劉靜，穆敬平，廖恒

脊髓損傷致殘率高、治愈率低[1]，除導(dǎo)致?lián)p傷水平以下感覺、自主神經(jīng)功能障礙及軀體運(yùn)動功能損傷外，還可造成中樞性疼痛[2]。患者主觀感受為損傷水平以下皮膚痛覺已消失區(qū)域的疼痛，常表現(xiàn)為誘發(fā)痛、自發(fā)間斷痛或自發(fā)持續(xù)痛[3]。在脊髓損傷后急性期（15天內(nèi)）表現(xiàn)為急性痛超敏并伴有自發(fā)痛行為學(xué)改變[4]。在自發(fā)痛動物模型中，神經(jīng)源性疼痛的動物會出現(xiàn)損傷平面以下部位搔抓、舔咬和自噬，其中自噬現(xiàn)象是公認(rèn)的嚴(yán)重自發(fā)痛[5]。脊髓損傷誘發(fā)痛、自發(fā)間斷痛或自發(fā)持續(xù)痛的發(fā)生率達(dá)11%～94%，且重度疼痛甚至達(dá)到5%～30%，可導(dǎo)致患者藥物成癮、抑郁、甚至出現(xiàn)自殺傾向[6]。研究表明，低頻電針可提高大鼠50%足底機(jī)械縮足反應(yīng)閾值而抑制紫杉醇誘發(fā)的周圍神經(jīng)痛[7]，也可改善脊髓損傷維持期神經(jīng)痛[8]，但低頻電針是否影響脊髓損傷急性期自發(fā)痛（中樞性疼痛）的實(shí)驗(yàn)研究較少。本研究擬研究低頻電針刺激對脊髓損傷急性痛超敏和自發(fā)痛的影響，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與材料

1.1.1 動物及分組 健康SPF級雄性SD大鼠60只，63日齡，體質(zhì)量（360.2±7.4）g，購于湖北省實(shí)驗(yàn)動物中心，飼養(yǎng)于十堰市太和醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心[合格證號：SCX K(鄂)2019-0005]并在中心完成全部實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)期間滿足動物福利，術(shù)后分籠飼養(yǎng)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)器材 NeuroExam M-800A肌電圖/誘發(fā)電位儀（珠海市邁康科技有限公司）；足底熱輻射測痛儀（上海瑞鮑生物科技有限公司）；纖毛機(jī)械刺激針（von Frey hair，瑞典）；LH202H-四導(dǎo)韓氏穴位神經(jīng)刺激儀（北京華運(yùn)安特）。

1.2 方法

1.2.1 分組 采用隨機(jī)數(shù)字表編號，按隨機(jī)、對照、盲法原則將大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組和低、中、高頻電針組，每組12只。

1.2.2 大鼠脊髓損傷致急性自發(fā)痛模型 模型組和低、中、高頻電針組實(shí)驗(yàn)前禁食6 h、不禁水。10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，以L1為中心切開脊正中皮膚、分離淺肌層，暴露T13～L2椎板及棘突并用咬骨鉗咬除L1椎板，充分暴露L2節(jié)段脊髓，在長有機(jī)玻璃管（20 cm）引導(dǎo)下將銅棍（20 g）設(shè)定在15 cm處，自由墜落擊打L2節(jié)段脊髓造成3N脊髓損傷[9]。對照組手術(shù)同前，但不擊打L2節(jié)段脊髓。術(shù)后分層縫合，碘伏消毒后分籠飼養(yǎng)。隔日觀察，以大鼠雙后肢癱瘓，自發(fā)嘶叫及對軀體下部、尾部和后肢舔咬、搔抓或自噬為成功造模標(biāo)準(zhǔn)[10]。

1.2.3 治療 于術(shù)后12 h，將低、中、高頻電針組大鼠固定，參照《華興邦大鼠穴位圖譜》，選擇0.25 mm×1 mm針灸針，于T8～T12節(jié)段棘突下緣兩側(cè)4 mm處取夾脊穴，于后肢外踝與跟腱之間的凹陷中取昆侖穴，于膝關(guān)節(jié)后外側(cè)、腓骨小頭下5 mm取足三里進(jìn)針，接穴位神經(jīng)刺激儀，分別用低頻（2 Hz，2 mA）、中頻（50 Hz，2 mA）、高頻（100 Hz，2 mA）進(jìn)行針刺，25 min/次，1次/d，共14 d。對照組、模型組僅固定25 min。

1.2.4 自發(fā)痛行為學(xué)觀察 實(shí)驗(yàn)期間每天定時觀察2 h大鼠是否出現(xiàn)自發(fā)嘶叫及對軀體下部、尾部和后肢舔咬、搔抓和自噬等現(xiàn)象。

1.2.5 痛閾測定 治療結(jié)束后采用von Frey Hairs痛閾測定方法測量大鼠損傷下端軀干對非傷害性機(jī)械性輕壓和輕觸之疼痛反應(yīng)閾值，同時觀察引起50%前爪抬足的閾值。以開始后10 s內(nèi)出現(xiàn)對輕壓的嘶叫、躲避或攻擊，并出現(xiàn)抬前爪1次者為陽性；以引起5次痛反應(yīng)重力為痛反應(yīng)閾值；以橡皮撫過下端軀體皮膚引起痛反應(yīng)為對輕觸刺激的痛反應(yīng)閾值；采用足底熱輻射測痛儀檢測各組大鼠熱縮足潛伏期（thermal paw withdrawal latency，PWL）和50%機(jī) 械 性 縮 足 閾 值（paw withdrawal threshold，PWT）[9,10]。

1.2.6 體感誘發(fā)電位（somatosensory evoked potential，SEP）記錄 治療結(jié)束后麻醉大鼠，在背部正中切開皮膚，暴露L1段硬脊膜并在表面接銀絲電極，于足跟處給予電刺激（1.2～1.4 mA），記錄SEP潛伏期及N波、P波的波幅。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0軟件處理數(shù)據(jù)。符合正態(tài)分布以及方差齊性的計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 低頻電針對自發(fā)痛行為學(xué)的影響

模型組的自發(fā)疼痛行為學(xué)動作（自發(fā)嘶叫、對損傷平面以下部位、尾部和后肢的搔抓、舔咬和自噬）的發(fā)生次數(shù)較對照組增多（P＜0.05）；3個電針組的自發(fā)疼痛行為學(xué)動作的發(fā)生次數(shù)均低于模型組（均P＜0.05），且低頻電針組低于中、高頻電針組（均P＜0.05）；中、高頻電針組組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組大鼠自發(fā)痛行為學(xué)比較（次,±s）

表1 各組大鼠自發(fā)痛行為學(xué)比較（次,±s）

注：與對照組比較，①P<0.05；與模型比較，②P<0.05；與低頻電針組比較，③P<0.05

組別對照組模型組高頻電針組中頻電針組低頻電針組只數(shù)12 12 12 12 12搔抓1.02±0.02 22.87±2.09①16.03±1.21②③15.97±1.03②③10.59±0.84②舔咬0.05±0.00 13.23±1.90①10.99±0.98②③10.92±1.14②③8.79±0.71②自發(fā)嘶叫0.00±0.00 13.34±1.81①10.25±0.92②③9.13±1.24②③7.95±0.57②自噬0.00±0.00 5.97±0.38①4.26±0.52②③3.92±0.63②③3.06±0.97②

2.2 低頻電針對急性痛超敏的影響

與對照組相比，模型組脊髓損傷后急性期對非傷害性機(jī)械性輕觸、輕壓損傷軀干下端皮膚和前爪痛閾顯著降低（均P＜0.05），3個電針組的上述指標(biāo)高于模型組（均P＜0.05），且低頻電針組高于中、高頻電針組（均P＜0.05）；與對照組相比，模型組急性痛超敏發(fā)生率增高（P＜0.05），3個電針組的急性痛超敏發(fā)生率均低于模型組（P＜0.05），且低頻電針組低于中、高頻電針組（均P＜0.05）；而中、高頻電針組組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 各組大鼠急性痛超敏結(jié)果比較（±s）

表2 各組大鼠急性痛超敏結(jié)果比較（±s）

注：與對照組比較，①P<0.05；與模型比較，②P<0.05；與低頻電針組比較，③P<0.05

組別對照組模型組高頻電針組中頻電針組低頻電針組只數(shù)12 12 12 12 12機(jī)械輕壓/g 67.94±7.42 9.03±1.17①19.57±1.69②③20.54±1.72②③26.41±1.26②輕觸皮膚/g 71.58±5.76 10.61±3.34①26.36±1.02②③27.01±1.92②③33.82±2.30②輕壓前爪/g 59.54±4.24 5.61±1.05①29.14±1.31②③30.75±1.17②③36.25±2.17②急性痛超敏%0.00 11.78①8.97②③8.54②③6.09②

2.3 低頻電針對PWL和PWT的影響

與對照組相比，模型組PWL和PWT降低（均P＜0.05）；3個電針組的PWL和PWT均高于模型組（均P＜0.05），且低頻電針組高于中、高頻電針組（均P＜0.05）；中、高頻電針組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 各組PWL和PWT比較（s,±s）

表3 各組PWL和PWT比較（s,±s）

注：與對照組比較，①P<0.05；與模型比較，②P<0.05；與低頻電針組比較，③P<0.05

組別對照組模型組高頻電針組中頻電針組低頻電針組只數(shù)12 12 12 12 12 PWL 12.76±1.32 6.98±0.76①8.92±0.72②③9.05±0.69②③11.07±0.54②PWT 13.07±1.29 9.63±0.53①10.04±0.66②③10.48±0.81②③12.37±0.93③

2.4 低頻電針對SEP的影響

與對照組相比，模型組SEP潛伏期及N波、P波波幅均增加（均P＜0.05）；3個電針組的SEP潛伏期及N波、P波波幅低于模型組（均P＜0.05），且低頻電針組低于中、高頻電針組（均P＜0.05）；中、高頻電針組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

表4 各組SEP比較（±s）

表4 各組SEP比較（±s）

注：與對照組比較，①P<0.05；與模型比較，②P<0.05；與低頻電針組比較，③P<0.05

組別對照組模型組高頻電針組中頻電針組低頻電針組只數(shù)12 12 12 12 12潛伏期/ms 22.54±1.87 34.27±2.10①32.03±1.97②③32.29±1.70②③30.57±1.32②N波/mv 9.71±0.98 13.13±1.50①12.01±1.14②③12.05±1.37②③10.85±1.82②P波/mv 14.56±1.91 18.04±1.25①17.21±1.03②③17.09±1.82②③15.39±0.87②

3 討論

電針對不同類型的疼痛均有鎮(zhèn)痛作用，但電針的刺激頻率對不同病因?qū)е碌奶弁吹逆?zhèn)痛效果不同[11]。脊髓損傷后的疼痛可為痛覺過敏、痛覺超敏、自發(fā)痛等[12]，其癥狀與脊髓受損的部位和損傷程度有關(guān)[13]。

急性痛超敏和自發(fā)痛行為學(xué)改變是脊髓損傷急性期的重要表現(xiàn)，如患者在脊髓損傷后出現(xiàn)捏掐、捶打下肢等行為改變[5]。本研究模型大鼠自發(fā)疼痛行為學(xué)動作明顯增多，對非傷害性機(jī)械性輕觸、輕壓損傷軀干下端皮膚和前爪痛閾顯著降低，急性痛超敏發(fā)生率增高，PWL和PWT降低。本研究采用低、中、高3種頻率電針分別刺激夾脊穴和雙側(cè)昆侖和足三里，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3種頻率的電針均可減輕急性痛超敏和改善自發(fā)痛行為學(xué)，且低頻電針較中、高頻效果更明顯。痛閾檢查結(jié)果也顯示電針可提高脊髓損傷大鼠的PWL和PWT，低頻組效果更好。這提示電針治療有利于降低脊髓損傷大鼠的痛覺敏感性，減輕應(yīng)激性損傷[14]。

SEP可反映脊髓運(yùn)動及感覺上行通路傳導(dǎo)通路的完整性及功能狀態(tài)，脊髓損傷后上行通路纖維受損，其傳導(dǎo)的神經(jīng)沖動和同步興奮的皮質(zhì)感覺神經(jīng)元數(shù)量減少，由此上行神經(jīng)沖動傳導(dǎo)速度減慢，SEP潛伏期延長，N波和P波波幅增加[15]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒MSEP潛伏期延長、N波和P波波幅增加，提示本模型為脊髓不完全性損傷為主且疼痛持續(xù)時間延長。電針治療組SEP潛伏期縮短，N波和P波波幅降低，提示針刺可降低脊髓損傷造成的傷害性刺激持續(xù)時間，低頻效果更好。根據(jù)中醫(yī)臟腑經(jīng)絡(luò)理論推論：脊髓的功能與督脈相似，脊髓損傷可視為“督脈損傷”，用低頻微電流刺激可疏通經(jīng)絡(luò)并促進(jìn)脊髓再生[16]。而“足三里”、“昆侖”二穴具有調(diào)補(bǔ)氣血、活血化瘀等功效，在針刺治療炎性痛及神經(jīng)痛中有廣譜性與特異性[17]。這也是本研究選用基本思路。

綜上所述，低頻電針刺激T8～T12節(jié)段夾脊穴和雙側(cè)昆侖和足三里，能提高急性自發(fā)痛模型大鼠痛閾，減輕脊髓損傷致痛超敏，并改善由自發(fā)痛引起的行為學(xué)變化。