簡(jiǎn) 迅， 王丹陽(yáng)， 許燕楠， 陳佳美， 劉 偉， 陳高峰， 張 華， 劉 平， 慕永平

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院， 上海中醫(yī)藥大學(xué)肝病研究所， 肝腎疾病病證教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 上海市中醫(yī)臨床重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 上海 201203

肝纖維化是多種慢性肝病所致的以肝臟細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)過(guò)度增生與異常沉積，導(dǎo)致肝臟組織結(jié)構(gòu)和/或功能發(fā)生異常改變的病理變化。眾所周知，肝星狀細(xì)胞(HSC)是肝纖維化發(fā)生的關(guān)鍵細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)，而巨噬細(xì)胞在HSC的活化過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵的作用[1]。肝臟巨噬細(xì)胞主要由肝臟Kupffer細(xì)胞和浸潤(rùn)的單核巨噬細(xì)胞構(gòu)成。在慢性肝損傷過(guò)程中，巨噬細(xì)胞可通過(guò)釋放促炎細(xì)胞因子或趨化因子等激活HSC，使其轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，分泌大量的ECM，最終導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生與發(fā)展[2]。同時(shí)，巨噬細(xì)胞具有高度的可塑性，其可根據(jù)環(huán)境信號(hào)快速地在促炎(M1)和抗炎(M2)之間進(jìn)行表型轉(zhuǎn)換，稱之為巨噬細(xì)胞極化[3]。M1和M2巨噬細(xì)胞具有高度異質(zhì)性，對(duì)纖維化肝臟ECM沉積和組織重建具有雙重調(diào)節(jié)作用[4]。如在細(xì)菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)或炎癥因子等的影響下，巨噬細(xì)胞經(jīng)歷經(jīng)典活化并分化為M1巨噬細(xì)胞，分泌炎性細(xì)胞因子如TNFα、IL-6以及活性氧等，使M1巨噬細(xì)胞在清除病原體的同時(shí)引發(fā)炎癥反應(yīng)。為了保護(hù)宿主免受炎癥損害，巨噬細(xì)胞可被IL-4和IL-13等替代激活并分化為M2巨噬細(xì)胞，產(chǎn)生抗炎細(xì)胞因子(如IL-10)，主要參與凋亡細(xì)胞吞噬、炎癥消退、組織修復(fù)和重塑等[5]。目前關(guān)于M1和M2巨噬細(xì)胞在肝纖維化發(fā)生中的作用尚存在分歧，本研究分離大鼠原代骨髓巨噬細(xì)胞(bone marrow-derived macrophages, BMDM)，體外誘導(dǎo)分化為M1(M1-BMDM)或M2(M2-BMDM)表型后移植至CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠體內(nèi)，觀察其對(duì)肝纖維化進(jìn)展的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 生長(zhǎng)因子：粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)購(gòu)于Cyagen公司；巨噬細(xì)胞集落刺激因子購(gòu)于Novus Biologicals公司。L929細(xì)胞株購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。兔多克隆抗體抗CD11b/c[Alexa Fluor?405](NB110-40766AF405)、小鼠單克隆抗體抗CD68[Alexa Fluor?488](NB100-683AF488)購(gòu)于Novus Biologicals公司；兔多克隆抗體抗α平滑肌肌動(dòng)蛋白(αSMA，ab5694)、兔多克隆抗體抗CD68 (ab125212)購(gòu)自Abcam公司；兔多克隆抗體抗CD163 (16646-1-AP)、兔多克隆抗體抗CD206 (18704-1-AP)、兔多克隆抗體Alb(16475-1-AP)以及甘油醛-3-磷酸脫氫酶抗體(GAPDH, 6000-4-1-1)均購(gòu)自Proteintech公司。qRT-PCR試劑購(gòu)自Toyobo公司。

1.2 大鼠原代BMDM分離 參考Davis等[6]的方法，雄性SPF級(jí)Wistar大鼠，體質(zhì)量180～200 g，乙醚麻醉下脫頸處死，75%酒精浸泡消毒30 mim，無(wú)菌環(huán)境分離大鼠脛骨，高糖培養(yǎng)基沖洗骨髓腔，收集混合液，離心，棄上清。加入10 mL 1×紅細(xì)胞裂解液吹打混勻，靜置3 min，同體積高糖培養(yǎng)基吹打混勻，離心，棄上清。加入10 mL 1640細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，40 μm細(xì)胞過(guò)濾篩過(guò)濾細(xì)胞懸液后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/mL，即可獲得原代BMDM[7]。

1.3 原代BMDM極化 參考Pineda-Torra等[8]的方法。M1極化：在37 ℃、5%CO2培養(yǎng)條件下，采用10%FBS+50 ng/mL GM-CSF+1640培養(yǎng)基培養(yǎng)原代BMDM，72 h換液，第6天加入5 ng/mL LPS培養(yǎng)12 h，第7天即可獲得成熟的M1-BMDM。M2極化：在37 ℃、5%CO2培養(yǎng)條件下，采用10% FBS+20% L929細(xì)胞培養(yǎng)上清+1640培養(yǎng)基培養(yǎng)原代BMDM，72 h換液，第7 d即可獲得成熟的M2-BMDM。

1.4 M1-BMDM和M2-BMDM的免疫熒光鑒定 多聚甲醛固定細(xì)胞過(guò)夜，0.5% Triton X-100孵育透膜。加入一抗(M1-BMDM：CD11b/c 1∶150，CD68 1∶500；M2-BMDM：CD206 1∶500，CD163 1∶50)37 ℃避光孵育1 h，PBS清洗。免疫熒光標(biāo)記二抗室溫下避光孵育1 h，PBS清洗。DAPI染核，PBS清洗，封片，Olympus FV10i激光共聚焦顯微鏡獲取圖像。

1.5 M1-BMDM和M2-BMDM流式細(xì)胞鑒定 參考Mily等[9]的方法。使用FACS流式細(xì)胞檢測(cè)術(shù)檢測(cè)M1-BMDM和M2-BMDM純度，使用細(xì)胞刮板將極化后的細(xì)胞收集至1.5 mL離心管中，1500 r/min離心5 min，加入1 mL的1% FBS/PBS混合液(洗滌液)重懸細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色后計(jì)數(shù)，每管加入1×106個(gè)細(xì)胞、0.5 μL純化的小鼠抗大鼠CD32封閉Fc段，4 ℃冰箱孵育15 min后加入1 mL洗滌液，1500 r/min離心5 min，棄上清；每管加入29.5 μL洗滌液后分別加入0.5 μL PE抗大鼠CD45、0.5 μL FITC抗大鼠CD11b/c、5 μL CD68-PE-Vio770(TM)rat、1 μL CD206(15-2)，吹打混勻，4 ℃避光靜置30 min；CD68與CD206同型對(duì)照樣本分別加入5 μL PE-Vio 770 130-113-452、1 μL正常小鼠IgG1 Alexa Fluor?647，4 ℃避光靜置30 min。BECKMAN DxFLEX流式細(xì)胞儀檢測(cè)樣本，F(xiàn)low Jo軟件分析檢測(cè)結(jié)果。

1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性Wistar大鼠24只，SPF級(jí)，體質(zhì)量160～180 g，購(gòu)自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，生產(chǎn)許可證編號(hào)SCXK(滬)2018-0006，上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)，使用許可證編號(hào)SYXK(滬)2014-0008。

1.7 模型制備與分組干預(yù) 大鼠隨機(jī)分為正常組(N,n=6)和模型組(n=18)。模型組以30% CCl4-橄欖油溶液2 mL/kg皮下注射，2次/周，共9周。于第7周開(kāi)始，模型大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組(M，n=6)，M1-BMDM組(n=6)，M2-BMDM組(n=6)，各組大鼠在繼續(xù)CCl4造模的同時(shí)，M1-BMDM組和M2-BMDM組予以相應(yīng)巨噬細(xì)胞尾靜脈注射，每只細(xì)胞注射量為1×106/mL[7]；N組和M組予以等體積生理鹽水尾靜脈注射。第9周末取材。

1.8 血清生化學(xué)檢測(cè) 血清ALT、AST由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心檢測(cè)。

1.9 肝組織Hyp含量測(cè)定 使用堿水解法測(cè)定肝組織羥脯氨酸(Hyp)含量，稱取50 mg肝組織后水解，檢測(cè)步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作[10]。

1.10 肝組織病理和免疫組織化學(xué) 石蠟固定組織切片厚4 μm，采用HE、天狼猩紅染色。并采用圖像分析軟件Leica LAS Image Analysis對(duì)天狼猩紅陽(yáng)性染色面積進(jìn)行分析。陽(yáng)性染色面積百分比=陽(yáng)性染色面積/圖片總面積×100%。免疫組織化學(xué)方法參考文獻(xiàn)[11]。組織切片脫蠟至水，采用αSMA(1∶1000)、CD68(1∶500)、CD163(1∶1000) 等一抗孵育1 h，HRP標(biāo)記的二抗(1∶1000) 孵育30 min，洗滌，DAB顯色，蘇木精-伊紅(HE)染色，Leica SCN 400掃描儀掃描。

1.11 實(shí)時(shí)熒光定量PCR (qPCR) αSMA、TGFβ、TNFα、IL-4、IL-6、IL-10、Col1a1、Col4、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)2、MMP9、MMP13、TIMP-1 mRNA表達(dá)采用qPCR方法檢測(cè)。總RNA提取采用RNA純化試劑盒(Toyobo公司)，mRNA表達(dá)檢測(cè)采用SYBR Green real-time PCR Master Mix (SYBR) (Toyobo公司)，以及ViiATM7 real-time PCR System。引物由Takara公司設(shè)計(jì)合成。SYBR一步法RT-PCR反應(yīng)條件如下：42 ℃15 min、95 ℃ 2 min、95 ℃變性15 s，40個(gè)循環(huán)，60 ℃延伸退火1 min。

1.12 免疫印跡 肝組織采用RIPA 緩沖液裂解，4 ℃12 000 r/min離心10 min，測(cè)定上清液蛋白濃度，10%或12%凝膠電泳，轉(zhuǎn)移至Hybond-ECL硝酸纖維膜，封閉，一抗4 ℃孵育過(guò)夜，αSMA(1∶1000)、CD68(1∶500)、CD163(1∶1000)、Alb(1∶500)、GAPDH(1∶5000)；二抗(1∶10 000)室溫下孵育1 h，ECL顯影，自動(dòng)掃描儀讀取每一條帶的灰度積分值。

1.2 倫理學(xué)審查 本研究經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批號(hào)：PZSHUTCM190823003。

2 結(jié)果

2.1 成功分離大鼠原代BMDM并誘導(dǎo)分化為M1和M2表型 培養(yǎng)至第7天時(shí)M1-BMDM和M2-BMDM均呈不規(guī)則形態(tài)特征。免疫熒光染色顯示，M1-BMDM高表達(dá)CD11b/c和CD68(圖1a、b)，M2-BMDM高表達(dá)CD163和CD206(圖1c、d)。流式細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示M1-BMDM為CD45+(98.6%)、CD68+(88.6%)、CD11b/c+(97.7%)(圖1e)；M2-BMDM為CD206+(98.9%)(圖1f)。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，M1-BMDM CD68 mRNA水平顯著上調(diào)(P<0.01)，M2-BMDM CD206 mRNA水平顯著上調(diào)(P<0.01)(圖1g)。

2.2 M1-BMDM和M2-BMDM均可抑制肝臟炎癥反應(yīng)和肝纖維化進(jìn)展 HE染色顯示，M組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞廣泛脂肪變性，匯管區(qū)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；與M組比較，M1-BMDM和M2-BMDM組肝細(xì)胞脂肪變性及炎癥反應(yīng)明顯減輕(圖2a)。血清生化學(xué)檢測(cè)顯示，與N組比較，M組ALT、AST活性顯著升高[分別為(1433.6±310.77) U/L vs (16.6±1.5)U/L, (2311.8±246.20) U/L vs (60.6±12.1)U/L,P值均<0.01]，與M組比較，M1-BMDM和M2-BMDM組ALT [分別為(649.29±396.28)U/L、(894.17±348.27) U/L]、AST [分別為(1109.86±695.21) U/L、(1335.83±425.75) U/L]均顯著降低(P值均<0.01)(圖2c)。

天狼猩紅膠原染色顯示，M組大鼠匯管區(qū)可見(jiàn)大量膠原沉積，部分膠原纖維伸入肝實(shí)質(zhì)，形成完整的假小葉結(jié)構(gòu)。與M組比較，M1-BMDM和M2-BMDM組肝臟膠原沉積明顯減輕(圖2b)。與N組比較，M組肝組織Hyp含量顯著增加[(311.26±61.44) μg/g vs (177.32±10.72) μg/g,P<0.01]；與M組比較，M1-BMDM和M2-BMDM組Hyp含量均顯著降低[分別為(225.08±47.86) μg/g vs (311.26±61.44) μg/g,P<0.05; (211.42±50.51) μg/g vs (311.26±61.44) μg/g,P<0.01](圖2c)。與Hyp相吻合，膠原半定量分析顯示，M組膠原染色陽(yáng)性染色面積顯著增加(5.00±2.20 vs 1.16±0.20,P<0.01)，與M組比較，M1-BMDM和M2-BMDM組肝臟膠原染色陽(yáng)性面積顯著減少(2.38±0.70 vs 5.00±2.20, 2.27±0.61 vs 5.00±2.20,P值均<0.05)(圖2e)。

2.3 M1-BMDM和M2-BMDM可顯著抑制HSC活化 免疫染色顯示，M組肝組織αSMA陽(yáng)染細(xì)胞明顯增加，與M組比較，M1-BMDM和M2-BMDM組αSMA陽(yáng)染細(xì)胞明顯減少(圖3a)。免疫印跡顯示，M組肝組織αSMA蛋白表達(dá)顯著增加(P<0.01)，與M組比較，M1-BMDM和M2-BMDM組αSMA蛋白表達(dá)均顯著降低(P值均<0.01)(圖3b、c)。qRT-PCR檢測(cè)顯示，M組αSMA、TGFβ1、Col1a1、Col4 mRNA表達(dá)均顯著增加(P值均<0.01)；與M組比較，M1-BMDM和M2-BMDM組上述指標(biāo)mRNA表達(dá)水平均顯著降低(P<0.05或P<0.01)(圖3d)。

2.4 M1-BMDM和M2-BMDM對(duì)肝臟巨噬細(xì)胞活化、膠原酶及炎癥因子表達(dá)的影響 免疫染色顯示，與N組比較，M組CD68陽(yáng)染細(xì)胞明顯增加，而CD163和CD206陽(yáng)染細(xì)胞明顯減少。與M組比較，M1-BMDM組CD68陽(yáng)染細(xì)胞改變不明顯，M2-BMDM組CD68陽(yáng)染細(xì)胞明顯減少；M1-BMDM和M2-BMDM組CD163和CD206陽(yáng)染細(xì)胞均有所增加，尤以M2-BMDM組最為顯著(圖4a～c)。

免疫印跡顯示，與N組比較，M組CD68蛋白表達(dá)顯著增加(P<0.01)，而CD163蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01)。與M組比較，M1-BMDM組CD68蛋白表達(dá)有降低趨勢(shì)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，M2-BMDM組CD68蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01)，且顯著低于M1-BMDM組(P<0.05)；M1-BMDM和M2-BMDM組CD163蛋白表達(dá)均顯著升高(P值均<0.01)，且M2-BMDM組顯著高于M1-BMDM組(P<0.05)(圖4d、e)。

MMP及其抑制劑檢測(cè)顯示，與N組比較，M組MMP2、MMP9和TIMP-1 mRNA表達(dá)均顯著升高(P值均<0.05)，而MMP13 mRNA表達(dá)水平顯著降低(P<0.01)；與M組比較，M1-BMDM和M2-BMDM組MMP2、TIMP-1 mRNA表達(dá)水平顯著降低(P值均<0.05)，而MMP13 mRNA表達(dá)水平顯著升高(均P<0.01)(圖4f)。

炎癥相關(guān)細(xì)胞因子檢測(cè)顯示，與N組比較，M組IL-4、IL-6、IL-10 mRNA表達(dá)水平顯著降低(P值均<0.05)，TNFα mRNA表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)；與M組比較，M1-BMDM和M2-BMDM組IL-6、IL-10 mRNA表達(dá)水平均顯著升高(P值均<0.01)，且M2-BMDM組顯著高于M1-BMDM組(P<0.05)； M2-BMDM組TNFα mRNA表達(dá)水平顯著高于M組和M1-BMDM組(P值均<0.01)(圖4g)。

此外，免疫印跡檢測(cè)顯示，與N組比較，M組肝組織Alb蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01)；與M組比較， M2-BMDM組Alb表達(dá)顯著升高(P<0.01)，且顯著高于M1-BMDM組(P<0.01)(圖4h、i)。

3 討論

巨噬細(xì)胞起源于單核細(xì)胞前體，具有吞噬、抗原遞呈和分泌等多種功能，在組織穩(wěn)態(tài)和宿主防御中發(fā)揮重要作用[12]。由于巨噬細(xì)胞不同表型的高度特異性，普遍認(rèn)為不同類型的巨噬細(xì)胞對(duì)肝纖維化的進(jìn)展所帶來(lái)的影響不同[5,13]。但近年來(lái)，大量研究發(fā)現(xiàn)M1巨噬細(xì)胞同樣具有良好的抗炎和抗肝纖維化作用。如Ma等[14]研究表明BMDM體外極化為M1表型后對(duì)CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型具有良好的干預(yù)作用，而M2-BMDM反而無(wú)效。本研究將BMDM極化為M1和M2表型后經(jīng)尾靜脈注入CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠體內(nèi)，結(jié)果表明兩者均可顯著改善肝功能和肝組織病理，且顯著降低肝組織Hyp含量，表明兩者均具有良好的抗實(shí)驗(yàn)性肝纖維化作用。

HSC在肝纖維化的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮主導(dǎo)作用[15]，而TGFβ1主要來(lái)源于Kupffer細(xì)胞，是促進(jìn)HSC活化和增殖的關(guān)鍵細(xì)胞因子[16]。本研究結(jié)果表明，M1-BMDM和M2-BMDM注射后均可顯著降低肝組織αSMA蛋白水平以及αSMA、TGFβ1、Col1a1和Col4 mRNA表達(dá)水平，提示兩者均可顯著抑制HSC的活化。一般認(rèn)為M1巨噬細(xì)胞主要促進(jìn)HSC的活化和肝纖維化進(jìn)展，本研究出現(xiàn)相反的結(jié)果，可能與M1-BMDM促進(jìn)內(nèi)源性巨噬細(xì)胞向纖維化部位募集，而這些內(nèi)源性巨噬細(xì)胞表現(xiàn)為L(zhǎng)y6Clow修復(fù)型巨噬細(xì)胞表型，并通過(guò)產(chǎn)生MMP促進(jìn)膠原降解有關(guān)[14]。

肝纖維化逆轉(zhuǎn)不僅需要抑制HSC的活化，還需要促進(jìn)ECM的降解，MMP家族在此過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。肝臟巨噬細(xì)胞是MMP的主要來(lái)源，特定的亞型通過(guò)分泌不同的MMP增強(qiáng)ECM降解以促進(jìn)纖維化的消褪[17]。如M2巨噬細(xì)胞主要分泌MMP-9、MMP-12、MMP-13等促進(jìn)活化的HSC凋亡以及纖維化消退[18]。本研究結(jié)果顯示，M1-BMDM和M2-BMDM注射后，均可顯著促進(jìn)肝臟CD163和CD206的蛋白表達(dá)水平，M2-BMDM還可顯著降低CD68蛋白表達(dá)，且兩者均可增加MMP9、MMP13 mRNA表達(dá)水平，顯著降低 MMP2和TIMP-1 mRNA表達(dá)水平。提示M1-BMDM和M2-BMDM均可改善肝臟炎癥環(huán)境，促進(jìn)肝臟M2巨噬細(xì)胞增殖并分泌MMP9和MMP13以促進(jìn)膠原降解。

此外，一般認(rèn)為T(mén)NFα和IL-6主要來(lái)源于M1巨噬細(xì)胞，發(fā)揮促炎作用[19]，而IL-10主要來(lái)源于M2巨噬細(xì)胞，發(fā)揮抗炎作用[20]。但TNFα和IL-6在肝損傷再生過(guò)程中也發(fā)揮關(guān)鍵作用[21]，研究表明，肝切除術(shù)后2 h左右，肝臟TNFα水平明顯上升，隨后IL-6水平顯著增加[22]，同時(shí)，IL-6基因敲除小鼠表現(xiàn)出明顯的肝再生受限[23]，提示TNFα和IL-6缺失可延緩肝臟再生[24]。這一觀點(diǎn)與本研究結(jié)果相吻合，即M1-BMDM和M2-BMDM注射后均可顯著增加IL-6、IL-10的mRNA表達(dá)水平，且兩者在M2-BMDM組顯著高于M1-BMDM組，且M2-BMDM還可顯著提高肝組織TNFα mRNA以及Alb的蛋白表達(dá)水平，提示M1-BMDM和M2-BMDM不僅能夠抑制肝臟炎癥反應(yīng)和纖維化進(jìn)展，后者還可能促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖和分化。

綜上所述，巨噬細(xì)胞在生理和病理?xiàng)l件下對(duì)肝臟穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)發(fā)揮重要作用[25-26]。M1-BMDM和M2-BMDM對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝纖維化均具有良好的干預(yù)效應(yīng)，兩者均可抑制肝臟炎癥反應(yīng)和HSC活化，促進(jìn)抗炎M2巨噬細(xì)胞活化。此外，M2-BMDM可能還可抑制促炎M1巨噬細(xì)胞活化及促進(jìn)肝再生，因此其綜合干預(yù)效果更佳。本研究尚處于初期階段，M1-BMDM和M2-BMDM注射后在體內(nèi)的分布過(guò)程尚不清楚，其治療肝纖維化的內(nèi)在機(jī)制仍有待深入研究；此外，雖然相對(duì)于模型組來(lái)說(shuō)，M1-BMDM和M2-BMDM均具有良好的抗肝纖維化作用，但兩者是否優(yōu)于M0，尚有待今后實(shí)驗(yàn)予以完善。此外，M1和M2巨噬細(xì)胞只是巨噬細(xì)胞活化的兩種極端狀態(tài)，且M2巨噬細(xì)胞可分為3 個(gè)亞群：M2a、M2b和M2c，不同亞型的功能也有差異[27]。還有學(xué)者認(rèn)為肝纖維化恢復(fù)期的Ly6C+單核細(xì)胞具有與M1/M2 不同的表型[28]。因此，目前對(duì)于肝臟巨噬細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換的潛在機(jī)制還缺乏充分的認(rèn)識(shí)，未來(lái)需要對(duì)肝巨噬細(xì)胞的基因組和表型進(jìn)行深入的研究，為肝纖維化的臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

利益沖突聲明：本研究不存在研究者、倫理委員會(huì)成員、受試者監(jiān)護(hù)人以及與公開(kāi)研究成果有關(guān)的利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：慕永平、劉平等負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)；簡(jiǎn)迅、王丹陽(yáng)、陳高峰負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)實(shí)施、資料分析以及撰寫(xiě)論文；許燕楠、陳佳美、劉偉等參與收集數(shù)據(jù)，修改論文；張華負(fù)責(zé)醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)；慕永平負(fù)責(zé)擬定寫(xiě)作思路，指導(dǎo)撰寫(xiě)文章并最后定稿。