薛丹丹，任 爽，方乾坤，馬駿龍，王成彬

糞便檢查是臨床最基礎(chǔ)的檢驗(yàn)項(xiàng)目之一，是許多消化系統(tǒng)疾病及其他系統(tǒng)疾病的重要參考指標(biāo)。隨著檢驗(yàn)科自動(dòng)化程度的不斷推進(jìn)，全自動(dòng)糞便分析儀逐步在越來(lái)越多實(shí)驗(yàn)室投入使用。同手工檢查相比，糞便分析儀具有污染性小，生物安全風(fēng)險(xiǎn)低，自動(dòng)檢測(cè)視野多，不易因人為因素造成漏診等特點(diǎn)。傳統(tǒng)糞便檢查主要包含理學(xué)檢查、潛血實(shí)驗(yàn)、有形成分鏡檢三部分，關(guān)于這幾項(xiàng)內(nèi)容的儀器性能評(píng)價(jià)在近年來(lái)研究較多[1-3]。隨著臨床需求的提高，糞便檢查的內(nèi)容也逐漸豐富起來(lái)。糞便隱血實(shí)驗(yàn)是通過(guò)化學(xué)法或免疫法檢測(cè)糞便中微量的血紅蛋白，是用于消化道出血及結(jié)直腸腫瘤的一種無(wú)創(chuàng)檢查方法，尤其是在結(jié)直腸癌的早期篩查中具有重要意義。糞便抗原試驗(yàn)(stool antigen test, SAT)檢測(cè)糞便HP抗原可判斷受試者是否有HP現(xiàn)癥感染，此方法具有良好的敏感性和特異性[4]。本研究選取臨床應(yīng)用較多的沃文特FA280、科域KU-F20、愛(ài)威AVE-562三臺(tái)不同品牌型號(hào)糞便分析儀，對(duì)糞便OB和HP兩指標(biāo)同人工法檢測(cè)進(jìn)行比對(duì)評(píng)價(jià)，通過(guò)對(duì)其靈敏度、特異度、符合率等指標(biāo)評(píng)價(jià)分析其一致性，以為臨床應(yīng)用提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心2020-06至2020-09的住院患者糞便標(biāo)本1851例，其中男954例，女897例，年齡21～69歲，平均(43.6±7.5)歲。

1.2 儀器與試劑 使用KU-F20糞便分析儀(科域，珠?？朴蛏锕こ逃邢薰?，AVE-562糞便分析儀(愛(ài)威，長(zhǎng)沙愛(ài)威科技股份有限公司)，F(xiàn)A280糞便分析儀(沃文特，四川沃文特生物技術(shù)有限公司)。各分析儀針對(duì)不同檢測(cè)項(xiàng)目采用各自相應(yīng)的檢測(cè)試劑。(1)OB檢測(cè):科域自產(chǎn)檢測(cè)試劑，檢測(cè)范圍0.1～2.0 mg/ml；愛(ài)威自產(chǎn)檢測(cè)試劑，檢測(cè)范圍0.2～2.0 mg/ml；沃文特自產(chǎn)檢測(cè)試劑，檢測(cè)范圍0.2～2.0 mg/ml；人工法檢測(cè)試劑來(lái)自萬(wàn)華普曼生物工程，檢測(cè)范圍0.2～2.0 mg/ml。(2)HP檢測(cè)：科域HP檢測(cè)試劑由珠海銀科醫(yī)學(xué)工程股份有限公司提供，檢測(cè)限為>0.15 mg/ml；愛(ài)威HP檢測(cè)試劑由杭州安旭生物提供，檢測(cè)限為>4 ng/ml；沃文特HP檢測(cè)試劑由廈門(mén)波生生物提供，檢測(cè)限為>64 ng/ml；人工法HP來(lái)自西班牙CERTEST BIOTEC S.L.，檢測(cè)限為>10 ng/ml。

1.3 方法 為提高標(biāo)本陽(yáng)性率，本次實(shí)驗(yàn)主要選擇消化系統(tǒng)疾病及腫瘤患者標(biāo)本，使用一次性潔凈采便器收集患者新鮮糞便標(biāo)本，在2 h內(nèi)完成送檢。收到標(biāo)本后立即將入組標(biāo)本分為2份，1份用于人工檢測(cè)，1份用于糞便分析儀檢測(cè)，2份標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。人工檢測(cè)由從事臨檢工作5年以上的技術(shù)人員，嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第四版)以及試劑操作說(shuō)明書(shū)完成，結(jié)果判讀由檢測(cè)人員肉眼識(shí)別進(jìn)行判讀。儀器檢測(cè)按照各廠家操作規(guī)程完成，結(jié)果判讀由儀器自動(dòng)完成。以上檢測(cè)方法均采用膠體金免疫層析法。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Graphpad Prism 7.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，儀器法和人工法檢測(cè)結(jié)果差異采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。一致性采用Kappa檢驗(yàn)，判讀標(biāo)準(zhǔn)[5]：Kappa系數(shù)0.01～0.20判定為一致性微弱,0.21～0.40為較弱,0.41～0.60為適中，0.61～0.80為顯著，0.81～0.99為最佳。分別計(jì)算三臺(tái)儀器的靈敏度、特異度、符合率、Youden指數(shù)及陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值進(jìn)行比較。靈敏度=真陽(yáng)性個(gè)數(shù)/(真陽(yáng)性個(gè)數(shù)+假陰性個(gè)數(shù))，特異度=真陰性個(gè)數(shù)/(真陰性個(gè)數(shù)+假陽(yáng)性個(gè)數(shù))，Youden指數(shù)=靈敏度+特異度-1，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性個(gè)數(shù)/(真陽(yáng)性個(gè)數(shù)+假陽(yáng)性個(gè)數(shù))，陰性預(yù)測(cè)值=真陰性個(gè)數(shù)/(真陰性個(gè)數(shù)+假陰性個(gè)數(shù))。

2 結(jié) 果

2.1 人工法和儀器法檢測(cè)糞便OB結(jié)果對(duì)比 檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1、表2。KU-F20儀器P=0.424，Kappa=0.73，AVE-562儀器P=0.099，Kappa=0.71，F(xiàn)A280儀器P<0.01，Kappa=0.71。

表1 三種儀器和人工法檢測(cè)糞便OB

表2 儀器法同人工法檢測(cè)糞便OB診斷效能比較

2.2 人工法和儀器法檢測(cè)糞便HP 檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3、表4。KU-F20儀器P=0.689，Kappa=0.48，AVE-562儀器P<0.01，Kappa=0.73，F(xiàn)A280儀器P=0.56，Kappa=0.56。

表3 三種儀器和人工法檢測(cè)糞便Hp抗原

表4 儀器法同人工法檢測(cè)糞便Hp診斷效能比較

3 討 論

“三大常規(guī)”之一的糞便常規(guī)是臨床最基礎(chǔ)檢驗(yàn)項(xiàng)目之一，其對(duì)腸道感染、消化道出血、腫瘤轉(zhuǎn)移及抗凝劑用藥監(jiān)測(cè)等提供重要診療依據(jù)。但由于糞便標(biāo)本具有特殊難聞氣味，很多檢測(cè)人員在檢測(cè)過(guò)程中承受較大心理負(fù)擔(dān)，糞便檢測(cè)不被重視，加之臨床標(biāo)本量大，單個(gè)標(biāo)本檢測(cè)時(shí)間短，細(xì)胞、寄生蟲(chóng)等有形成分檢出率不高，容易造成漏診。另外，傳統(tǒng)糞便檢查為純手工檢測(cè)，在標(biāo)本挑取、涂片制片以及顯微鏡鏡檢過(guò)程中，不同檢驗(yàn)人員易造成人員誤差，很難實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化。新型冠狀病毒爆發(fā)以來(lái)，糞便檢查帶來(lái)的污染性及病毒傳播等生物安全問(wèn)題再次引起實(shí)驗(yàn)室的高度重視[6]。隨著檢驗(yàn)科室自動(dòng)化程度的不斷推進(jìn)，糞便分析儀也被越來(lái)越多的檢驗(yàn)科室引入。糞便分析儀在密閉儀器內(nèi)，無(wú)需完全打開(kāi)標(biāo)本蓋，可自動(dòng)加入適量稀釋液，充分混勻，自動(dòng)吸樣，顯微鏡自動(dòng)鏡檢采圖，然后根據(jù)AI技術(shù)對(duì)圖像進(jìn)行識(shí)別分類(lèi)，檢驗(yàn)人員只需要通過(guò)電腦屏幕對(duì)圖片進(jìn)行人工審核。儀器的使用，有效提高了工作效率及有形成分的檢出率，降低了生物安全風(fēng)險(xiǎn)，也減輕了檢測(cè)人員的心理負(fù)擔(dān)。近年來(lái)，關(guān)于糞便分析儀的性能評(píng)價(jià)，多集中在紅、白細(xì)胞、寄生蟲(chóng)等有形成分方面，關(guān)于免疫法潛血和幽門(mén)螺旋桿菌抗原檢測(cè)的評(píng)價(jià)則較少。本研究選取的科域KU-F20、愛(ài)威AVE-562和沃文特FA280糞便分析儀及萬(wàn)華普曼的人工法OB檢測(cè)試劑均為目前臨床應(yīng)用較多的品牌型號(hào)。

結(jié)直腸癌是臨床上常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率居全球惡性腫瘤第3位，我國(guó)第5位[7]。研究表明，40歲以后每增加10歲,患結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)將增加1倍以上[8]，糞便隱血檢查簡(jiǎn)單、無(wú)創(chuàng)、經(jīng)濟(jì)、靈敏，是結(jié)直腸癌的理想篩查項(xiàng)目之一，每年或每?jī)赡赀M(jìn)行糞便OB篩查，可以有效降低結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率[9]。李澤泳等[10]應(yīng)用糞便隱血試驗(yàn)和腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè),可顯著提高結(jié)直腸癌的檢出率,利于早期診斷、治療。KU-F20、AVE-562和FA280檢測(cè)OB同人工法比較，Kappa值分別為0.73、0.71、0.71，一致性顯著,KU-F20一致性稍好于另外兩臺(tái)儀器，可能和其OB試劑檢測(cè)下限為100 ng/ml，而其余品牌試劑均為200 ng/ml有關(guān)?？蒂坏萚11]研究發(fā)現(xiàn)將免疫法便潛血閾值設(shè)為100 ng/ml用于伺機(jī)性篩查進(jìn)展性腺瘤和結(jié)直腸癌，具有較高的敏感性和特異性。FA280與人工法相比，配對(duì)χ2檢驗(yàn)P<0.01,是因?yàn)镸cNemar檢驗(yàn)只考慮了檢驗(yàn)結(jié)果不一致的兩種情況，即2和22，而沒(méi)有考慮檢測(cè)的總數(shù)量和結(jié)果一致的兩種情況數(shù)量，對(duì)于這兩者較大時(shí)，得到P<0.01屬于小概率事件，此時(shí)應(yīng)該用一致性檢驗(yàn)進(jìn)行分析[12]。本研究Kappa值相對(duì)于之前一些評(píng)價(jià)性研究偏低[13]，可能與入組標(biāo)本構(gòu)成不同相關(guān)。前面研究大多對(duì)標(biāo)本無(wú)篩選，陽(yáng)性標(biāo)本占標(biāo)本總數(shù)15%，而本研究為了更有針對(duì)性，對(duì)人工檢測(cè)后標(biāo)本進(jìn)行了篩選，所以陽(yáng)性標(biāo)本比例偏大。

HP是一種革蘭陰性微需氧桿菌,除可引起消化系統(tǒng)炎性反應(yīng)、潰瘍、腫瘤外，還可導(dǎo)致血液系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等其他系統(tǒng)疾病[14],最新的薈萃分析發(fā)現(xiàn),全球HP平均感染率為44.3%,其中發(fā)達(dá)國(guó)家為34.7%,發(fā)展中國(guó)家為50.8%[15]。目前HP感染診斷分為侵入性和非侵入性方法，侵入性方法包括內(nèi)鏡檢查、快速尿素酶試驗(yàn)、細(xì)菌培養(yǎng)等。非侵入性方法主要包括尿素呼氣試驗(yàn)、糞便抗原檢測(cè)、血清抗體檢測(cè)等。糞便抗原檢測(cè)作為非侵入性檢查方法之一，具有安全、無(wú)創(chuàng)、廉價(jià)、易實(shí)施的優(yōu)點(diǎn)，尤其適用于兒童HP感染檢測(cè)[16]。趙含信等[17]應(yīng)用14C-尿素呼氣試驗(yàn)、糞便HP抗原以及血清Hp抗體檢測(cè)三種方法對(duì)282名兒童進(jìn)行Hp檢查，三種方法陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，糞便HP抗原膠體金試驗(yàn)可以取代14C-尿素呼氣試驗(yàn)用于兒童Hp感染檢測(cè)，同時(shí)與血清抗體聯(lián)合檢測(cè)不僅有助于診斷HP感染，同時(shí)也能監(jiān)測(cè)藥物療效和了解疾病的感染階段。三臺(tái)儀器檢測(cè)HP同人工法比較，AVE-562的Kappa值為0.73，一致性顯著，F(xiàn)A280和KU-F20的Kappa值分別為0.56、0.48一致性適中?？赡苓@與AVE-562檢測(cè)限為>4 ng/ml，F(xiàn)A280檢測(cè)限為>64 ng/ml，人工法為>10 ng/ml，而KU-F20檢測(cè)限較高>150 ng/ml有關(guān)。

綜上所述，KU-F20、AVE-562、FA280檢測(cè)糞便OB同人工法相比一致性顯著，AVE-562檢測(cè)糞便HP抗原同人工法相比一致性顯著。實(shí)驗(yàn)室由人工法更換為儀器法時(shí)，需要考慮到不同品牌試劑檢測(cè)限差異而對(duì)判讀做出調(diào)整。