黎永華，尹 恒，譚仁霆，黃世福，邱金龍

（1.儋州市中醫(yī)醫(yī)院，海南 儋州 571700；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210023）

股骨頭壞死（osteonecrosis of the femoral head，ONFH）是好發(fā)于中青年的骨科難治性疾病，目前認(rèn)為其發(fā)病主要與髖部外傷、酗酒、糖皮質(zhì)激素使用等因素相關(guān)[1]。股骨頭內(nèi)血流障礙，造成局部骨細(xì)胞、骨小梁壞死，逐漸發(fā)展并導(dǎo)致股骨頭生物力學(xué)性能失衡，發(fā)生塌陷，髖關(guān)節(jié)功能障礙，嚴(yán)重影響患者身心健康[2]。人工全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)是ONFH晚期有效的治療方式，但遠(yuǎn)期面臨關(guān)節(jié)翻修問(wèn)題[3]。中醫(yī)藥治療早中期股骨頭壞死的療效肯定，并在緩解疼痛、改善功能、防止塌陷進(jìn)展等方面開(kāi)展了較多研究[4]。

股骨頭壞死屬于中醫(yī)學(xué)“骨蝕”范疇，其病因病機(jī)目前尚無(wú)統(tǒng)一觀(guān)點(diǎn)，多認(rèn)為其發(fā)病與“虛”“痰”“瘀”等因素相關(guān)，主要辨證為肝腎虧虛、氣血虧虛、痰瘀阻絡(luò)、氣滯血瘀等證型[5-6]，補(bǔ)肝腎、化痰濁、行氣血等治法貫穿于股骨頭壞死的中醫(yī)藥治療。杜仲有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨之功，在股骨頭壞死的中醫(yī)藥治療中被廣泛應(yīng)用[7-9]?，F(xiàn)代藥理研究認(rèn)為杜仲提取物能抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化，改善骨壞死內(nèi)部微循環(huán)[10-11]，但杜仲治療ONFH的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、分子機(jī)制等目前尚未明確。逐一對(duì)杜仲具體成分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證必將消耗大量時(shí)間和精力。本研究基于系統(tǒng)生物學(xué)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)理論，篩選預(yù)測(cè)杜仲治療股骨頭壞死的活性成分及作用靶標(biāo)，并對(duì)靶標(biāo)進(jìn)行富集分析，建立成分-疾病-靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)，探究其潛在作用機(jī)制，旨在為后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究提供方向。

1 資料與方法

1.1 杜仲活性成分與作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)成分分析平臺(tái)（BATMAN-TCM，http://bionet.ncpsb.org/batmantcm/）對(duì)杜仲的活性成分及其對(duì)應(yīng)作用靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)。

BATMAN-TCM是由北京蛋白組學(xué)研究中心開(kāi)發(fā)的中藥分子機(jī)理生物信息學(xué)分析工具，其主要功能包括：（1）中藥成分對(duì)應(yīng)靶標(biāo)基因的預(yù)測(cè)；（2）靶標(biāo)基因的生物學(xué)功能分析；（3）可視化分析中藥成分-靶標(biāo)基因-生物學(xué)功能網(wǎng)絡(luò)；（4）對(duì)比分析多個(gè)中藥。BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)建立中藥成分-靶標(biāo)基因互作預(yù)測(cè)模型，系統(tǒng)分析中藥成分三維化學(xué)分子結(jié)構(gòu)，將其與經(jīng)臨床或?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證的藥物小分子交互對(duì)比，預(yù)測(cè)中藥成分潛在的作用靶標(biāo)基因，不局限于已知的中藥成分作用靶標(biāo)基因關(guān)系，以獲得更加全面的中藥成分作用關(guān)系數(shù)據(jù)，幫助全面系統(tǒng)理解中藥的多成分-多靶點(diǎn)分子作用機(jī)制[12]。

在BATMAN-TCM中以“Du Zhong”（杜仲）為檢索詞，“Herb”（草藥）為輸入格式，檢索Score Cutoff設(shè)置為20，以P＜0.05為有效靶點(diǎn)預(yù)測(cè)置信區(qū)間，檢索獲得杜仲的活性成分及其作用靶點(diǎn)信息，保存數(shù)據(jù)整理備用。1.2股骨頭壞死疾病靶標(biāo)基因預(yù)測(cè) 分別在人類(lèi)基因組數(shù)據(jù)庫(kù)（GeneCards，https://www.genecards.org/）、基因關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)庫(kù)（GAD，https://geneticassociationdb.nih.gov/）、基因?qū)W庫(kù)（Gene，https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/）等多個(gè)公認(rèn)的匯集疾病遺傳組信息與治療靶點(diǎn)的在線(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)[13]中，以“Osteonecrosis of the femoral head”或“ONFH”或“Femur Head Necrosis”為檢索詞運(yùn)行檢索，預(yù)測(cè)ONFH的疾病治療靶標(biāo)基因，保存數(shù)據(jù)整理備用。

1.3 杜仲活性成分-股骨頭壞死靶標(biāo)基因網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將從BATMAN-TCM獲得的中藥杜仲活性成分作用靶點(diǎn)，與GeneCards、GAD、Gene等數(shù)據(jù)庫(kù)分別獲得的ONFH疾病靶標(biāo)基因交集，獲得杜仲活性成分治療ONFH作用靶點(diǎn)。

利用蛋白互作在線(xiàn)工具STRING（https://string-db.org/）進(jìn)行上述獲得的杜仲活性成分治療ONFH作用靶點(diǎn)的蛋白互作關(guān)系（Protein-Protein Interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建。在STRING中輸入獲得的全部靶標(biāo)基因，物種限定為“Homo sapiens”（人類(lèi)），運(yùn)行分析，將分析結(jié)果與已獲得的杜仲活性成分對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)信息匯總整理，導(dǎo)入至可視化網(wǎng)絡(luò)分析軟件Cytoscape 3.6.1中，通過(guò)軟件的Network Analyzer進(jìn)行杜仲活性成分-股骨頭壞死靶標(biāo)基因網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建。

1.4 靶標(biāo)基因通路富集與基因本體論分析 京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG），包含大量基因組高通量測(cè)序數(shù)據(jù)，是目前公認(rèn)的細(xì)胞、生物、生態(tài)系統(tǒng)功能信息數(shù)據(jù)庫(kù)，可獲取基因在各信號(hào)通路富集的信息[14]?；虮倔w論（Gene Ontology，GO），是廣泛應(yīng)用于描述基因產(chǎn)物的功能注釋與分類(lèi)的系統(tǒng)，主要包括細(xì)胞組成（Cellular Component，CC）、分子功能（Molecular Function，MF）及生物過(guò)程（Biological Process，BP）3個(gè)部分[15]。

通過(guò)蛋白基因生物信息整合分析平臺(tái)DAVID Bioinformatics Resources 6.8[16]（https://david.ncifcrf.gov/home.jsp）進(jìn)行杜仲活性成分治療ONFH靶標(biāo)基因的KEGG信號(hào)通路富集與GO功能注釋分析。在DAVID在線(xiàn)網(wǎng)站輸入所有獲得的靶標(biāo)基因，物種限定為“Homo sapiens”（人類(lèi)），運(yùn)行分析后下載保存數(shù)據(jù)結(jié)果。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選，以P＜0.05認(rèn)為該富集通路或注釋功能具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 杜仲活性成分及其治療股骨頭壞死靶標(biāo)基因 于BATMANTCM進(jìn)行杜仲活性成分條件性檢索，最終獲得杜仲活性成分38個(gè)，包括松脂醇（Pinoresinol）、木黃酮（Genistein）、己六醇（Dulcitol）、可布酮（Kobusone）等。（見(jiàn)表1）

表1 杜仲活性成分

由于杜仲各活性成分化學(xué)名稱(chēng)較長(zhǎng)，故以代替名稱(chēng)如DZ1等進(jìn)行編號(hào)，方便后續(xù)網(wǎng)絡(luò)分析。上述38個(gè)杜仲活性成分共作用于856個(gè)疾病靶標(biāo)基因，通過(guò)與GeneCards、GAD、Gene等數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的股骨頭壞死疾病靶標(biāo)基因取共交集，最終獲得杜仲活性成分治療ONFH目標(biāo)靶標(biāo)基因17個(gè)，包括NOS1、IL10、IL4、FGF2、PPARG、HIF1A、ABCB1、SOX9、TP53、TNF、F2、CTNNB1、BMP2、SREBF1、APOA1、TGFB1、CYP3A4。

2.2 杜仲活性成分作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)可視化 將BATMAN-TCM獲得的杜仲38個(gè)活性成分及其對(duì)應(yīng)疾病作用靶點(diǎn)856個(gè)之間的作用關(guān)系以Excel格式導(dǎo)入至Cytoscape 3.6.1軟件中，運(yùn)行Network Analyzer進(jìn)行杜仲活性成分與作用靶點(diǎn)關(guān)系網(wǎng)絡(luò)的可視化分析。圖中黃色三角形節(jié)點(diǎn)分別代表杜仲38個(gè)活性成分，紫色圓形節(jié)點(diǎn)代表活性成分作用靶點(diǎn)，節(jié)點(diǎn)間連線(xiàn)代表彼此間存在作用關(guān)系，所有節(jié)點(diǎn)與連線(xiàn)共同構(gòu)成杜仲活性成分作用靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系。（見(jiàn)圖1）

圖1 杜仲活性成分-疾病作用靶點(diǎn)關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖

2.3杜仲治療股骨頭壞死靶標(biāo)基因互作網(wǎng)絡(luò)可視化 將獲得的17個(gè)杜仲治療ONFH靶標(biāo)基因上傳至STRING網(wǎng)站，運(yùn)行分析，將靶標(biāo)基因互作關(guān)系結(jié)果保存下載，導(dǎo)入到Cytoscape 3.6.1中，運(yùn)行Network Analyzer，使用cytoHubba插件對(duì)靶標(biāo)基因進(jìn)行Degree值計(jì)算，根據(jù)Degree值對(duì)各靶標(biāo)基因之間的互作關(guān)系進(jìn)行可視化分析。（見(jiàn)圖2）

cytoHubba基于網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)對(duì)靶標(biāo)基因進(jìn)行Degree值與連接度計(jì)算分析，以此揭示靶標(biāo)基因在互作關(guān)系中的重要性與聯(lián)系強(qiáng)度[17]。Degree值越大，則認(rèn)為該靶標(biāo)基因重要性越顯著，連接度越高則認(rèn)為靶標(biāo)基因間互作關(guān)系越強(qiáng)。圖2中各圓形節(jié)點(diǎn)分別代表不同的靶標(biāo)基因，節(jié)點(diǎn)顏色各不相同。靶標(biāo)基因Degree值越大則節(jié)點(diǎn)直徑越大，其顏色越接近于暖色系，反之則Degree值越小，節(jié)點(diǎn)直徑越小，代表色接近冷色系。不同節(jié)點(diǎn)間根據(jù)聯(lián)系強(qiáng)度以不同顏色粗細(xì)的連線(xiàn)相聯(lián)系，連接度越大，連線(xiàn)則越粗，顏色越接近于暖色系。結(jié)果顯示，TNF、TP53、FGF2、PPARG、TGFB1依次為Degree值大小排名前5名的靶標(biāo)基因，TNF與NOS1、ABCB1，TP53與CYP3A4之間存在較強(qiáng)的連接度。

圖2 杜仲治療股骨頭壞死靶標(biāo)基因互作網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 杜仲活性成分-股骨頭壞死靶標(biāo)互作網(wǎng)絡(luò)可視化 將上述獲得的38個(gè)杜仲活性成分中與17個(gè)治療ONFH靶標(biāo)基因有直接作用關(guān)系的成分，與STRING獲得的靶標(biāo)基因互作關(guān)系整理后導(dǎo)入至Cytoscape 3.6.1中，運(yùn)行Network Analyzer，將杜仲活性成分之間作用于ONFH的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)可視化。在杜仲38個(gè)活性成分中，與股骨頭壞死靶標(biāo)基因存在直接作用關(guān)系的成分有8個(gè)，分別為異麥芽糖、咖啡酸二甲醚、靈貓酮、銀松素、去氧甘草次酸、γ-谷甾醇、三十烷醇、表奎尼丁。在網(wǎng)絡(luò)圖中以?xún)?nèi)圈的黃色三角形節(jié)點(diǎn)表示，外圈綠色圓形節(jié)點(diǎn)為17個(gè)ONFH靶標(biāo)基因，節(jié)點(diǎn)間以連線(xiàn)連接表示其作用關(guān)系。（見(jiàn)圖3）

圖3 杜仲活性成分-股骨頭壞死靶標(biāo)互作網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 靶標(biāo)基因通路富集結(jié)果分析 將獲得的17個(gè)杜仲治療ONFH靶標(biāo)基因上傳至DAVID 6.8在線(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)，運(yùn)行KEGG通路富集分析，最終獲得125個(gè)富集通路，經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)篩選出104個(gè)通路有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。對(duì)這104個(gè)通路根據(jù)P值從小到大進(jìn)行排序，將排名前5位的通路富集結(jié)果通過(guò)開(kāi)放式通路分析軟件FunRich3.1.3[18]以柱狀圖呈現(xiàn)。圖中橫坐標(biāo)展示多配體蛋白聚糖介導(dǎo)信號(hào)通路（proteoglycan syndecan-mediated signaling events）、磷脂?；嫉鞍拙厶蔷W(wǎng)絡(luò)（glypican 1 network）、凝血酶/蛋白酶激動(dòng)受體信號(hào)通路（thrombin/protease activated receptor pathway）、PAR1介 導(dǎo) 凝 血 酶 信 號(hào) 通 路（PAR1-mediated thrombin signaling events）、磷脂酰肌醇聚糖信號(hào)通路（glypican pathway）5個(gè)富集的KEGG信號(hào)通路，縱坐標(biāo)表示在該通路上富集的基因占總的輸入基因比例，各富集通路P值標(biāo)注于柱形圖上。（見(jiàn)圖4）

圖4 靶標(biāo)基因通路富集柱狀圖

2.6 靶標(biāo)基因的基因本體論結(jié)果分析 清空DAVID 6.8在線(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)KEGG運(yùn)行結(jié)果，繼續(xù)行靶標(biāo)基因的基因本體論GO分析，將所有GO分析結(jié)果保存下載。最終共獲得196個(gè)GO功能注釋結(jié)果，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，獲得14個(gè)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的GO功能注釋?zhuān)瑢⒋私Y(jié)果以可視化形式呈現(xiàn)。圖中縱坐標(biāo)分別表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的GO注釋功能，如生長(zhǎng)因子活性（growth factor activity）、酶結(jié)合（enzyme binding）等，橫坐標(biāo)表示功能注釋的P值，橫縱坐標(biāo)交匯節(jié)點(diǎn)表示各功能注釋?zhuān)摴δ茏⑨屔细患幕蛟酱髣t節(jié)點(diǎn)越大，P值越小則其顏色越接近紅色。（見(jiàn)圖5）

圖5 靶標(biāo)基因的基因本體論結(jié)果可視化圖

3 討 論

骨組織結(jié)構(gòu)破壞與生物力學(xué)性能失衡，是股骨頭壞死的重要表現(xiàn)，晚期將出現(xiàn)髖關(guān)節(jié)軟骨、軟骨下骨破壞塌陷。保髖手術(shù)、人工髖關(guān)節(jié)置換是目前中晚期ONFH的重要治療方式[19]。中醫(yī)藥在治療早中期ONFH方面?zhèn)涫芸隙?，并仍有巨大的發(fā)展?jié)摿?。杜仲為杜仲科植物杜仲的干燥?shù)皮，其味甘，性溫，入肝腎經(jīng)，《神農(nóng)本草經(jīng)》稱(chēng)之“主腰脊痛，補(bǔ)中益精氣，堅(jiān)筋骨，強(qiáng)志，除陰下癢濕，小便余瀝”，將杜仲列為上品。杜仲在ONFH的臨床治療中被廣泛應(yīng)用。本研究立足于杜仲治療ONFH的臨床療效，借助中藥系統(tǒng)藥理學(xué)成分分析平臺(tái)BATMAN-TCM，基于平臺(tái)對(duì)杜仲活性成分與疾病靶標(biāo)基因互作模型預(yù)測(cè)，獲得杜仲有效活性成分38個(gè)，疾病作用靶標(biāo)856個(gè)。

BATMAN-TCM是功能強(qiáng)大的中藥分子機(jī)理生物信息學(xué)分析工具，其獨(dú)特的中藥成分分子作用靶標(biāo)預(yù)測(cè)模型可幫助獲得藥物分子與未知的疾病靶標(biāo)基因潛在互作關(guān)系，獲得系統(tǒng)全面的中藥分子作用靶標(biāo)基因網(wǎng)絡(luò)。目前同類(lèi)型研究中常用的TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)[20]主要基于中藥分子的藥代動(dòng)力學(xué)特性如口服生物利用度等指標(biāo)進(jìn)行中藥活性成分的篩選，但該數(shù)據(jù)庫(kù)僅支持注冊(cè)的中草藥數(shù)據(jù)檢索，部分動(dòng)物源中藥（如龜甲、鹿角等）則無(wú)法提供藥理數(shù)據(jù)分析。BATMAN-TCM提供基于中藥成分三維化學(xué)結(jié)構(gòu)的疾病作用靶標(biāo)基因預(yù)測(cè)，同時(shí)收錄有更加全面的中藥單味藥、復(fù)方、單體及其靶標(biāo)數(shù)據(jù)，并可在線(xiàn)可視化分析靶標(biāo)基因的基因本體論、信號(hào)通路富集結(jié)果，功能全面。

將BATMAN-TCM預(yù)測(cè)的杜仲成分靶標(biāo)基因與各人類(lèi)基因組數(shù)據(jù)庫(kù)篩選獲得的ONFH疾病靶標(biāo)基因相映射，最終獲得杜仲的咖啡酸二甲醚等8個(gè)活性成分與17個(gè)股骨頭壞死靶標(biāo)基因存在直接作用關(guān)系。從杜仲活性成分-股骨頭壞死靶標(biāo)互作網(wǎng)絡(luò)圖可知，咖啡酸二甲醚、靈貓酮、表奎尼丁等多個(gè)活性成分能作用于多個(gè)ONFH靶標(biāo)基因，而TNF、TGFB1、SOX9等靶標(biāo)基因能同時(shí)與多個(gè)杜仲活性成分相聯(lián)系，杜仲活性成分治療ONFH可能存在著協(xié)同作用，通過(guò)不同信號(hào)通路的不同靶點(diǎn)發(fā)揮共同的治療作用。

從杜仲治療ONFH的17個(gè)靶標(biāo)基因互作網(wǎng)絡(luò)關(guān)系可知，杜仲治療ONFH的機(jī)制復(fù)雜，不同靶標(biāo)之間存在直接或間接的協(xié)調(diào)調(diào)控作用，TNF、TP53、FGF2、PPARG、TGFB1等是網(wǎng)絡(luò)中Degree值最高的前5位靶標(biāo)，是網(wǎng)絡(luò)中的核心靶標(biāo)，在ONFH疾病治療的生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著多通路協(xié)作調(diào)控的重要作用。如腫瘤壞死因子（TNF）具有炎癥介導(dǎo)作用，YUAN L等[21]研究發(fā)現(xiàn)TNF-α、IL-10等細(xì)胞因子基因突變與漢族人ONFH易感性密切相關(guān)；PPARG基因與類(lèi)固醇代謝、血管生成等生物過(guò)程相關(guān)。研究[22]認(rèn)為PPARG高表達(dá)是ONFH的危險(xiǎn)因素；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1是調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)分化的重要因子，在TGF-β/Smad信號(hào)通路調(diào)控前體細(xì)胞成骨分化、抑制破骨細(xì)胞活性的過(guò)程承擔(dān)重要作用[23]，與ONFH的骨修復(fù)重建相關(guān)。

機(jī)體的組織、細(xì)胞、代謝因子等物質(zhì)之間存在復(fù)雜的信號(hào)通路調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，互相協(xié)作或抑制以發(fā)揮相應(yīng)功能，這與中醫(yī)核心理念“整體觀(guān)念”相契合。從KEGG通路富集結(jié)果來(lái)看，杜仲治療ONFH的17個(gè)靶標(biāo)基因共富集于125個(gè)信號(hào)通路，其中有104個(gè)經(jīng)檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這些信號(hào)通路主要集中在細(xì)胞的增殖凋亡、癌癥相關(guān)、血管生成及凝血相關(guān)、免疫、炎癥、代謝等生物學(xué)過(guò)程。（1）調(diào)控骨代謝：成骨細(xì)胞-破骨細(xì)胞耦聯(lián)的骨重建-骨吸收穩(wěn)態(tài)平衡是ONFH治療的關(guān)鍵點(diǎn)之一，破骨細(xì)胞分化（osteoclast differentiation）、調(diào)控干細(xì)胞多能性的信號(hào)通路（signaling pathways regulating pluripotency of stem cells）、細(xì)胞周期（cell cycle）、Wnt信號(hào)通路（Wnt signaling pathway）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK signaling pathway）均有較顯著的富集。Wnt信號(hào)通路調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化、抑制成脂分化[24]；研究[25]表明激活MAPK信號(hào)通路通過(guò)提高ALP、BMP2等成骨相關(guān)蛋白表達(dá)，促進(jìn)成骨細(xì)胞礦化過(guò)程；破骨細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖凋亡周期調(diào)控與成骨細(xì)胞-破骨細(xì)胞穩(wěn)態(tài)平衡關(guān)系密切，杜仲活性成分可能通過(guò)相關(guān)信號(hào)通路恢復(fù)ONFH的骨重建-骨吸收失衡，促進(jìn)骨重建，抑制骨吸收，修復(fù)骨壞死。（2）血管生成調(diào)控：ONFH發(fā)病與股骨頭血液循環(huán)欠佳密切相關(guān)，缺氧缺血是發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，HIF-1α信號(hào)通路耦聯(lián)血管生成與骨代謝平衡，可作用于生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞促進(jìn)血管內(nèi)皮生成因子表達(dá)從而促進(jìn)血管生成[26-27]。杜仲活性成分可能有改善ONFH病程中股骨頭局部微循環(huán)、促進(jìn)血管新生的作用。（3）炎癥代謝調(diào)控：改善ONFH局部特殊炎癥環(huán)境對(duì)其治療轉(zhuǎn)歸具有重要意義。NF-kappa B、T細(xì)胞受體等信號(hào)通路是重要的炎癥介導(dǎo)與免疫調(diào)控通路。炎癥因子誘導(dǎo)NF-κB活化，促進(jìn)破骨細(xì)胞增殖活動(dòng)[28]；T細(xì)胞受體信號(hào)通路調(diào)控機(jī)體免疫應(yīng)答、炎癥因子釋放、殺傷靶細(xì)胞等生物學(xué)過(guò)程[29]；杜仲苷、杜仲醇提物可抑制NF-κB、T細(xì)胞受體通路，減輕局部炎癥[30]。以上可能是其治療ONFH的潛在機(jī)制。

從靶標(biāo)基因富集的GO生物學(xué)過(guò)程來(lái)看，杜仲治療ONFH主要與藥物反應(yīng)、核酸的轉(zhuǎn)錄調(diào)控、生長(zhǎng)因子活性、酶結(jié)合、細(xì)胞代謝因子活性等聯(lián)系緊密，與前述各富集的信號(hào)通路調(diào)控機(jī)體的生物學(xué)活動(dòng)相吻合，是進(jìn)一步探索杜仲活性成分治療ONFH潛在機(jī)制的重要環(huán)節(jié)。

綜上所述，杜仲治療ONFH存在多成分、多靶點(diǎn)、多通路等特點(diǎn)，各活性成分、靶標(biāo)基因存在一定協(xié)同調(diào)控或拮抗調(diào)控作用，主要涉及的骨代謝平衡、血管生成、炎癥免疫調(diào)控等信號(hào)通路之間存在復(fù)雜相互作用，可能在股骨頭局部、機(jī)體全身發(fā)揮調(diào)控作用。杜仲治療ONFH的潛在分子機(jī)制復(fù)雜，本研究初步對(duì)相關(guān)機(jī)制進(jìn)行總體探索，希望為后續(xù)具體實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證提供思路與方法。