劉 悅 徐 彪 邢金月 矯春晶 劉德江

（1.佳木斯大學生命科學學院，黑龍江 佳木斯 154007；2.中—烏農(nóng)林技術(shù)開發(fā)與應用國際合作聯(lián)合實驗室，黑龍江 佳木斯 154007）

軟棗獼猴桃［Actinidia arguta（Sieb.et Zucc.）Planch.ex Miq.］屬獼猴桃科獼猴桃屬，別名軟棗子，是一種多年生落葉藤本植物，雌雄異株，具有攀藤、散落的生長習性［1］。軟棗獼猴桃果實表皮無毛，整果可食，是我國珍貴的一種抗寒果樹資源［2］。該植物主要分布在我國東北、華北、西北、長江流域及臺灣等地，其中以東北地區(qū)的軟棗獼猴桃資源最為豐富［3］。另外，朝鮮半島、日本和俄羅斯遠東地區(qū)均有分布，新西蘭、美國、智利等國家已大量引種栽培［2，4］。軟棗獼猴桃口感細膩、風味獨特、香氣濃郁，富含維生素、礦物質(zhì)及膳食纖維等多種營養(yǎng)物質(zhì)［5］，常被譽為“世界之珍果”“水果之王”［6‐7］。

軟棗獼猴桃是一種藥食同源的植物，營養(yǎng)價值、藥用價值均較高。大量文獻記載了軟棗獼猴桃中活性成分的藥理作用［8‐9］，如多糖類成分和黃酮類成分在降血糖方面效果顯著［10‐11］。隨著軟棗獼猴桃的熱銷和價格的持續(xù)上漲，其種植面積逐年擴大，苗木需求量不斷增加。因此，開展軟棗獼猴桃人工繁殖和栽培技術(shù)研究迫在眉睫，對苗木繁殖和生產(chǎn)加工基地建設、軟棗獼猴桃綜合利用和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重要意義。

20 世紀70 年代就有關(guān)于軟棗獼猴桃的記載，包括軟棗獼猴桃栽培技術(shù)研究工作開展情況的記錄［12］及其成分的初步探究［13］。20 世紀80 年代初，采用部分學者開始研究軟棗獼猴桃人工育苗技術(shù)［14‐16］。經(jīng)過幾十年的研究，軟棗獼猴桃人工繁殖技術(shù)研究已取得一定成就。下面對軟棗獼猴桃人工繁殖方式進行歸納與總結(jié)，旨在為軟棗獼猴桃種苗繁殖提供參考，促進軟棗獼猴桃產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

1 軟棗獼猴桃種子繁殖研究進展

對于野生軟棗獼猴桃人工繁殖，時間相同、催芽場所不同的種子萌發(fā)率不同，露天條件下種子發(fā)芽率在90%以上，而露天條件下沙藏處理應在播種前65 d 左右進行。陳曉東在播種前70 d對軟棗獼猴桃種子進行催芽處理，露天條件下層積沙藏65 d 左右，種子發(fā)芽率較高，苗木生長良好［17］。朱玉寶等同樣對軟棗獼猴桃種子進行催芽處理后，在露天條件下將沙和種子按照3∶1 的比例混合后挖坑埋藏［18］。赫丹將漂洗后的種子進行層積處理后置于0 ℃條件下保存，發(fā)現(xiàn)能打破種子休眠，并在播種前10 d 取出進行保濕催芽［19］。以上試驗皆由層積沙藏或低溫處理打破種子休眠，屈德洪等利用不同濃度的赤霉素處理種子并用清水處理作為對照，發(fā)現(xiàn)濃度為0.08%的赤霉素處理的種子發(fā)芽率最高，為70%［20］。

2 軟棗獼猴桃扦插繁殖研究進展

扦插繁殖是將植物的莖、葉、根、芽等部位插入水、土、沙中，經(jīng)培養(yǎng)后使之成為獨立新植株的一種繁殖方法。軟棗獼猴桃扦插繁殖的基本過程包括枝條采集、枝條篩選和處理、扦插育苗及插后管理等。不同扦插方式的枝條采集時間不同：采用硬枝扦插時，于11 月中下旬采集無病蟲害、芽飽滿且成熟度較高的一年生枝條，置于干凈的濕河沙中沙藏，而且保持枝條頂部微露，翌年3 月剪枝備用［21］，或采集3月末至4月上旬的枝條沙藏后進行扦插；采用綠枝扦插（半木質(zhì)化）和嫩枝扦插，需6 月上旬采集枝條直接進行扦插，不需要沙藏處理［22］。大多數(shù)研究表明，影響軟棗獼猴桃生根及成苗的因素有扦插時期、枝條類型、枝條部位、藥劑種類和濃度、藥劑處理時間、扦插基質(zhì)、扦插后期土壤水分含量、氣溫、空氣濕度及光照等（人工栽培則部分因素暫不考慮）。在軟棗獼猴桃扦插繁殖研究中，不同枝條類型所需的扦插條件是不同的［22］。在實際生產(chǎn)中，軟棗獼猴桃扦插繁殖的理想條件如下：硬枝扦插時，在軟棗獼猴桃莖休眠期進行剪枝，并要求枝條完全木質(zhì)化、枝條直徑0.3～0.8 cm、長3.0～15.0 cm，用50 mg/kgABT 1號生根粉浸泡24 h；綠枝扦插時，選取半木質(zhì)化枝條進行修剪，枝條直徑0.3～0.8 cm、長10.0～12.0 cm，用50 mg/kgABT 1號生根粉浸泡15 min［23］。綜上所述，進行軟棗獼猴桃硬枝扦插育苗時，在插穗充足的條件下，建議剪取較粗的枝條作為插穗材料，以提高扦插育苗成活率。此外，基質(zhì)的選擇也影響扦插成活率。隋炎佐在野生軟棗獼猴桃扦插繁殖研究中得出嫩枝在沙子中成活率最高達83%，所以沙子是嫩枝扦插的最適宜基質(zhì)［24］。甄占萱等發(fā)現(xiàn)不同基質(zhì)對軟棗獼猴桃嫩枝扦插生長影響顯著：清水組不易產(chǎn)生愈傷組織，沙土+苔蘚組易導致枝葉腐爛，沙土+蛭石組扦插效果較好，大棚陶粒土基質(zhì)扦插效果最佳［25］。

3 軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)研究進展

德國著名植物家哈布蘭特（G.Haberlandt）于1902年提出了植物細胞全能性概念，為植物組織培養(yǎng)技術(shù)奠定了理論基礎。獼猴桃組織培養(yǎng)始于20世紀70年代，而我國獼猴桃組織培養(yǎng)始于1979 年。桂耀林以獼猴桃莖段為外植體誘導愈傷組織和植株再生，并取得成功［26］。1991年，吳克賢通過秋季腋芽培養(yǎng)，誘導出根、莖、葉完整的植株，并移栽成活。此后，研究人員對軟棗獼猴桃陸續(xù)展開了組織培養(yǎng)研究，如獼猴桃組織培養(yǎng)影響因素、培養(yǎng)條件等，并取得了重大研究進展［27］。

3.1 外植體的取材和預處理

獼猴桃的多種器官都可以作為外植體，如頂芽、腋芽、莖段、葉片、葉柄、根段、花藥、胚和胚乳，都可通過誘導愈傷組織或直接誘導分化成苗的方式進行組織培養(yǎng)，并且取得成功。軟棗獼猴桃是獼猴桃屬中的一種，所以其器官也可以作為外植體。張喜春等利用軟棗獼猴桃葉片作為其培養(yǎng)的外植體，成功誘導出愈傷組織［28］。鄭小華等對軟棗獼猴桃莖段、葉塊、葉柄發(fā)生的愈傷組織進行分化培養(yǎng)［29］，其中帶皮莖段愈傷組織發(fā)生率最高，達45.41%。崔雪艷以野生軟棗獼猴桃的莖段及帶嫩芽的莖段作為外植體，研究植物激素對誘導愈傷組織形成、不定芽分化、幼苗生根的影響，結(jié)果表明帶葉芽莖段更適合作為誘導愈傷組織的外植體［30］。

在組織培養(yǎng)過程中，對外植體進行消毒是控制組培苗污染率的首要步驟，選擇適宜的消毒劑及最佳的消毒時間，才能降低污染率，以便獲得生長良好的初代組培苗。李強采用不同滅菌時間對獼猴桃腋芽和莖段進行處理，其中以腋芽作為外植體、滅菌4 min時成活率最高，而以軟棗獼猴桃莖段作為外植體，滅菌時間以5 min 為宜［31］。鄧踐以“桓優(yōu)1 號”軟棗獼猴桃嫩莖段作為外植體，利用不同的滅菌方法及時間對其進行處理后，得出75%酒精20 s+0.1%HgCl 22 min+75%酒精20 s+0.1%Hg‐Cl 22 min處理效果良好，污染率2.8%［32］。

3.2 基本培養(yǎng)基的選擇

培養(yǎng)基是人工配制的、能滿足植物材料生長發(fā)育的營養(yǎng)基質(zhì)［33］。在獼猴桃組織培養(yǎng)過程中，一般可采用MS、1/2MS、N6、Nitsch、GD 及 WPM 作為基本培養(yǎng)基。而獼猴桃離體培養(yǎng)多選用固體培養(yǎng)基。

3.3 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響及應用

植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類及配比等是獼猴桃組織培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。目前，已知的生長素類植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)有 2，4‐D、NAA、IAA 等，細胞分裂素類有 6‐BA、KT等。細胞分裂素對愈傷組織分化和芽分化誘導有著重要影響，生長素與細胞分裂素的比值越大，對生根越有利。王廣福等以軟棗獼猴桃的莖段、葉片、葉柄作為外植體，研究不同生長調(diào)節(jié)劑組合對愈傷組織的誘導，6‐BA 對軟棗獼猴桃愈傷組織的誘導效果優(yōu)于KT，“魁綠”和“佳綠”葉片的愈傷誘導率在MS+2，4‐D 0.5 mg/L+6‐BA 2 mg/L和MS+2，4‐D 0.5 mg/L+6‐BA 1 mg/L培養(yǎng)基上最高，分別為93.3%和96.2%［34］。

增殖培養(yǎng)是組織培養(yǎng)試驗中的重要步驟，植物生長調(diào)節(jié)劑的種類及濃度對不定芽的分化、增殖及組培苗生長有著不同程度的影響［35‐36］。趙春莉等利用響應面法優(yōu)化軟棗獼猴桃培養(yǎng)基，培養(yǎng)基優(yōu)化結(jié)果為MS+6‐BA 1.61 mg/L+IAA 0.55 mg/L+IBA 0.33 mg/L［37］。王禹等以黑龍江省野生馴化品系獼猴桃為原材料，研究其快繁技術(shù)，增殖培養(yǎng)基采用 0.5～1.0 mg/L 6‐BA+0.5～1.0 mg/L ZT+30 g/L 蔗糖+7 g/L瓊脂，40 d繼代一次［38］。

在一定濃度范圍內(nèi)，在增殖培養(yǎng)基中添加的細胞分裂素濃度越高，芽的分化速度越快。但芽不能伸長，從而抑制了根的形成。因此，誘導生根之前，應適當降低細胞分裂素的濃度，以促進芽的伸長和生長，NAA、IBA、IAA均可誘導芽生根。

4 研究展望

首先，如何打破種子休眠是軟棗獼猴桃種子繁殖研究中的一個核心問題。研究表明，利用沙藏（層積處理）或不同濃度赤霉素浸泡種子可打破種子休眠狀態(tài)，用0.08%赤霉素處理的種子發(fā)芽率最高，為70%。其次，影響扦插繁殖的因素包括扦插時期、枝條類型、枝條部位、藥劑種類和濃度、藥劑處理時間，而枝條的長短、直徑對其影響不大。最后，組織培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)是無菌處理，關(guān)鍵在于外植體的選擇和處理、基本培養(yǎng)基的選擇、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類及濃度，而溫度、光照、時間對其影響不大。常用的培養(yǎng)溫度為25 ℃左右，光照強度為1 500～2 000 lx，光照時間為12～16 h/d。

目前，雖然大多數(shù)學者對軟棗獼猴桃的3 種人工繁殖技術(shù)進行了總結(jié)并取得了一些經(jīng)驗，但對于投入生產(chǎn)應用還需做大量工作。對軟棗獼猴桃人工繁殖技術(shù)的發(fā)展有如下期望。一是制定相關(guān)技術(shù)流程，進一步優(yōu)化人工繁殖技術(shù)。對于扦插繁殖，可通過優(yōu)化其影響因素等，制定人工栽培技術(shù)規(guī)程。同理，可通過優(yōu)化種子繁殖、組織培養(yǎng)繁殖條件，確定技術(shù)參數(shù)。二是擴大其品種選擇范圍，對不同地方的品種進行篩選，擴大市場需求。三是提高種苗繁殖速度。組織培養(yǎng)是無性快繁的一種重要途徑，利用快繁技術(shù)可降低成本，實現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，增加經(jīng)濟效益。