李冰，李季東，楊祥燕，蔡元保，李穆，曾黎明，黃思婕

摘 要：【目的】為闡明澳洲堅(jiān)果MYB（v-myb avian myeloblastosis viral oncogene homolog）蛋白靶基因的功能及分子作用機(jī)制提供了科學(xué)的理論依據(jù)?！痉椒ā炕诎闹迗?jiān)果轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和RT-PCR方法克隆澳洲堅(jiān)果MYB蛋白靶基因，并利用生物信息學(xué)分析這些基因編碼蛋白質(zhì)的同源性、系統(tǒng)進(jìn)化、理化性質(zhì)、亞細(xì)胞定位、跨膜域和信號(hào)肽?！窘Y(jié)果】獲得了3個(gè)新的澳洲堅(jiān)果MYB蛋白靶基因MiTOM1、MiTOM2和MiTOM3，GenBank登錄號(hào)分別為MT319120、MT319121和MT319122。MiTOM1、MiTOM2和MiTOM3都包含典型結(jié)構(gòu)域VHS-ENTH-ANTH，與其它植物來(lái)源的TOM蛋白具有極高的序列相似度，與荷花TOM蛋白（XP_010260421.1、XP_010244847.1和XP_010260421.1）的序列相似度分別高達(dá)68.93%、75.76%和68.80%。MiTOM1、MiTOM2和MiTOM3蛋白均為親水性蛋白。MiTOM1可能定位于細(xì)胞核，為非分泌蛋白和非跨膜蛋白;MiTOM2可能定位于細(xì)胞質(zhì)，為跨膜分泌蛋白;MiTOM3可能定位于細(xì)胞核或微體，為非分泌蛋白和非跨膜蛋白。蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示，MiTOM1、MiTOM2和MiTOM3二級(jí)結(jié)構(gòu)主要含有無(wú)規(guī)則卷曲和α螺旋?！窘Y(jié)論】MiTOM1、MiTOM2和MiTOM3包含TOM家族典型結(jié)構(gòu)域VHS-ENTH-ANTH，可能在澳洲堅(jiān)果體內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸及控制形態(tài)發(fā)育方面起重要作用。

關(guān)鍵詞：澳洲堅(jiān)果;TOM基因;基因克隆;生物信息學(xué)分析

中圖分類號(hào)：S664.9? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Cloning and Bioinformatics Analysis of Three MYB Protein Target Genes from Macadamia （Macadamia integrifolia）

LI Bing，LI Jidong，YANG Xiangyan，CAI Yuanbao*，

LI Mu，ZENG Liming，HUANG Sijie

（Guangxi Subtropical Crops Research Institute， Guangxi Academy of

Agricultural Sciences， Nanning， Guangxi 530001， China）

Abstract： 【Objective】This study provides a scientific theoretical basis for elucidating the function and molecular mechanism of macadamia MYB （v-myb avian myeloblastosis viral oncogene homolog） protein target genes.【Method】Based on the macadamia transcriptome data， 3 MYB protein target genes of macadamia were cloned by RT-PCR method， and the homology， phylogeny， physicochemical properties， subcellular localization， transmembrane domains， and signal peptides of these genes encoding proteins were analyzed by bioinformatics.【Result】Three new MYB target genes MiTOM1， MiTOM2 and MiTOM3 were cloned. The GenBank accession numbers are MT319120， MT319121 and MT319122 respectively.? MiTOM1， MiTOM2 and MiTOM3 which contain the typical domain VHS-ENTH-ANTH， have high sequence similarity with other plant TOM proteins. The amino acid sequence similarity between MiTOM1 and the lotus TOM proteins （XP_010260421.1， XP_01024847.1， XP_010260421.1） reach 68.93%， 75.76%， and 68.80%， respectively. MiTOM1， MiTOM2 and MiTOM3 are hydrophilic proteins. MiTOM1 which might be located in the nucleus is non-secretory and non-transmembrane proteins; MiTOM2 which might be located in the cytoplasm is transmembrane secretory proteins; MiTOM3 which might be located in the nucleus or microbodies is non-secretory and non-transmembrane proteins. Protein secondary structure prediction shows that MiTOM1， MiTOM2 and MiTOM3 secondary structures mainly contained irregular crimp and α helix. 【Conclusion】MiTOM1， MiTOM2 and MiTOM3 which include TOM family typical domain VHS-ENTH-ANTH， may play an important role in material transportation and morphological development in macadamia.

Key words： Macadamia （Macadamia integrifolia）; TOM genes; gene cloning; bioinformatics analysis

轉(zhuǎn)錄因子通過(guò)識(shí)別靶基因上游啟動(dòng)子區(qū)高度保守的特異堿基序列并與之結(jié)合，對(duì)靶基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，進(jìn)而調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育、生理代謝以及各種逆境脅迫的應(yīng)答機(jī)制。因此，通過(guò)MYB靶基因TOM家族基因的克隆及生物信息學(xué)研究，對(duì)于闡明澳洲堅(jiān)果生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控及抗逆分子機(jī)制具有重要意義。

植物中轉(zhuǎn)錄因子的類型多樣，常見(jiàn)的有WAKY類、ERF類、MYB類等，其中MYB類轉(zhuǎn)錄因子是植物轉(zhuǎn)錄因子中數(shù)量較多的家族之一，按其保守結(jié)構(gòu)域數(shù)目的差異可分為R1-MYB、R2R3-MYB、R1R2R3-MYB和R4-MYB四個(gè)家族[1]。MYB轉(zhuǎn)錄因子功能多樣，在植物生物與非生物脅迫的調(diào)節(jié)以及植物的整個(gè)新陳代謝過(guò)程都起著無(wú)可代替的作用[2，3，4]。已有的澳洲堅(jiān)果MYB研究結(jié)果表明，MYB家族轉(zhuǎn)錄因子成員在澳洲堅(jiān)果生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)量形成過(guò)程中起重要作用[5]。但是，有關(guān)MYB轉(zhuǎn)錄因子的靶基因及其調(diào)控機(jī)制在國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道。TOM1（TOM1-LIKE PROTEIN）是MYB的一個(gè)靶標(biāo)蛋白，與包含VHS（VPS27，Hrs和STAM）結(jié)構(gòu)域的GGA家族密切相關(guān)，是第一個(gè)被鑒定為具有VHS結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)超家族的成員[6， 7]。已有研究表明，TOM1是內(nèi)皮素的效應(yīng)子，并可能在植物體內(nèi)運(yùn)輸中起重要作用[8]。Korbe等研究發(fā)現(xiàn)擬南芥中MYB靶標(biāo)蛋白TOL（屬于TOM1類蛋白）作為泛素結(jié)合蛋白通過(guò)調(diào)節(jié)生長(zhǎng)素的動(dòng)態(tài)分布及其相關(guān)生長(zhǎng)反應(yīng)，從而控制植株形態(tài)發(fā)育，并在降解PM蛋白中起作用[9]。Jeanette等研究結(jié)果表明，TOL蛋白在植物中作為多價(jià)泛素受體起作用，通過(guò)運(yùn)輸所需的保守內(nèi)小體分選復(fù)合物（ESCRT）途徑控制泛素化的貨物輸送到液泡[10]。整體而言，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)植物TOM基因的功能研究并不多，其作用的分子機(jī)制也不清楚。

澳洲堅(jiān)果（Macadamia integrifolia）屬山龍眼科澳洲堅(jiān)果屬植物，是一種原產(chǎn)于澳洲東南部熱帶雨林的常綠果樹，素有“干果之王”的美譽(yù)。全球熱帶和亞熱帶約30個(gè)國(guó)家和地區(qū)種植澳洲堅(jiān)果，我國(guó)云南、廣西、貴州、廣東等省區(qū)也廣泛種植。澳洲堅(jiān)果對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境條件要求比較高，干旱、冷害等逆境條件會(huì)影響澳洲堅(jiān)果的正常生長(zhǎng)發(fā)育。由于地形和環(huán)境影響，國(guó)外優(yōu)良品種引入我國(guó)種植后，受到低溫、干旱、病蟲害等多種生物脅迫和非生物脅迫，澳洲堅(jiān)果的產(chǎn)量和品質(zhì)都有所下降[11-14]。通過(guò)對(duì)澳洲堅(jiān)果TOM家族基因的克隆和生物信息學(xué)分析，闡明TOM基因在澳洲堅(jiān)果生長(zhǎng)發(fā)育中的作用，為澳洲堅(jiān)果抗逆品種選育奠定基礎(chǔ)。但是，目前MYB蛋白靶基因TOM基因在澳洲堅(jiān)果的相關(guān)研究國(guó)內(nèi)外尚未有報(bào)道。

本課題組根據(jù)澳洲堅(jiān)果抗寒轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，結(jié)合RT-PCR方法克隆獲得3個(gè)MYB蛋白靶基因，利用生物信息學(xué)分析其編碼蛋白的結(jié)構(gòu)與功能，為深入研究澳洲堅(jiān)果TOM基因在物質(zhì)運(yùn)輸及形態(tài)發(fā)育中的作用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為廣西亞熱帶作物研究所澳洲堅(jiān)果種質(zhì)資源圃提供的澳洲堅(jiān)果光殼種（Macadamia integrifolia）品種Own Choice（O.C.）。對(duì)接穗為4個(gè)月苗齡的嫁接苗低溫（4 ℃）處理3 h后，采集葉片液氮速凍處理后置于冰箱-80℃保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)所用RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、DNA凝膠回收試劑盒、DNA聚合酶、DNA Marker、pMD-18T載體等購(gòu)自大連寶生物工程有限公司。

1.2 總RNA提取及cDNA合成

參照蔡元保等[15]的CTAB改良法提取澳洲堅(jiān)果葉片總RNA，利用核酸蛋白檢測(cè)儀分析所提取的總RNA純度和濃度，用1.5 %瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)總RNA的完整性。將抽提好的RNA經(jīng)DNAaseI進(jìn)行DNA消化后，取1 ug 總RNA，用RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（TaKaRa，大連）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA第一鏈，將合成好的cDNA置于冰箱-20℃保存。

1.3 澳洲堅(jiān)果MYB蛋白靶基因克隆

本課題組從澳洲堅(jiān)果抗寒轉(zhuǎn)錄組中獲得了3個(gè)MYB蛋白靶基因，利用NCBI在線引物設(shè)計(jì)網(wǎng)站（https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）設(shè)計(jì)這3個(gè)基因的CDS克隆引物MiTOM1-F/MiTOM1-R，MiTOM2-F/MiTOM2-R和MiTOM3-F/MiTOM3-R（表1），所用引物全部由大連寶生物工程有限公司合成。

取1.0 μL澳洲堅(jiān)果葉片的 cDNA 模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增總體系25μL，反應(yīng)體系包括cDNA模板1.0 μL，2×Ex Taq PCR Master Mix 12.0 μL，正向和反向引物（20 mol/L）各1.0 μL，無(wú)菌dd H2O 10 μL。反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性5 min，94℃變性 45 s，50.2～53.6 ℃（具體見(jiàn)表1）退火 45 s，72℃延伸 1.5 min，擴(kuò)增35個(gè)循環(huán)，最后72℃再延伸 7 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.0 %瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，采用DNA凝膠回收試劑盒（TaKaRa，大連）進(jìn)行回收與純化，將其連接到T載體pMD18上，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，用含氨芐青霉素抗性的LB固體培養(yǎng)基進(jìn)行篩選并采用菌落PCR方法挑取陽(yáng)性克隆，送至上海生工生物工程公司進(jìn)行序列測(cè)序。

1.4 生物信息學(xué)分析

利用NCBI網(wǎng)站的BLAST程序進(jìn)行澳洲堅(jiān)果MYB蛋白靶基因編碼蛋白質(zhì)序列和功能結(jié)構(gòu)域的同源檢索，用PROSITE和SMART軟件預(yù)測(cè)功能結(jié)構(gòu)域，用ProtParam軟件分析目標(biāo)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)，用PSORT軟件分析蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位，用SignalP 4.1軟件預(yù)測(cè)蛋白信號(hào)肽，用TMpred軟件預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的跨膜域，用SOPMA軟件進(jìn)行蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)。在NCBI網(wǎng)站GenBank中查找同源蛋白，并用MEGA 7.1軟件鄰接法（Neighbor-joining，NJ）構(gòu)建同源蛋白的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。

2 結(jié)果與分析

2.1 3個(gè)澳洲堅(jiān)果MYB蛋白靶基因隆與序列分析

以澳洲堅(jiān)果葉片cDNA為模板，利用特異性引物（表1）擴(kuò)增3個(gè)TOM基因含有開放閱讀框的cDNA片段，凝膠電泳后，分別擴(kuò)增出了1841 bp、2127 bp和2473 bp的目的條帶（圖1），DNA片段回收后連接到T載體pMD18，經(jīng)序列測(cè)序驗(yàn)證后，分別命名為MiTOM1、MiTOM2和MiTOM3。序列分析結(jié)果顯示，MiTOM1基因開放閱讀框長(zhǎng)1542 bp，編碼一個(gè)包含513個(gè)氨基酸序列的蛋白質(zhì)，基因登錄號(hào)MT319120;MiTOM2基因開放閱讀框長(zhǎng)972 bp，編碼一個(gè)包含323個(gè)氨基酸序列的蛋白質(zhì)，基因登錄號(hào)MT319121;MiTOM3基因開放閱讀框長(zhǎng)1407 bp，編碼一個(gè)包含426個(gè)氨基酸序列的蛋白質(zhì)，基因登錄號(hào)MT319122。

2.2 澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2、MiTOM3蛋白理化性質(zhì)分析

通過(guò)ProtParam軟件分析蛋白理化性質(zhì)表明，MiTOM1編碼氨基酸數(shù)量513個(gè)，分子質(zhì)量56.44 kD，理論等電點(diǎn)（PI）5.07，分子式為C2475H3903N685O794S15，帶負(fù)電荷殘基（Asp+Glu，天冬氨酸+谷氨酸）71個(gè)，帶正電荷殘基（Arg+Lys，精氨酸+賴氨酸）48個(gè)，脂肪指數(shù)79.61，親水性總平均值（GRAVY，grand average of hydrophilicity）-0.552。

MiTOM2編碼氨基酸數(shù)量323個(gè)，分子質(zhì)量36.15 kD，理論等電點(diǎn)6.33，分子式C1600H2602N438O479S16，帶負(fù)電荷殘基42個(gè)，帶正電荷殘基39個(gè)，脂肪指數(shù)100.77，親水性總平均值（GRAVY）-0.160。

MiTOM3編碼氨基酸數(shù)量468個(gè)，分子質(zhì)量50.96 kD，理論等電點(diǎn)5.12，分子式C2237H3507N613O724S12，帶負(fù)電荷殘基59個(gè)，帶正電荷殘基43個(gè)，脂肪指數(shù)73.31，親水性總平均值（GRAVY）-0.547。

2.3 澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2、MiTOM3氨基酸序列同源性分析

MYB蛋白靶基因編碼蛋白的同源性檢索分析表明（圖1），澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2、MiTOM3蛋白與TOM家族其他成員具有高度的同源性，都具有TOM家族典型的蛋白結(jié)構(gòu)域VHS-ENTH-ANTH。其中，MiTOM1蛋白與荷花（Nelumbo nucifera，XP_010260421.1）、麻風(fēng)樹（Jatropha curcas，KDP32899.1）、可可（Theobroma cacao，XP_007019272.2）TOM蛋白的氨基酸序列相似度分別為68.93%、64.15%、64.79%;MiTOM2蛋白與荷花（Nelumbo nucifera，XP_010244847.1）、葡萄（Vitis riparia，XP_034690832.1）、酸棗（Ziziphus jujuba，XP_015879670.1）TOM蛋白的序列相似度分別為75.76%、73.38%、73.48%;MiTOM3蛋白與荷花（Nelumbo nucifera，XP_010260421.1）、荷花（Nelumbo nucifera，XP_010270344.1）、赤豆（Vigna angularis，XP_017421990.1）TOM蛋白的序列相似度分別為68.8%、67.17%、65.72%。

2.4 澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2、MiTOM3系統(tǒng)進(jìn)化樹分析

利用MAGE 7.1軟件構(gòu)建植物TOM蛋白的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。結(jié)果顯示（圖3），20個(gè)TOM蛋白可明顯分成2組，其中MiTOM1與MiTOM3處于同一組，與荷花TOM蛋白（XP_0120260421.1，XP_010270344.1）的親緣關(guān)系最近;MiTOM2處于另一組，與荷花TOM蛋白（XP_010244847.1）和相思子TOM蛋白（XP_027340603.1）的親緣關(guān)系最近。

2.5 澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2、MiTOM3蛋白疏水性分析

通過(guò)ExPASy服務(wù)器中的ProtScale程序分析澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2和MiTOM3蛋白的疏水性。結(jié)果顯示，MiTOM1（圖4A）、MiTOM2（圖4B）和MiTOM3（圖4C）的疏水性最大值與親水性最小值之和都為負(fù)值，因此推斷這3個(gè)蛋白均為親水性蛋白。與上述的這3個(gè)蛋白理化性質(zhì)分析結(jié)果一致，即這3個(gè)蛋白的親水性總平均值（GRAVY）均為負(fù)值，推測(cè)為親水性蛋白。

2.6 澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2、MiTOM3蛋白功能預(yù)測(cè)

PSORT軟件預(yù)測(cè)表明，MiTOM1蛋白可能定位于細(xì)胞核（概率為30%），MiTOM2蛋白可能定位于細(xì)胞質(zhì)（概率為65%），MiTOM3蛋白可能定位于細(xì)胞核和微體（概率均為30%）。利用SignalP和TMpred軟件分析蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)和信號(hào)肽。結(jié)果顯示，MiTOM1蛋白不存在信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)，為非分泌蛋白;MiTOM2蛋白存在2個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)，為分泌蛋白;MiTOM3蛋白不存在信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)，為非分泌蛋白。

2.7 澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2、MiTOM3蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析

SOPMA軟件的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示，MiTOM1蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要元件是無(wú)規(guī)則卷曲（Random coil）（54.88%）、α-螺旋（Alpha helix）（36.26%）、折疊延伸鏈（Extended strand）（4.87%）和β轉(zhuǎn)角（Beta turn）（4.29%）（圖5A）;MiTOM2蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要元件是無(wú)規(guī)則卷曲（35.29%）、α-螺旋（52.63%）、折疊延伸鏈（7.43%）和β轉(zhuǎn)角（4.64%）（圖5B）;MiTOM3蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要元件是無(wú)規(guī)則卷曲（56.84%）、α-螺旋（36.32%）、折疊延伸鏈（4.49%）和β轉(zhuǎn)角（2.35%）（圖5C）?？梢?jiàn)，這3個(gè)蛋白的VHS-ENTH-ANTH結(jié)構(gòu)域主要由α-螺旋組成。

3 討論

轉(zhuǎn)錄因子靶基因的預(yù)測(cè)與驗(yàn)證是功能基因組研究的一種重要方法。不但可為基因功能解析提供參考，也可了解基因的表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)理，并進(jìn)一步構(gòu)建基因表達(dá)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。MYB轉(zhuǎn)錄因子參與植物生長(zhǎng)發(fā)育、生理代謝以及各種逆境脅迫的應(yīng)答機(jī)制[2，3，4]。TOM是MYB蛋白的一個(gè)靶基因，其編碼蛋白包含TOM家族典型結(jié)構(gòu)域VHS-ENTH-ANTH[6， 7]。

澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2和MiTOM3與其它TOM家族成員的氨基酸序列具有高度相似性，且都含有結(jié)構(gòu)域VHS-ENTH-ANTH?？梢?jiàn)，澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2和MiTOM3屬于TOM家族，即同樣作為MYB靶標(biāo)蛋白。系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹分析顯示，這3個(gè)澳洲堅(jiān)果TOM蛋白分別屬于2個(gè)不同的進(jìn)化分支。進(jìn)化關(guān)系接近且處于同一進(jìn)化分支的成員可能具有類似的空間結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能[16，17]，這為進(jìn)一步研究3個(gè)澳洲堅(jiān)果TOM蛋白的功能特征奠定基礎(chǔ)。

澳洲堅(jiān)果MiTOM1和MiTOM3可能定位于細(xì)胞核或微體，不存在信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)，推測(cè)這2個(gè)蛋白作為非分泌親水蛋白行駛其生物學(xué)功能。澳洲堅(jiān)果MiTOM2蛋白可能定位于細(xì)胞質(zhì)，存在2個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)，作為分泌親水蛋白在翻譯后進(jìn)行蛋白加工和剪切。這3個(gè)澳洲堅(jiān)果TOM蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要元件是無(wú)規(guī)卷曲和α-螺旋，并夾雜著折疊延伸鏈，且這些結(jié)構(gòu)相對(duì)保守。而且，這3個(gè)TOM蛋白VHS-ENTH-ANTH結(jié)構(gòu)域的主要組成是α-螺旋。這說(shuō)明在長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程中，澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2和MiTOM3蛋白的空間結(jié)構(gòu)相對(duì)保守，推測(cè)其有類似的生物學(xué)功能。

已有研究表明，作為MYB蛋白的靶基因TOM1和TOL能夠調(diào)節(jié)植物體內(nèi)運(yùn)輸，調(diào)節(jié)生長(zhǎng)素的動(dòng)態(tài)分布及其相關(guān)生長(zhǎng)反應(yīng)，從而控制植株形態(tài)發(fā)育[8-10]。同屬于TOM家族的澳洲堅(jiān)果MiTOM1、MiTOM2和MiTOM3，與這些MYB靶標(biāo)蛋白具有高度的序列相似性和進(jìn)化同源性。因此，推測(cè)澳洲堅(jiān)果MYB轉(zhuǎn)錄因子通過(guò)識(shí)別這3個(gè)靶基因上游啟動(dòng)子區(qū)高度保守的特異堿基序列并與之結(jié)合，對(duì)這些靶基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，進(jìn)而在澳洲堅(jiān)果體內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸及控制形態(tài)發(fā)育方面起重要作用。至于這3個(gè)澳洲堅(jiān)果TOM基因在調(diào)控其生長(zhǎng)發(fā)育及抗逆分子機(jī)制方面還有待于深入研究。

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