余文杰, 楊明月, 華成煥, 彭 娜 *, 劉 義

(1. 武漢科技大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院,湖北 武漢 430081; 2. 天津工業(yè)大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院,天津 300387)

光動(dòng)力療法(PDT)是一種利用光敏劑(PSs)在特定波長的激發(fā)光下產(chǎn)生具有細(xì)胞毒性的活性氧(ROS),從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和組織損傷的抗腫瘤治療方法[1]。因此,可以通過調(diào)節(jié)光照條件(例如光照時(shí)間和光照強(qiáng)度)來精確調(diào)控光動(dòng)力治療的效果[2]。然而,ROS的半衰期很短(<40 ns),只能作用于其產(chǎn)生的位點(diǎn)附近(<20 nm),這一范圍遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于細(xì)胞尺寸[3],故許多研究者致力于設(shè)計(jì)、制備多功能納米載體,將各類PSs遞送至腫瘤組織后,進(jìn)一步將其遞送到相關(guān)細(xì)胞器(線粒體、溶酶體等),以達(dá)到在細(xì)胞器附近原位生成ROS的目的,從而提高PDT治療效果[4-6]。

線粒體作為細(xì)胞的動(dòng)力工廠,在細(xì)胞新陳代謝中起著至關(guān)重要的作用,線粒體的損傷將導(dǎo)致一系列細(xì)胞功能異常。由于線粒體可以調(diào)節(jié)細(xì)胞程序性死亡而不會(huì)引起任何不良的炎癥反應(yīng),是提高PDT治療效果的優(yōu)良細(xì)胞器靶標(biāo)[7-9]。帶離域正電荷的親脂性三苯基膦(TPP)可以選擇性地結(jié)合到帶負(fù)電的線粒體膜上,主要因?yàn)槠浠瘜W(xué)結(jié)構(gòu)中的3個(gè)苯基使其具有很強(qiáng)的親脂性,同時(shí),磷原子上的正電荷可以離域到3個(gè)苯環(huán)上形成離域正電荷,使TPP易于滲透磷脂雙分子層,從而將TPP修飾過的納米粒子富集于線粒體[10-14]。Mou等[15]合成了一種新型的綠色二氧化鈦(G-TiO2-x),其近紅外光(920 nm)吸收強(qiáng)于黑色二氧化鈦(B-TiO2-x),為了降低激光功率密度和副作用,提高光動(dòng)力治療效果,將TPP配體修飾到G-TiO2-x上,得到的納米粒子用于靶向線粒體的PDT和光熱的聯(lián)合治療,該納米粒子在體外和體內(nèi)都表現(xiàn)出優(yōu)異的治療效果。

此外,在用于遞送PSs的多功能納米載體中,具有多孔晶體結(jié)構(gòu)的金屬有機(jī)骨架(MOF)因其具有較高的比表面積和易于調(diào)節(jié)的孔徑優(yōu)勢,受到廣泛關(guān)注[16]。特別是基于Zr(Ⅳ)的卟啉金屬有機(jī)框架納米粒子PCN-224,不僅可以作為載藥的納米載體[17],而且本身也是一種具有很強(qiáng)滲透力的PSs[18]。

本研究合成含TPP的兩親性聚合物,通過兩親性聚合物的自組裝,將光敏劑PCN-224包封進(jìn)膠束中,得到具有靶向線粒體功能的納米粒子(Scheme 1)。并通過核磁共振譜(1H NMR)、傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)、透射電子顯微鏡(TEM)、動(dòng)態(tài)光散射(DLS)、紫外-可見吸收光譜(UV-Vis)、熒光光譜(FL)、電感耦合等離子體發(fā)射光譜(ICP-OES)等,表征了合成的納米粒子的理化性質(zhì);通過熒光探針2′,7′-二氯熒光素二乙酸酯(DCFH-DA),表征了合成的納米粒子產(chǎn)生ROS的能力;通過共聚焦顯微鏡(CLSM),觀察納米粒子在細(xì)胞內(nèi)部的分布情況;通過細(xì)胞毒性(MTT)測試,檢測納米粒子對小鼠乳腺癌細(xì)胞的毒性。結(jié)果證明將光敏劑包封進(jìn)膠束后,其產(chǎn)生ROS的能力明顯高于卟啉配體,且含TPP的膠束成功將光敏劑PCN-224富集于線粒體,對癌細(xì)胞的毒性大于單純的光敏劑PCN-224,為后續(xù)抗腫瘤的研究奠定了理論基礎(chǔ)。

Scheme 1

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

UV-2450型紫外/可見分光光度計(jì);Agilent Varian 600 MHz型核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo));Bruker TENSOR27型紅外光譜儀;JEM-2100UHR型透射電子顯微鏡;Malvern Instruments Nano-ZS ZEN3600型粒度儀;Shimadzu RF-6000型分光光度計(jì);Agilent 730型電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀。

半胱胺鹽酸鹽、三氟乙酸乙酯、3-巰基丙酸甲酯,阿拉丁工業(yè)有限公司;5,10,15,20-四(4-羧基苯基)卟啉(TCPP)、苯甲酸(BA),梯希愛(上海)化成工業(yè)發(fā)展有限公司;聚乙二醇2000(PEG2000)、 ZrOCl28H2O, Sigma-Aldrich; 2′,7′-二氯二氫熒光素二乙酸酯(DCFH-DA),上海畢得醫(yī)藥科技股份有限公司;RPMI 1640培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)、青霉素-鏈霉素、磷酸鹽緩沖液(PBS),卡爾斯巴德;活性氧檢測試劑盒、Mito-Tracker Red CMXRos(線粒體紅色熒光探針)、Hoechst 33342染色液,碧云天生物科技有限公司;其余所用試劑均為分析純或化學(xué)純。

1.2 合成

(1) 兩親性聚合物的合成

兩端具有不飽和鍵的硫代硫縮酮分子(TK)的合成：將10 g半光胺鹽酸鹽和24 mL三乙胺溶解在250 mL甲醇中,將溶液置于冰浴中,加入10 mL三氟乙酸乙酯攪拌3 h后,室溫繼續(xù)反應(yīng)12 h,經(jīng)萃取、洗滌后,經(jīng)硅膠柱層析純化得中間產(chǎn)物2-巰基三氟乙酰胺。將5.7 g 2-巰基三氟乙酰胺,4.4 g的3-巰基丙酸甲酯和2 g的丙酮溶于50 mL乙腈中,冰浴冷卻,加入13 mL的三氟化硼乙醚，繼續(xù)反應(yīng)2 h。反應(yīng)結(jié)束后,經(jīng)萃取、洗滌后利用柱層析分離得到產(chǎn)物,加入6 mol/L氫氧化鈉溶液使三氟乙酸酯基團(tuán)脫保護(hù),得到TK-NH2。將0.64 g的TK-NH2溶于15 mL二氯甲烷中,置于冰浴中,分別加入2.3 mL三乙胺和1.1 mL丙烯酰氯,反應(yīng)5 h后,室溫繼續(xù)反應(yīng)19 h,經(jīng)萃取、干燥得兩端具有不飽和鍵的硫代硫縮酮分子(TK)。

將0.262 g的三苯基膦溶于20 mL無水乙腈中,升溫至100 ℃,在氮?dú)獗Ｗo(hù)下,緩慢滴加5 mL溶解有0.195 g 6-溴己酸的乙腈,滴畢,氮?dú)獗Ｗo(hù)下繼續(xù)反應(yīng)16 h得TPP-COOH。將8.0 g的PEG2000溶于10 mL無水二氯甲烷中,置于冰浴中,氮?dú)獗Ｗo(hù)下,加入2 mL甲基磺酰氯和2 mL三乙胺后,室溫反應(yīng)24 h,經(jīng)過濾、濃縮后,加入大量乙醚沉淀,減壓抽濾后,得到淡黃色固體,干燥后加入100 mL 體積分?jǐn)?shù)為25%的氨水,室溫反應(yīng)4 d,敞口放置3 d,用NaOH調(diào)節(jié)溶液pH至13,經(jīng)萃取、干燥后,用乙醚沉淀,減壓抽濾得到固體粗產(chǎn)物,重復(fù)二氯甲烷溶解、乙醚沉淀、過濾操作兩遍,所得固體充分干燥后即為NH2-PEG-NH2。將2.265 g的TPP-COOH溶于40 mL無水二氯甲烷中,加入0.576 g 4-二甲氨基吡啶(DMAP)和1.008 gN,N′-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC),攪拌1 h,加入30 mL溶解有11.988 g NH2-PEG-NH2的無水二氯甲烷,室溫反應(yīng)12 h,經(jīng)濃縮、乙醚沉淀后得NH2-PEG-TPP。

將TK、 NH2-PEG-TPP、 1H-咪唑-2-胺混合于雙頸燒瓶中,在氮?dú)獗Ｗo(hù)下,于120 ℃下反應(yīng)10 h。粗品溶于適量二甲亞砜(DMSO)中,透析、冷凍干燥備用。

(2) PCN-224的合成

將100 mg TCPP、 300 mg ZrOCl2·8H2O和2.8 g BA依次溶于裝有100 mLN,N-二甲基甲酰胺(DMF)的250 mL圓底燒瓶中,攪拌至固體溶解后,在溫度為90 ℃、轉(zhuǎn)速為300 r/min條件下,恒溫反應(yīng)5 h。懸濁液通過離心分離得到的固體粒子依次用DMF和蒸餾水洗滌3次,避光保存。

(3) 膠束@PCN-224的制備

將1 mg PCN-224分散到5 mL蒸餾水中,向其中加入1 mL溶解有10 mg兩親性聚合物的DMSO,室溫?cái)嚢?2 h后,轉(zhuǎn)移到透析袋(3500)中透析48 h。透析結(jié)束后將透析液冷凍干燥備用。

1.3 性能或活性測試

(1) PCN-224穩(wěn)定性測試

將PCN-224分散于水溶液中,利用動(dòng)態(tài)光散射(DLS)測試其粒徑、電位,測試之后,將其放置1 d后繼續(xù)進(jìn)行DLS測試,該步驟一共重復(fù)7次,從而得到PCN-224在蒸餾水中的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。

(2) 利用DCFH-DA檢測ROS

取0.5 mg的TCPP分散到10 mL的磷酸緩沖溶液(10 mmol/L, pH=7.4, PBS)中配成50 μg/mL的樣品,取一定質(zhì)量的PCN-224、膠束@PCN-224分散到PBS中配制含PCN-224質(zhì)量濃度為50 μg/mL的樣品,隨后,在相同體積的樣品溶液中分別加入相同含量的DCFH-DA(10 μM)活化后的2′,7′-二氯二氫熒光素(DCFH)溶液,DCFH被ROS氧化為2′,7′-二氯熒光素(DCF)后具有熒光,在660 nm激發(fā)光(1.5 W/cm2)照射下光照2 min后,立即測得其熒光光譜,PBS作為空白對照。

(3) 細(xì)胞攝取及細(xì)胞內(nèi)ROS檢測

將小鼠乳腺癌細(xì)胞(4T1)在小皿中孵育24 h,然后與PCN-224、膠束@PCN-224(光敏劑PCN-224質(zhì)量濃度均為15.0 μg/mL)共孵育24 h,隨后,移除培養(yǎng)基,并將細(xì)胞用PBS溶液洗滌3次,加入含有10 μM DCFH-DA的無血清培養(yǎng)基孵育15 min后,用新鮮培養(yǎng)基洗滌3次,以去除多余的DCFH-DA染色液,在660 nm(20 mW/cm2)激光下光照一段時(shí)間,隨后用PBS洗滌3次,再加入含有200 nmol/L Mito-Tracker Red CMXRos的無血清培養(yǎng)基孵育20 min,以標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)線粒體,隨后用PBS溶液洗滌細(xì)胞3次后,加入含有10 μg/mL的Hoechst 33342染色液孵育20 min,以標(biāo)記細(xì)胞核,用PBS洗滌數(shù)次除去多余的染色液,用共聚焦顯微鏡掃描拍照。

(4) 細(xì)胞毒性測試

將4T1細(xì)胞以10000個(gè)/孔的數(shù)量接種到96孔板中,孵育24 h后,移除培養(yǎng)基,往各孔中加入100 μL含有不同質(zhì)量濃度的PCN-224的納米粒子的培養(yǎng)基,孵育24 h后,移除培養(yǎng)基,重新加入新鮮培養(yǎng)基,用20 mW/cm2的排燈照射30 min后放入培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育24 h,隨后往各孔中加入20 μL 3-(4,5)-二甲基噻唑-2-甲基-2,5-二苯基溴化四氮唑(MTT, 5 mg/mL),繼續(xù)孵育4 h,最后,移除培養(yǎng)基,往各孔中加入100 μL DMSO,用來溶解結(jié)晶的甲瓚。使用酶標(biāo)儀測量各孔的光密度(OD),并計(jì)算細(xì)胞存活率。

2 結(jié)果與討論

2.1 PCN-224的表征

(1)1H NMR

合成的兩親性聚合物的核磁譜如圖1所示。從圖1中可以看出,TK鍵的甲基特征峰a(1.54), PEG的亞甲基特征峰b(3.50),咪唑環(huán)上—CH=CH—的特征峰c(6.94～6.69),以及TPP的芳香環(huán)特征峰d(7.94～7.73),由此證明兩親性聚合物已成功合成。

δ圖1 兩親性聚合物的1H NMR譜圖

(2) 粒徑分析,TEM和IR

通過溶劑熱法,合成了光敏劑PCN-224, PCN-224框架由Zr6簇和配體TCPP組成,其中,Zr具有高穩(wěn)定性,配體TCPP具有對稱的分子結(jié)構(gòu),其四個(gè)羧基與Zr—O鍵進(jìn)行酯化反應(yīng)后形成Zr—O—C,將進(jìn)一步提高PCN-224的穩(wěn)定性和產(chǎn)生ROS效果。

通過DLS測得的結(jié)果來證明PCN-224是否具有納米級尺寸,這將有利于后續(xù)的包封實(shí)驗(yàn)。如圖2所示,通過DLS測得PCN-224的水合粒徑約為100 nm,表明成功合成了具有納米級尺寸的PCN-224。如圖3a所示,通過TEM觀察到PCN-224的粒徑約為80 nm,且具有規(guī)則的類球形。DLS測得的粒徑大于TEM觀察的結(jié)果,這是因?yàn)椋阂环矫?TEM測試的PCN-224是干燥后的,而DLS測試的水合粒徑,在制備TEM樣品時(shí),干燥后的PCN-224會(huì)失去表面附著的水分子,導(dǎo)致粒徑變小;另一方面,與TEM在干燥狀態(tài)下測定的尺寸相比,水合粒徑的明顯增加,可能是由于PCN-224的表面疏水性,導(dǎo)致納米粒子在水溶液中的輕微聚集,從而導(dǎo)致水合粒徑的增加。如圖3b所示,對透射電鏡圖中PCN-224粒子進(jìn)行數(shù)量統(tǒng)計(jì),得到PCN-224的粒徑分布直方圖,大部分PCN-224的粒徑分布在80～90 nm。

粒徑/nm

圖3 PCN-224的透射電鏡照片和粒徑分布

通過對照有機(jī)配體TCPP、 PCN-224的FT-IR譜圖,判斷PCN-224是否成功合成。從圖4 TCPP的紅外光譜圖中可以看到,在1670～1725 cm-1存在C=O的吸收峰,而合成的PCN-224的紅外光譜圖在1700 cm-1附近無吸收峰;在1650 cm-1附近出現(xiàn)類似TCPP在1700 cm-1附近的羰基吸收峰。由此可知,在合成PCN-224的過程中,TCPP的羧基變成羧酸鹽,使得羰基的峰位置發(fā)生了變化;在650 cm-1處的峰是由Zr—OH鍵引起的,從而證明了PCN-224的成功合成。

ν/cm-1

(3) UV-Vis和FL

如圖5a所示,通過對PCN-224的UV-Vis光譜的分析,可以看到PCN-224在425 nm處有一個(gè)強(qiáng)吸收峰(Soret帶),在500～700 nm之間有4個(gè)弱吸收峰(Q帶)[19],這4個(gè)小峰的存在歸因于金屬有機(jī)框架PCN-224中存在的卟啉配體在500～700 nm之間的Q帶,而紫外可見吸收光譜反映的主要是分子中的生色團(tuán)和助色團(tuán),所以Zr基金屬的加入不會(huì)引起有機(jī)配體TCPP的UV-Vis光譜發(fā)生變化。由此可知,合成的PCN-224中存在卟啉結(jié)構(gòu)。熒光發(fā)射光譜測試是在某一固定波長的激發(fā)光作用下檢測PCN-224納米顆粒的熒光強(qiáng)度在不同波長處的分布情況。如圖5b所示,以440 nm激發(fā)波長作為激發(fā)光進(jìn)行發(fā)射光譜的測試,可以觀察到PCN-224納米粒子的光致發(fā)光(PL)光譜在紅光區(qū)680 nm處出現(xiàn)發(fā)射峰,表明此時(shí)的熒光強(qiáng)度最強(qiáng)。卟啉有機(jī)配體TCPP具有很強(qiáng)的熒光性能,通過對合成的PCN-224進(jìn)行熒光發(fā)射光譜的測試,進(jìn)一步證明PCN-224中存在配體TCPP結(jié)構(gòu)。

λ/nm

(4) PCN-224的穩(wěn)定性

通過DLS測試,得到7 d內(nèi)PCN-224在水溶液中的粒徑電位數(shù)據(jù),探究PCN-224在水溶液中的穩(wěn)定性。如圖6所示,可以看到7 d內(nèi)用DLS測得的數(shù)據(jù)曲線波動(dòng)不大。其中,PCN-224的水合粒徑均為100 nm左右,電位約為+30 mV,兩個(gè)圖中曲線的平緩程度證明合成的PCN-224在水溶液中有較好的穩(wěn)定性,表明PCN-224的結(jié)構(gòu)不易坍塌。

時(shí)間/d

2.2 膠束@PCN-224的表征

通過DLS測試得到PCN-224包封進(jìn)膠束后的粒徑電位變化,結(jié)果見表1。由表1可知,當(dāng)PCN-224包封進(jìn)膠束后,納米粒子的粒徑由132.7 nm增大到136.7 nm,電勢由+13.5 mV降低到+7.04 mV。

表1 膠束、PCN-224、膠束@PCN-224的粒徑、電勢和多分散系數(shù)

通過對照PCN-224、膠束、膠束@PCN-224的FT-IR圖譜,判斷PCN-224是否成功包封進(jìn)膠束中,其IR譜圖見圖7。由圖7可知,膠束本身在1400 cm-1左右沒有特征峰,而包封PCN-224后,在1403 cm-1出現(xiàn)了特征峰,該峰為PCN-224羧酸基團(tuán)中的O—H彎曲振動(dòng)峰。

通過ICP-OES測得納米粒子中包封的金屬Zr的質(zhì)量為215.2 μg,以及投入的PCN-224中Zr的質(zhì)量為250.3 μg,換算得到膠束@PCN-224中包封的PCN-224的質(zhì)量為0.85 mg,計(jì)算得到膠束@PCN-224中PCN-224的載藥量為7.91%。

2.3 體外ROS檢測分析

相同濃度的TCPP、PCN-224、膠束、膠束@PCN-224在光照之后產(chǎn)生ROS的情況,如圖8所示。熒光強(qiáng)度越高,說明光照產(chǎn)生的ROS越多。PCN-224與TCPP相比較,發(fā)現(xiàn)由金屬Zr和TCPP合成金屬有機(jī)框架后,其產(chǎn)生ROS的能力大大增強(qiáng),這是由于金屬有機(jī)框架的結(jié)構(gòu)使得TCPP周期性地排列在陣列中,能夠有效降低激發(fā)能的猝滅;同時(shí),框架的多孔性也有利于底物的進(jìn)入[20-21]。將PCN-224與膠束@PCN-224對比,發(fā)現(xiàn)當(dāng)PCN-224被包封進(jìn)膠束后,其產(chǎn)生ROS的能力下降,這可能是由于膠束中所含的TK被ROS裂解,從而消耗了一部分ROS。將TCPP和膠束@PCN-224對比,可知膠束@PCN-224產(chǎn)生ROS的能力明顯強(qiáng)于TCPP,說明膠束包封了PCN-224之后仍具有較強(qiáng)的產(chǎn)生ROS的效果。

2.4 4T1細(xì)胞對納米粒子的攝取

為了研究經(jīng)TPP修飾過的兩親性聚合物的線粒體靶向作用,本研究應(yīng)用CLSM來評估PCN-224和膠束@PCN-224在4T1細(xì)胞中的分布情況。PDT所產(chǎn)生的ROS用DCFH-DA標(biāo)記,線粒體用Mito-Tracker Red CMXRos染色,細(xì)胞核用Hoechst 33342染色,PCN-224因其本身能在420 nm激發(fā)光下發(fā)出約650 nm的熒光,因此不需要染料進(jìn)行染色即可從共聚焦顯微鏡下觀察到PCN-224。納米粒子進(jìn)入細(xì)胞后的分布如圖9所示,從圖9a中可以看到與PCN-224共孵育的4T1細(xì)胞觀察到少量的紫色熒光,且紫色與藍(lán)色標(biāo)記的細(xì)胞核位置幾乎相同,而紅色熒光標(biāo)記的線粒體和紫色熒光位置不同,表明PCN-224本身進(jìn)入細(xì)胞的能力有限,且進(jìn)入細(xì)胞后也不會(huì)主動(dòng)富集于線粒體,而是會(huì)擴(kuò)散到細(xì)胞核中。從圖9b中可以看到,與膠束@PCN-224共孵育的4T1細(xì)胞能觀察到明顯的紫色熒光,且與紅色熒光標(biāo)記的線粒體重疊的部分較多,說明膠束@PCN-224能提高PCN-224進(jìn)入細(xì)胞的能力,且在TPP的作用下,將其靶向遞送到線粒體。

圖9 納米粒子在細(xì)胞內(nèi)的分布*

納米粒子進(jìn)入細(xì)胞后產(chǎn)生的ROS分布如圖10所示,從圖10a中可以看到,綠色熒光標(biāo)記的ROS與紅色熒光標(biāo)記的線粒體和藍(lán)色熒光標(biāo)記的細(xì)胞核都有所重疊,但綠色熒光強(qiáng)度太弱,說明進(jìn)入細(xì)胞有限的PCN-224產(chǎn)生的ROS不足。從圖10b中可以看到,與膠束@PCN-224共孵育的4T1細(xì)胞能觀察到明顯的綠色熒光,且綠色熒光的位置與紫色熒光和紅色熒光標(biāo)記的線粒體一致,說明膠束@PCN-224進(jìn)入細(xì)胞后在TPP的作用下靶向到線粒體,且在線粒體處經(jīng)光照后將產(chǎn)生足夠的ROS。CLSM的結(jié)果有效說明了含TPP的兩親性聚合物的線粒體靶向能力。

圖10 細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生ROS的分布*

2.5 納米粒子對4T1細(xì)胞的毒性

為了進(jìn)一步研究經(jīng)TPP修飾過的兩親性聚合物的線粒體靶向作用,本研究應(yīng)用MTT法來評估PCN-224和膠束@PCN-224對4T1細(xì)胞的毒性。由圖11可見,隨著PCN-224質(zhì)量濃度的增加,在沒有光照的條件下,PCN-224、膠束@PCN-224均對4T1細(xì)胞有低的細(xì)胞毒性,而在光照條件下,PCN-224、膠束@PCN-224對4T1細(xì)胞毒性的影響都逐漸增大,且在最大藥物濃度時(shí)細(xì)胞存活率分別為32 %、29 %,將相同質(zhì)量濃度下的PCN-224和膠束@PCN-224對比,可以看到后者對4T1細(xì)胞的毒性均大于前者,這一結(jié)果進(jìn)一步證明了含TPP的兩親性聚合物的線粒體靶向作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所合成的納米粒子增強(qiáng)了PDT效果。

cPCN-224/μM

合成了具有線粒體靶向的兩親性聚合物,并通過水熱法制備得到了具有納米級尺寸的光敏劑PCN-224,隨后利用兩親性聚合物的自組裝,將PCN-224包封進(jìn)膠束,得到具有線粒體靶向功能的納米粒子(載藥量7.91%)。最后,利用熒光探針DCFH-DA對ROS的特異性識(shí)別,在相同條件下測試了各體系的熒光強(qiáng)度,結(jié)果證明金屬有機(jī)框架PCN-224有效提高了TCPP產(chǎn)生ROS的效果;將其包封進(jìn)膠束后,膠束@PCN-224仍具有較強(qiáng)的產(chǎn)生ROS的效果,利用CLSM、MTT測試證明了膠束具有線粒體靶向功能,能將PCN-224主動(dòng)靶向至線粒體,有效增強(qiáng)了PDT效果。該納米體系的構(gòu)建有利于提高PDT治療效果。