李丹妮， 高鵬飛， 洪曉雅， 王 煥， 王海嘯， 李 懔

南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院1.麻醉科；2.胃腸外科，江蘇 淮安 223300

術(shù)后認(rèn)知功能障礙是一種常見(jiàn)的術(shù)后并發(fā)癥，好發(fā)于老年患者[1-2]。有研究報(bào)道，25.8%的患者在術(shù)后7 d發(fā)生認(rèn)知功能障礙，12.7%的患者在術(shù)后3個(gè)月發(fā)生認(rèn)知功能障礙[3]。由于認(rèn)知功能障礙常導(dǎo)致住院時(shí)間延長(zhǎng)、生活質(zhì)量下降、社會(huì)依賴性增加及醫(yī)療費(fèi)用增加[4]，因此，闡明其潛在的分子機(jī)制對(duì)預(yù)防、診斷和治療認(rèn)知功能障礙非常重要。miRNA-572和miRNA-218是一種微小RNA，已被證實(shí)在多種疾病和腫瘤中發(fā)揮重要作用[5]。有研究發(fā)現(xiàn)，在惡性腫瘤、心血管疾病和精神疾病的患者中，均可發(fā)現(xiàn)miRNA-572和miRNA-218的異常表達(dá)[6]。大量miRNAs已被證實(shí)在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[7-10]。然而，miRNAs在認(rèn)知功能障礙中的具體作用及其機(jī)制尚不完全清楚。本研究旨在探討血清miRNA-572、miRNA-218表達(dá)水平與老年患者術(shù)后認(rèn)知功能障礙的相關(guān)性。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2019年12月至2020年12月于南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院行腹腔鏡下直腸癌根治術(shù)的132例老年患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥65歲；臨床資料完整；手術(shù)治療前簡(jiǎn)易精神狀態(tài)量表(mini-mental state examination，MMSE)評(píng)分≥27分。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前認(rèn)知功能障礙；伴有嚴(yán)重的心、腦、肺、腎等重要器官功能障礙；精神類藥物服用史；惡性腫瘤；失訪。根據(jù)術(shù)后1 d的MMSE評(píng)分[11]將患者分為A組(非認(rèn)知功能障礙，n=74)與B組(認(rèn)知功能障礙，n=58)。兩組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見(jiàn)表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。患者及家屬均簽署知情同意書(shū)。

表1 兩組患者一般資料比較/例(百分率/%)

1.2 麻醉方法 患者術(shù)前8 h禁食，術(shù)前2 h禁水，采用咪達(dá)唑侖、依托咪酯、瑞芬太尼和羅庫(kù)溴銨進(jìn)行麻醉，并進(jìn)行氣管插管輔助患者呼吸。

1.3 主要試劑及儀器 RNA提取試劑盒(批號(hào)：258741)、RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號(hào)：215788)、RT-qPCR試劑盒(批號(hào)：125877)購(gòu)自上海優(yōu)寧維生物有限公司；伯樂(lè)Mini-PRO熒光定量PCR儀、AU全自動(dòng)生化分析儀購(gòu)自美國(guó)伯樂(lè)公司。

1.4 總RNA提取及RT-qPCR檢測(cè) 手術(shù)前1 d清晨抽取患者空腹外周靜脈血3 ml，根據(jù)RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取外周血總RNA，利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒得到cDNA，-80℃保存?zhèn)溆谩T-qPCR體系：SYBR Green qPCR SuperMix 16.25 μl，特異性引物2.0 μl，模板cDNA3.25 μl，DEPC水補(bǔ)足至30 μl。反應(yīng)條件：95℃，10 min；95℃，10 s；60℃，30 s；70℃，30 s；共40個(gè)循環(huán)。設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，根據(jù)公式(2-ΔΔCT法)計(jì)算、分析miRNA表達(dá)情況。

1.5 血清指標(biāo)檢測(cè) 于手術(shù)前1 d采集患者空腹靜脈血2 ml，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟對(duì)患者血樣進(jìn)行前處理，處理完成后使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)患者血液中甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterin，LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)。

1.6 隨訪 采用門(mén)診或電話問(wèn)診的方式對(duì)所有研究對(duì)象進(jìn)行為期6個(gè)月的隨訪，隨訪過(guò)程中關(guān)注患者恢復(fù)及復(fù)發(fā)情況。采用改良Rankin量表(mRS量表)進(jìn)行評(píng)分，其中0分為完全正常；1分為有輕微癥狀，但能夠獨(dú)自完成日常活動(dòng)；2分為不能完成病前活動(dòng)，有輕微功能障礙，能夠自己照顧自己；3分為中度殘疾，需要他人照顧日?；顒?dòng)，但可自己正常行走；4分為中重度殘疾，日常行為活動(dòng)需要他人照顧，無(wú)法自己行走；5分為重度殘疾，表現(xiàn)為大小便失禁，臥床；6分為患者死亡。mRS評(píng)分0～2分的患者為預(yù)后良好，3～6分為預(yù)后不良[12]。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清miRNA-572、miRNA-218水平比較 B組血清中miRNA-572水平高于A組，miRNA-218水平低于A組，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組患者血清miRNA-572、miRNA-218水平比較

2.2 兩組患者血清指標(biāo)比較 B組LDL-C高于A組，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組患者TG、HDL-C水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組患者血清指標(biāo)比較

2.3 ROC曲線分析 ROC曲線分析結(jié)果顯示，miRNA-572、miRNA-218和LDL-C的ROC曲線下面積分別為0.902、0.811和0.684，最佳截點(diǎn)值分別為7.23、4.04和4.12，診斷認(rèn)知功能障礙的靈敏度分別為91.4%、82.8%和69.0%，特異度分別為86.5%、78.4%和59.45%。見(jiàn)圖1。

圖1 各指標(biāo)對(duì)老年手術(shù)患者術(shù)后認(rèn)知功能障礙診斷的ROC曲線

2.4 Logistic回歸分析 多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，LDL-C>4.12 mmol/L、miRNA-572>7.23、miRNA-218<4.04是老年手術(shù)患者出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 Logistic回歸分析

2.5 預(yù)后良好與預(yù)后不良患者miRNA-572、miRNA-218表達(dá)情況比較 根據(jù)mRS量表評(píng)分，B組中21例預(yù)后良好，37例預(yù)后不良。預(yù)后不良患者血清miRNA-572、miRNA-218高表達(dá)頻率分別為86.21%(25/37)、37.83%(14/37)，與預(yù)后良好的19.04%(4/21)、66.67%(14/21)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

有研究發(fā)現(xiàn)，在認(rèn)知功能障礙患者血清中可檢測(cè)到miRNA-572呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)[13]。miRNA-218是一種具有腫瘤生長(zhǎng)抑制作用的微小RNA，與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育密切相關(guān)。高表達(dá)的miRNA-218可有效地促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育[14]。本研究中，B組患者血清中miRNA-572表達(dá)水平顯著高于A組，而miRNA-218表達(dá)顯著低于A組，表明miRNA-572的異常增高和miRNA-218異常降低可能是導(dǎo)致老年手術(shù)患者發(fā)生認(rèn)知功能障礙的原因之一，其引起患者出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙的機(jī)制可能為血清中miRNA-572升高后靶向抑制miRNA-218表達(dá)，而低表達(dá)的miRNA-218會(huì)引發(fā)術(shù)后患者神經(jīng)功能異常，導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙。本研究根據(jù)mRS量表對(duì)認(rèn)知功能障礙患者的預(yù)后情況進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，預(yù)后不良患者血清miRNA-572高表達(dá)頻率高于預(yù)后良好患者，miRNA-218高表達(dá)頻率低于預(yù)后良好患者，提示miRNA-572和miRNA-218與認(rèn)知功能障礙患者預(yù)后密切相關(guān)，其結(jié)果可作為認(rèn)知功能障礙預(yù)后的參考之一。

膽固醇水平在認(rèn)知功能中起重要作用[15]。本研究中，B組LDL-C水平高于A組(P<0.05)，提示血清LDL-C水平高于正常值的患者往往存在明顯的認(rèn)知功能障礙[16]。本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示，miRNA-572、miRNA-218和LDL-C對(duì)于認(rèn)知功能障礙均具有較高的診斷價(jià)值；Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，LDL-C>4.12 mmol/L、miRNA-572>7.23、miRNA-218<4.04均是老年患者術(shù)后出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙的影響因素(P<0.05)。因此，應(yīng)密切關(guān)注此類患者，防止疾病的發(fā)生。本研究存在一定的局限性，后續(xù)應(yīng)進(jìn)行細(xì)胞研究，進(jìn)一步驗(yàn)證miRNA-572與miRNA-218的相互作用。

綜上所述，在認(rèn)知功能障礙患者的血清中，miRNA-572表達(dá)水平異常升高，miRNA-218表達(dá)水平異常降低，miRNA-572和miRNA-218的異常表達(dá)可能引發(fā)老年術(shù)后患者認(rèn)知功能障礙。