田 玉， 馬麗艷， 韓玉祥， 靳洪濤， 齊 晅， 薄世偉， 郭惠芳

河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院1.風(fēng)濕免疫科；2.影像科，河北 石家莊 050000

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種復(fù)雜的自身免疫性疾病，可嚴(yán)重威脅患者生命，具有多種臨床特征。SLE表現(xiàn)與多種自身抗體、隨后的免疫復(fù)合物形成和沉積，以及其他免疫過程有關(guān)[1]。SLE患者的死亡可能與狼瘡活動、治療并發(fā)癥或長期后遺癥等有關(guān)，由于不能早發(fā)現(xiàn)、早診斷而演變成為重癥或伴發(fā)重要臟器受損的患者較多，其中，腎損害在SLE患者中較為常見[2-3]。SLE患者發(fā)生腎損害早期階段一般無特征性臨床癥狀，腎功能生化檢查也處于正常水平[4]。因此，確定SLE早期篩查生物標(biāo)志物十分重要?？笴1q抗體屬于免疫球蛋白G型自身抗體，是免疫補(bǔ)體經(jīng)典途徑始動分子相關(guān)抗體，對SLE的發(fā)病及進(jìn)展有重要作用，結(jié)合抗原后，刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生大量抗體，激活補(bǔ)體，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)，造成腎損傷[5]。TIGIT是一種抑制性共刺激分子，與其配體CD155相互作用，向免疫細(xì)胞傳導(dǎo)負(fù)性信號，在SLE的發(fā)生和發(fā)展中起著關(guān)鍵作用[6]。近年有研究報道，ZBTB20是淋巴細(xì)胞分化的重要轉(zhuǎn)錄因子，在多種免疫細(xì)胞中表達(dá)，通過調(diào)控免疫細(xì)胞相關(guān)增殖、分化通路參與免疫反應(yīng)，可誘導(dǎo)異常的體液免疫反應(yīng)，通過抗原刺激B細(xì)胞，漿細(xì)胞增殖分化成能分泌抗體的漿細(xì)胞和記憶細(xì)胞，引起自身免疫性疾病的發(fā)病[7-8]。本研究通過檢測并比較抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20水平，分析各項標(biāo)志物單項檢測及聯(lián)合檢測在診斷SLE方面的價值?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2019年1月至2021年1月于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科診斷為SLE的120例患者作為觀察組，按照內(nèi)生肌酐清除率(creatinine clearance，Ccr)再將患者分為Ccr<80 ml/min的SLE無腎損傷組(n=69)和Ccr≥80 ml/min的SLE合并腎損傷組(n=51)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷及治療指南中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會》[9]中關(guān)于SLE疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)半年內(nèi)均未采取任何治療措施；(3)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)營養(yǎng)不良；(2)近半年接受過補(bǔ)充鐵劑、輸血、促紅細(xì)胞生成素等治療；(3)發(fā)病前已存在感染、出血、惡性腫瘤、糖尿病等；(4)合并自身免疫性胃炎、自身免疫性肝炎、風(fēng)濕或類風(fēng)濕等其他免疫性疾病及甲狀腺功能異常；(5)肝功能障礙；(6)有嗜酒史、外傷。另選取同期來我院進(jìn)行常規(guī)體檢的47例體檢者作為健康組。健康組中，男性4例，女性43例；年齡18～50歲，平均年齡(38.13±3.08)歲。觀察組中，男性11例，女性109例；年齡19～49歲，平均年齡(38.01±4.22)歲。兩組研究對象的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核通過。所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測抗C1q抗體 于清晨抽取研究對象的空腹靜脈血3～5 ml，1 000～2 000 r/min、離心15 min，采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測抗C1q抗體，具體操作步驟嚴(yán)格按照抗C1q抗體測定試劑盒使用說明書進(jìn)行(合肥萊爾生物科技有限公司)。

1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測TIGIT及ZBTB20 于清晨抽取研究對象的外周血5～7 ml，抗凝，1 000～2 000 r/min、離心15 min，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測TIGIT及ZBTB20，具體操作步驟嚴(yán)格按照TIGIT及ZBTB20測定試劑盒(流式細(xì)胞術(shù))使用說明書進(jìn)行(中生北控生物科技股份有限公司)。

2 結(jié)果

2.1 兩組抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20 mRNA比較 觀察組的抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20 mRNA水平均高于健康組，組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20 mRNA比較

2.2 觀察組患者兩個亞組的抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20 mRNA比較 SLE合并腎損傷組患者的抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20 mRNA水平均高于SLE無腎損傷組，組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 觀察組患者兩個亞組的抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20 mRNA比較

2.3 抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20 mRNA單項檢測及聯(lián)合檢測對SLE合并腎損傷的診斷效能 依據(jù)Ccr≥80 ml/min為SLE合并腎損傷的診斷標(biāo)準(zhǔn)，分析顯示，抗C1q抗體+TIGIT+ZBTB20 mRNA三者聯(lián)合檢測診斷SLE合并腎損傷的AUC、靈敏度及特異度均顯著優(yōu)于各指標(biāo)單項檢測及兩兩聯(lián)合檢測。見表3。

表3 抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20 mRNA單項檢測及聯(lián)合檢測對SLE合并腎損傷的診斷效能

3 討論

SLE是一種由環(huán)境、遺傳等因素引起的以B淋巴細(xì)胞異?；罨?、自身抗體產(chǎn)生、免疫復(fù)合物沉積為主要病理特征的自身免疫性疾病[10-11]。SLE的臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，血清中有以抗核抗體為主的多種致病性抗體存在，真正的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確[12]。隨著疾病進(jìn)展，SLE可影響多個末端器官，尤其是腎，常威脅患者的生命安全[13]。

SLE患者的細(xì)胞過度凋亡，形成眾多凋亡小體，從而暴露自身抗原并出現(xiàn)大量自身抗體[14]。其中，C1q通過與抗原抗體復(fù)合物相結(jié)合，刺激免疫補(bǔ)體經(jīng)典途徑被激活，對凋亡細(xì)胞碎片的清除和免疫復(fù)合物的清除具有促進(jìn)作用，防止組織免疫性損傷?？笴1q抗體是免疫補(bǔ)體經(jīng)典途徑始動分子相關(guān)抗體，通過與免疫復(fù)合物結(jié)合，刺激補(bǔ)體活化能力增強(qiáng)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，損傷腎功能[15]，對SLE的發(fā)病及進(jìn)展起關(guān)鍵作用。正常狀態(tài)下，機(jī)體內(nèi)僅有少量免疫復(fù)合物存在，被補(bǔ)體刺激而活化的巨噬細(xì)胞吞噬清除，當(dāng)機(jī)體內(nèi)的免疫復(fù)合物大量形成時，將超過單核吞噬細(xì)胞清除能力，殘余的免疫復(fù)合物會隨血液累及到腎，刺激炎癥反應(yīng)發(fā)生，炎性因子進(jìn)一步加重對腎組織的損害，此過程中經(jīng)典途徑、旁路途徑及凝集素途徑被激活，大量的C1q產(chǎn)生，進(jìn)一步誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體[16-17]。TIGIT是一種含有T細(xì)胞免疫球蛋白和免疫受體蛋白酪氨酸抑制模體結(jié)構(gòu)域的抑制性受體，通過與相應(yīng)配體CD155和CD112結(jié)合發(fā)揮抑制作用[18]，促進(jìn)B細(xì)胞活化，加重病情。ZBTB20又被稱為樹突細(xì)胞來源的POZ鋅指蛋白，參與了對免疫細(xì)胞的增殖及分化的調(diào)控，能夠?qū){細(xì)胞增殖進(jìn)行調(diào)節(jié)，同時還對免疫球蛋白的分泌起到促進(jìn)作用[19]。本研究結(jié)果顯示，SLE患者的抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20 mRNA均顯著升高，且SLE合并腎功能損傷患者的抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20 mRNA均升高的更明顯，提示抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20 mRNA能夠作為臨床診斷SLE及發(fā)生腎損害的檢驗標(biāo)志物。本研究結(jié)果與既往研究報道[20-22]結(jié)果相一致。

本研究還發(fā)現(xiàn)，C1q抗體+TIGIT+ZBTB20 mRNA聯(lián)合檢測診斷SLE合并腎損傷的靈敏度及特異度分別為92.2%和89.4%，約登指數(shù)為0.681，AUC為0.959，均顯著優(yōu)于各指標(biāo)單項檢測及兩兩聯(lián)合檢測。這表明，三者聯(lián)合檢測可以明顯提高診斷靈敏度和特異度，避免漏診和誤診，提高了臨床確診率，對于臨床診斷SLE患者發(fā)生腎損傷具有重要的價值。

綜上所述，SLE患者的抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20水平明顯升高，且SLE發(fā)生腎損傷患者的抗C1q抗體、TIGIT及ZBTB20水平更高，三者聯(lián)合檢測對SLE及其合并腎損傷具有較高的診斷價值。