才仁卓瑪 鐵富萍 劉文清 祁果 林永霞 李長云 孫靜 羅延洪 李成 華青本 蘇必亮 河生德

摘要：對成年藏羊進(jìn)行O型口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘組合和口蹄疫、小反芻獸疫、布魯氏菌病組合聯(lián)合免疫，與單苗免疫效果進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，2種組合的安全性較好，未發(fā)生明顯免疫副反應(yīng)，同時表現(xiàn)出了與單苗一致或稍好于單苗的免疫效果，抗體合格率達(dá)到或超過了國家規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)，相互干擾和拮抗作用不明顯。

關(guān)鍵詞：藏羊;多疫苗聯(lián)合免疫;單苗免疫

中圖分類號：S858.26? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2021）07-0013-04

隨著分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、醫(yī)學(xué)生物技術(shù)等相關(guān)學(xué)科的飛速發(fā)展，新疫苗不斷被研究和開發(fā)，疫苗種類大量增加。截至2005年底，我國已經(jīng)生產(chǎn)使用的人用疫苗多達(dá)40余種。疫苗數(shù)量的增多，在預(yù)防多種傳染病的同時，也伴隨著一系列問題的產(chǎn)生，如兒童預(yù)防接種次數(shù)增加、疫苗管理難度加大、預(yù)防接種工作成本增高等。因此，開發(fā)并推廣應(yīng)用一劑可以預(yù)防多病的聯(lián)合疫苗勢在必行[1]。在家畜疫病防控方面，也面臨同樣問題，做到一劑可以預(yù)防多病的聯(lián)合疫苗開發(fā)較少，目前常見的有羊四聯(lián)疫苗、羊痘-小反芻獸疫苗等極少數(shù)疫苗。

隨著羊肉價格的提高，海晏縣高原型藏羊（以下統(tǒng)稱藏羊）養(yǎng)殖發(fā)展迅速，流通日益頻繁，導(dǎo)致藏羊疫病日趨復(fù)雜化，疫病防控難度增大。統(tǒng)計表明，海晏縣藏羊每年注射病毒類、細(xì)菌類及寄生蟲類疫苗近10種，需要抓羊進(jìn)行預(yù)防注射及驅(qū)蟲次數(shù)在12次以上，雖然通過注射欄建設(shè)等能夠緩解免疫注射過程中的部分勞動力不足等問題，但依然存在農(nóng)牧民防疫過程中抓羊負(fù)擔(dān)重、基層防疫員免疫工作任務(wù)多等問題，增加了養(yǎng)殖成本，降低了經(jīng)濟效益。為探討藏羊免疫新方法，創(chuàng)新免疫程序，降低免疫成本，減少應(yīng)激反應(yīng)，提高經(jīng)濟效益，對O型口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘及布魯氏菌病等4種青海省強制性免疫疫苗的聯(lián)合免疫與單苗免疫進(jìn)行了對比試驗，以期為多疫苗聯(lián)合免疫和獸用聯(lián)合疫苗的開發(fā)研究提供相關(guān)理論依據(jù)。

1 試驗區(qū)基本情況

96351牧場位于海晏縣東部，草原面積4萬hm2，屬高寒草甸草場。全場年存欄藏羊4.8萬只，年產(chǎn)羔羊3萬余只。根據(jù)地理布局牧場分為3個牧業(yè)生產(chǎn)大隊，屬集體管理體制。藏羊飼養(yǎng)采取放牧為主，冬春季節(jié)適量補飼玉米（按每只0.2 kg/d補飼），不同年齡、性別單獨組群，統(tǒng)一生產(chǎn)、統(tǒng)一疫病預(yù)防的飼養(yǎng)管理方法。

2 材料與方法

2.1 試驗時間與材料

2.1.1 試驗時間及地點 2019年9月至2020年3月在96351部隊牧場三大隊進(jìn)行。

2.1.2 供試藏羊 牧場三大隊一牧戶6歲經(jīng)產(chǎn)母羊群，飼養(yǎng)數(shù)量550余只。選擇有角、大小基本一致、膘情較好、臨床檢查健康母羊120只，在耳根皮下埋入電子耳標(biāo)，同時在羊角涂抹油漆加以區(qū)分不同分組。

2.1.3 供試疫苗 中農(nóng)威特生物科技股份有限公司生產(chǎn)的口蹄疫O型滅活疫苗，生產(chǎn)批號F190706J;新疆天康生物股份有限公司生產(chǎn)的小反芻獸疫活疫苗，生產(chǎn)批號2018037-2;青海生物藥品有限公司生產(chǎn)的羊痘活疫苗，生產(chǎn)批號201822;乾元浩生物股份有限公司南京生物藥廠生產(chǎn)的布魯氏菌活疫苗（S2株），生產(chǎn)批號190101。

2.1.4 檢測試劑盒 O型口蹄疫液相阻斷ELIAS抗體檢測試劑盒、小反芻獸疫競爭ELIAS檢測試劑盒、羊痘間接ELIAS抗原檢測試劑盒均購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所、批號分別為20200602133（10126）、20200527118、2020090419-1。布魯氏菌競爭ELIAS抗體檢測試劑盒，由廣州悅洋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號EB0220006，均在有效期內(nèi)。

2.2 試驗方法

2.2.1 試驗分組 試驗組分為A、B兩組，每組藏羊30只，共60只。其中，A組同時在頸部、臀部和尾根皮內(nèi)注射口蹄疫、小反芻獸疫及羊痘3種疫苗，B組同時在兩側(cè)頸部、臀部皮內(nèi)注射口蹄疫、小反芻獸疫及布魯氏菌病3種疫苗;對照組藏羊共60只，隨機分4個小組，每組15只，分別注射口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘及布魯氏菌病疫苗。

2.2.2 疫苗注射 每個組合3種疫苗由3人負(fù)責(zé)注射，分別在兩側(cè)頸部、臀部或尾根皮內(nèi)進(jìn)行注射，劑量按照說明書要求足量注射;注射部位進(jìn)行剪毛、消毒處理，注射針頭做到一畜一針。

2.2.3 免疫副反應(yīng)觀察 注苗后安排專人觀察試驗藏羊精神、采食、運動等狀況，連續(xù)觀察7 d。

2.2.4 采血及血清分離 所有羊只第1個月分別采集注射疫苗前和注射疫苗后7、14、21、28 d的頸靜脈血液，從第2個月開始每月采血1次，連續(xù)采集6個月，每次采集血液量不少于5 mL，血清分離后在 -20 ℃冰箱保存待檢。

2.2.5 實驗室檢測 對O型口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘、布魯氏菌均采用ELIAS方法進(jìn)行血清抗體水平檢測。根據(jù)ELIAS檢測試劑盒說明書進(jìn)行檢測，對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行詳細(xì)記錄并統(tǒng)計分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 免疫副反應(yīng)觀察

供試羊注射疫苗1 d后臨床抽檢，注射部位稍有紅腫，精神稍差，但均未出現(xiàn)明顯的精神不振、飲食欲減退、行動緩慢或跛行等副反應(yīng)，也未發(fā)現(xiàn)應(yīng)激死亡羊只。

3.2 O型口蹄疫免疫抗體水平檢測結(jié)果

由表1可見，A、B 兩組口蹄疫抗體水平均在注射疫苗7 d后迅速而穩(wěn)步上升，達(dá)到70%以上的陽性率，而對照組7 d后陽性率僅為57.14%。注射疫苗后，試驗A、B 組抗體水平相較于對照組明顯更高且穩(wěn)定。

3.3 小反芻獸疫免疫抗體水平

試驗藏羊在2019秋季防疫注射了小反芻疫苗，由表2可見，對照組和試驗A、 B組小反芻獸疫抗體水平在注射疫苗前均處于100%高水平狀態(tài)。注射疫苗后第184天時抗體水平仍處于穩(wěn)定和持續(xù)的高水平狀態(tài)。

3.4 布魯氏菌病抗體水平

由表3可見，羊群藏羊在2018年秋季注射布魯氏菌病S2號疫苗后，到次年秋季仍然達(dá)到了60%以上的抗體陽性率。試驗組藏羊注射疫苗后在第7天時抗體陽性率已達(dá)100%，對照組在第15天時陽性率達(dá)到100%。2個組第184天時抗體陽性率依然維持在極高的水平。

3.5 羊痘免疫抗體水平

該牧戶羊群在2018年秋季防疫期間進(jìn)行了羊痘疫苗的免疫接種，從表4可以看出，試驗羊在免疫前羊痘的抗體水平處于較高水平，注射疫苗后一直維持較高的抗體陽性率。

4 小結(jié)與討論

（1）陳泳等〔2〕用正向間接血凝法對新疆綿羊進(jìn)行了O型口蹄疫苗抗體消長情況研究，結(jié)果顯示免疫后30 d抗體陽性率達(dá)到98.6%，150 d后降到73%。姚菊霞等〔3〕研究表明，綿羊進(jìn)行口蹄疫、羊痘、小反芻獸疫3種疫苗分點注射，15 d后O型口蹄疫抗體陽性率達(dá)到最高值，稍高于單苗注射組;上述3種病毒病疫苗和羊三聯(lián)苗分點注射，結(jié)果病毒病疫苗免疫抗體檢測結(jié)果基本一致。本試驗結(jié)果顯示口蹄疫苗免疫后15 d時對照組抗體水平達(dá)到較高水平，而試驗A、B組在7 d時就達(dá)到了較高水平;試驗組和單苗對照組在184 d時其抗體陽性率依然維持在86%以上的較高水平，顯著高于其他人的試驗結(jié)果，筆者認(rèn)為多疫苗免疫對O型口蹄疫抗體產(chǎn)生具有促進(jìn)和協(xié)同作用。

（2）徐雅萍等〔4〕對湖羊小反芻獸疫免疫效果的研究結(jié)果表明，90日齡以上湖羊免疫抗體合格率明顯高于90日齡以下羊只，免疫后14 d左右可達(dá)到峰值，7個月后呈緩慢下降趨勢。本試驗開始前藏羊小反芻獸疫抗體陽性率達(dá)到100%，無法反映試驗過程中試驗組與對照組的差異，但可以說明成年藏羊每年注射1次小反芻獸疫苗，羊群抗體陽性率在1年內(nèi)可以達(dá)到極高的水平，明顯比注射1次疫苗的湖羊陽性率更高且持久。祁廣儀等〔5〕研究結(jié)果顯示，羊口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘分點注射組合和小反芻獸疫、羊痘、羊三聯(lián)苗分點注射組合，小反芻獸疫抗體陽性率在30～45d達(dá)到最高值。筆者認(rèn)為藏羊進(jìn)行的多疫苗聯(lián)合免疫，對小反芻獸疫抗體產(chǎn)生沒有明顯的干擾和抑制作用。

（3）試驗組和對照組藏羊S2布魯氏菌病疫苗注射1年后抗體平均陽性率分別維持在70%和60%，試驗組注射疫苗后其布魯氏菌病抗體陽性率在第15天時達(dá)到了峰值，154～184 d時抗體合格率依然處在100%的穩(wěn)定狀態(tài)，這比申捷等[6]的研究結(jié)論（經(jīng)1次免疫后綿羊及山羊均在第20天時血清抗體陽性率達(dá)到最高峰，之后呈下降趨勢，免疫后90 d降至14%以下）不同，其抗體水平穩(wěn)定性強且維持時間更長。與李建玲等[7]的試驗結(jié)果（S2疫苗免疫羊后14 d其血清抗體水平達(dá)到峰值，2次免疫的布魯氏菌病抗體轉(zhuǎn)陽率明顯高于單次免疫）一致。

（4）吳婷等〔8〕研究認(rèn)為湖羊羊痘疫苗免疫后第7天可產(chǎn)生較高水平的抗體，第28天左右達(dá)到峰值，第61天抗體水平合格率為85.7%。本試驗中藏羊注射羊痘疫苗1年后抗體水平仍然較高，表明每年強化免疫可以維持較高抗體水平。姚菊霞等[3]認(rèn)為，口蹄疫、羊三聯(lián)、小反芻獸疫、羊痘同時分點免疫時羊痘抗體水平要優(yōu)于單苗免疫組，本試驗結(jié)果顯示試驗組和對照組藏羊羊痘免疫抗體均能達(dá)到較高水平，未發(fā)現(xiàn)明顯的相互干擾和拮抗作用。

5 結(jié)論

O型口蹄疫、小反芻獸疫、羊痘及布魯氏菌病4種不同類型疫苗在成年藏羊中進(jìn)行不同組合聯(lián)合免疫，其安全性較好，沒有發(fā)生明顯的副反應(yīng)，同時表現(xiàn)出了與單苗一致或稍好于單苗的免疫效果，抗體合格率達(dá)到或超過了國家規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)，相互干擾、拮抗作用不明顯，在一定程度上還有協(xié)同促進(jìn)作用，建議在海晏縣今后的藏羊免疫預(yù)防中推廣使用。

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