù)后的關(guān)系

3 討論

腦膠質(zhì)瘤病人的預(yù)后與腫瘤病理分級(jí)密切相關(guān)，腫瘤病理分級(jí)越高，表明惡變程度越高，預(yù)后也相應(yīng)較差，尤其對(duì)中老年病人，多有基礎(chǔ)疾病，身體機(jī)能差，可能對(duì)化療、放療不耐受，預(yù)后更差[4]。腦膠質(zhì)瘤呈浸潤性生長，即使行手術(shù)切除聯(lián)合放、化療，術(shù)后仍會(huì)復(fù)發(fā)[5]。研究表明miRNA 與腫瘤發(fā)生、進(jìn)展過程有關(guān)，與靶基因3'-UTR 區(qū)相結(jié)合，參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展[6]。韓鋮琛等[7]發(fā)現(xiàn)miR-145 在膠質(zhì)瘤中呈低表達(dá)，上調(diào)其表達(dá)水平，能抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖。miR-145位于人類5號(hào)染色體，經(jīng)轉(zhuǎn)錄之后能形成成熟的miR-145-5p，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮調(diào)控作用[8]。

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤組織miR-145-5p 表達(dá)水平明顯下調(diào)。這與曹英海等[9]研究報(bào)道一致。研究發(fā)現(xiàn)，miR-145-5p通過抑制絲裂原激活的蛋白激酶和磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B 通路，從而抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖、遷移以及侵襲[10]。本文還發(fā)現(xiàn)miR-145-5p 低表達(dá)與膠質(zhì)瘤病人不良預(yù)后密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)miR-145高表達(dá)能增強(qiáng)替莫唑胺抑制U251 細(xì)胞惡性行為的效果[11]。miR-145-5p 能負(fù)向調(diào)控雙特異性磷酸酶6，抑制腫瘤細(xì)胞侵襲與增殖[12]；還對(duì)Sp1基因/核因子κB信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)節(jié)，抑制腫瘤細(xì)胞增殖[13]。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤組織miR-145-5p表達(dá)明顯下調(diào)，與病人不良預(yù)后密切相關(guān)。這提示檢測(cè)miR-145-5p 的表達(dá)水平對(duì)人腦膠質(zhì)瘤病人的預(yù)后有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。